光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性的影响论文答辩.ppt

设计（论文）题目:光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性的影响,姓名：阳启顺 班级：10生科2班 指导教师：杨红玉 教授,设计（论文）题目:光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性的影响,姓名：阳启顺 班级：10生科2班 指导教师：杨红玉 教授,提纲：,一. 课题的任务 二. 课题的目的和意义 三. 原始资料和参考文献 四. 基本内容及主要方法 五. 实验成果、结论,一. 课题的任务,1.1 制定实验方案 1.1.1查阅相关文献资料 1.1.2配制所需溶液 1.1.3准备所需的实验材料和仪器设备 1.2 实施实验方案 1.3 分析实验结果，得出结论,二. 课题的目的和意义,近年来，灰霉菌致病机制的研究越来越广泛。本课题目的在于通过将灰霉菌大分子毒素渗入到拟南芥叶片中，设置光照、黑暗为对照实验，统计观察拟南芥叶片的病情，进一步探索光照对拟南芥灰霉菌毒素抗性的影响，进而为研究灰霉菌的致病机制作出铺垫。,三. 原始资料和参考文献,杨红玉，李 湘，张一凡，李 然灰霉菌培养及其对拟南芥的侵染05 夏绍嫘，杨红玉，吴 嘉灰霉菌与其分泌毒素对拟南芥致病性比较11 夏绍嫘灰霉菌致病大分子的提取、分离及其特性鉴定云师大11 胡海林拟南芥与灰葡萄孢菌互作中ESB1基因作用初探农大13 张美丽拟南芥经灰霉菌胞外大分子毒素处理后SOD的变化09生科,四. 基本内容及主要方法,4.1 配制马铃薯蔗糖培养基、马铃薯蔗糖培养液、拟南芥种 子MS培养基。 4.2 拟南芥的栽培、管理：种子消毒铺种恒温管理。 4.3 灰霉菌的培养：接种振荡恒温（25-28）培养。,四. 基本内容及主要方法,4.4 灰霉菌大分子毒素的提取：菌体培养液过滤去菌丝 离心去上清液抽滤去除残留菌丝、孢子透析冷冻 干燥经0.45m膜过滤离心抽滤粗提液（样品）。,四. 基本内容及主要方法,4.5 灰霉菌大分子毒素蛋白浓度的测定 4.5.1紫外分光光度法（如下表）,四. 基本内容及主要方法,4.5.1紫外分光光度法（标准曲线）,四. 基本内容及主要方法,4.5.2 Bradford检测法（见下表）,四. 基本内容及主要方法,4.5.2 Bradford检测法（标准曲线）,四. 基本内容及主要方法,4.6 灰霉菌大分子毒素在光暗下侵染拟南芥的形态学观察 4.6.1 调整灰霉菌大分子毒素蛋白浓度 大分子毒素蛋白浓度测定完成后，用灭菌蒸馏水将浓度调整到 400g/ml、200g/ml。,四. 基本内容及主要方法,4.6 灰霉菌大分子毒素在光暗下侵染拟南芥的形态学观察 4.6.2 设置对照实验（如下表）,四. 基本内容及主要方法,4.6.3 将灰霉菌大分子毒素渗入拟南芥叶片中 拟南芥叶片先经 75%酒精进行表面消毒，用1ml注射器针头在叶 片上刺一小孔，用一手按住叶片背面，用1ml去针头的注射器沿针刺小孔 将毒素渗入，每片叶片渗入10l。 4.6.4 观察、统计拟南芥发病情况,五. 实验成果、结论,5.1 灰霉菌大分子毒素蛋白浓度测定结果 用紫外分光光度法测定大分子毒素的蛋白浓度，蛋白质标准曲线如 图3.1所示。实验测得待测样品在280nm下三次吸光度均值为0.490，代 入标准曲线图关系式：y=0.0006x+0.0069，解得x=809g/ml。因此，样 品浓度为809g/ml。,五. 实验成果、结论,5.1 灰霉菌大分子毒素蛋白浓度测定结果 用Bradford检测法测得样品吸光度值2.308，将该值代入标准曲线 图3.2中关系式：y=0.0029x+0.0081，解得x=793g/ml，也就是说样品 浓度为：793g/ml。由此可见，用两种方法测定灰霉菌大分子毒素蛋白 浓度所得的数据并不一致，但是相差不大。实验用浓度可取平均值 800g/ml。,五. 实验成果、结论,5.2 蛋白质浓度测定方法比较、讨论,五. 实验成果、结论,5.2 蛋白质浓度测定方法比较、讨论 本实验提取的大分子毒素量（样品）很少，在测定其浓度时，尽 量避免浪费。由以上方法可知，紫外分光光度法与考马氏亮蓝G-250需 要的样品量较少，适用于本实验，故而选择这两种方法。另外，还需考 虑所用方法的灵敏度范围。,五. 实验成果、结论,5.3 灰霉菌大分子毒素侵染拟南芥的形态学观察结果 第一天：可明显看到400g/ml、200g/ml大分子毒素侵染的叶片组织变得 透明，而此时无菌蒸馏水、BSA对照组拟南芥叶片只出现接种时留下的 伤痕，并无叶片组织变透明的现象。,五. 实验成果、结论,5.3 灰霉菌大分子毒素侵染拟南芥的形态学观察结果 第二天：接种周围叶片组织开始出现萎焉症状，且面积进一步扩大，萎 焉组织沿接种部位呈近椭圆形向四周扩散。 第三天：可看到沿接种部位病症面积未明显扩大，以接种部位为中心出 现一个近黄色“枯斑”，同时在离接种部位较远的叶缘也出现轻微卷曲或面 积大小不等的“枯斑”。 第四天：以接种部位组织为中心呈淡黄色病斑。,五. 实验成果、结论,5.3 灰霉菌大分子毒素侵染拟南芥的形态学观察结果 第五天：将症状较为明显的叶片剪下，拍照如图3.1所示。,五. 实验成果、结论,五. 实验成果、结论,从图3.1可以明显看出，光照条件下，标号1（用400g/ml大分子 毒素渗入的叶片）所示叶片，红色圈内病斑呈现为水渍、透明状，而标 号2（用400g/mlBSA渗入的叶片）、标号3（用无菌蒸馏水渗入的叶） 所示叶片无此症状。即用400g/ml大分子毒素渗入的叶片出现了病斑， 而作为对照的两种叶片没有出现病斑。这说明：光照条件下，400g/ml 大分子毒素侵染了拟南芥叶片，有一定的毒性。,五. 实验成果、结论,同样，其他对照实验，无论是光照还是黑暗条件下，只有用 400g/ml、200g/ml大分子毒素渗入的叶片侵染了拟南芥叶片， 并出现病斑。而用无菌蒸馏水、BSA渗入的拟南芥叶片无病斑出 现。,五. 实验成果、结论,根据以上结论，无论是光照条件下还是黑暗下，被浓度200g/ml、 400g/ml的大分子毒素渗入的叶片，都受到了侵染。光照条件下，拟南 芥对其抗性是否有影响还不能下定结论。也就是说，我们不能单纯地从 形态学上依据病斑大小而妄加判断，若要探究是否有影响，或说影响程 度，还需要统计发病率，测量叶片病斑大小，最后进行统计学分析，方 可下定结论。本实验仅为后续的研究作参考。,Thank you !,霉菌毒素,霉菌及霉菌中毒对猪场的危害 玉米等农作物的现状 猪场老板对于霉菌毒素的误区 防治霉菌毒素中毒的措施 常见的脱霉剂优点及缺点 霉速脱的优势,据资料统计，我国饲料和原料污染霉菌毒素超标的比例高达60-70%以上。 据估计，中国仅养猪业因受霉菌毒素影响的年损失50亿；世界上大约有25%的谷物（玉米、大豆、小麦）遭受各种霉菌的污染。然而饲料原料中的霉菌毒素80-90%来自于玉米。,霉菌及霉菌毒素对猪场的危害,霉菌是“发霉的真菌”，是丝状真菌的俗称，即在温暖潮湿的地方，农作物上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落。霉菌在谷物或饲料上生长繁殖过程中产生的次级代谢产物既是霉菌毒素。 霉菌生长的条件：易于获得的碳水化合物（如谷物）、充足的水分（湿度85%以上）、氧气、适宜的温度（12-25）。,因此，只要是条件达到，霉菌几乎是随处可见的，它广泛的存在于含淀粉的饲料或饲料原料中，这些原料在生长、收获、储藏的过程中，以及饲料加工、运输和销售的各个环节中只要条件适宜，霉菌都会代谢和产生出大量的霉菌毒素。随时危害猪场的健康。,霉菌毒素对猪场的危害,曲霉菌属（主要分泌黄曲霉毒素、赭曲霉毒素等）例如：猪场免疫程序不变、疫苗按时打，但猪群抗体水平上不去，疾病时常发生； 青霉菌属（主要分泌桔霉素等）例如：侵害肾脏，造成肾脏病变，采食量下降，多尿、软粪、下痢；,梭菌属（主要分泌呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、T-2毒素等）例如：小母猪阴门红肿，后备母猪不发情；生产母猪流产率增加，产弱仔、死胎、八字脚的比率上升，出生仔猪阴唇红肿，延长空怀期时间；猪只呕吐、拒食，采食量下降，肥育猪上市日龄推迟；,生长肥育猪 100g/kg没有临床症状，在肝脏中残留。 200g/kg以上 生长受阻，饲料利用率低，免疫抑制。肝显微受损、胆管炎，免疫抑制。生长受阻，采食量减少，被毛粗糙，黄疸，精神沉郁，厌食，部分动物死亡。大于2000g/kg急性肝病和凝血病，动物在3-10天内死亡。 母猪 不影响受孕，分娩正常仔猪，但仔猪因乳中含有黄曲霉毒素生长缓慢。,猪场老板对霉菌毒素认识误区,霉菌毒素看不见摸不着，无臭无味，所以很多人就认为只有发霉的饲料才会有霉菌毒素，没发霉的就没有霉菌毒素，这是一个误区。 以为猪场购买的原料质量是最好的，肉眼也没有观察到饲料有什么差异。其实正常情况下，饲料成品或是原料中都含有一定量得霉菌毒素，肉眼不能观察到，当贮存时饲料水分过大或是环境湿度过大都会导致霉变程度的加剧，当我们能够用肉眼辨别时，其霉变程度已非常严重。,玉米现状,有些猪场使用的是颗粒饲料，认为在制粒的过程中高热处理已杀灭了霉菌毒素。其实毒素是不会被杀死的，高温仅能杀灭霉菌或抑制霉菌的生长发育，即使是对霉菌有杀灭作用的高温仍然无法破坏霉菌毒素。,有些猪场使用小麦代替玉米，认为可以避免霉菌毒素的危害，其实小麦虽然不会像玉米那样产生赤霉烯酮，但在生长过程中极易感染赤霉病而产生呕吐毒素，对猪的危害依然十分严重。,正常玉米籽粒多为黄白色，颗粒饱满，无损害、无虫咬、虫蛀和发霉变质现象。发霉玉米可见胚部有黄色或绿色、黑色的菌丝，质地疏松，有霉味。 发霉后的玉米皮特别容易分离。 观察胚芽，玉米胚芽内部有较大的黑色或深灰色区域为发霉的玉米，在底部有一小点黑色为优质的玉米。,在口感上，好玉米越吃越甜，霉玉米放在口中咀嚼味道很苦。 在饱满度上，霉玉米比重低，籽粒不饱满，取一把放在水中有漂浮的颗粒。另外，还要警惕不法商贩用油抛光已经发霉的玉米并进行烘干的处理，还有一些不法分子将已经发芽的玉米用除草剂喷洒，再进行烘干销售。 玉米粒发黑的，是长时间高湿高温造成的；胚芽外皮有绿的，是脱粒早，来不及晒造成的；胚芽皮内发绿或发黑的，是闷时间过长的原因。,霉菌毒素的危害是由其四个特点决定的： 种类多,广泛存在于饲料原料中； 毒性大，中毒剂量低； 对机体损伤大，破坏肝脏功能等，且可在体内蓄积； 霉菌毒素结构稳定，不容易被破坏。如黄曲霉毒素裂解温度为280。,防治措施注意以下几点：,保存饲料的仓库必须保持干燥、清洁，饲料下面要有垫底。上方及周围要留有空隙，使空气流通。在多雨季节，可用塑料袋密封贮存饲料，抑制霉菌繁殖。 采购原料时加强检查其质量，防止发霉变质的原料入库。,控制饲料原料的含水量，要求水分在14以下，对含水量高的应及时晾晒。 饲喂畜禽时，做到饲料少给勤添注意清除饲料结块现象：饲槽、饮水器要经常进行彻底的清洗和消毒；饲料还必须经常进行翻晒以防饲料霉变。 根据饲料的情况适当添加防霉剂。,常见脱霉剂的优点及缺点,蒙脱石即观音土，具有很强的吸附能力和离子交换能力。 只不过是蒙脱石需要从膨润土中提纯精制而得普通的铝硅酸盐类吸附剂是单极性物质，只能吸附黄曲霉毒素，且会吸附饲料中的营养成分。 中草药制剂：通过提高肝脏本身对毒素的解毒能力来达到解除霉菌毒素的作用。 一些中药本身就具备了抗氧化的作用。,同乐独威的优势,霉速脱为纯中药制剂。高效、绿色、绝对安全，选材上乘、工艺精湛、配方独特，其中的关键品种特殊技术处理，大大提高了药物的吸收利用率，改善饲料适口性，使药效得到了最大限度的发挥。 霉速脱能够高效地吸附饲料中的毒素，同时能加速已蓄积在体内脂肪中霉菌毒素的排出，有效保障畜禽健康。,霉速脱具有选择性、特异性吸附作用，不吸收、不破坏饲料中的营养成分，对畜禽无任何不良影响，可长期放心添加。 霉速脱具有促细胞免疫，增强抗病力，长期添加能有效防治霉菌毒素引起的免疫抑制。 霉速脱对霉菌毒素造成的小母猪阴门水肿有神奇效果。 霉速脱与霉菌毒素有高度亲和力，与其它吸附剂相比同乐独威对霉菌毒素的吸附率最高，是市面上最好的脱霉剂。,千万里我追寻着你！,实证说明：,徐水郭晓星（录像）,小肠是吸收霉菌毒素的主要场所，霉菌毒素对猪的消化道粘膜有强腐蚀性，会导致肠粘膜脱落、坏死，从而影响对营养物质的吸收，最终形成饲料便，造成严重的饲料浪费，增加养殖成本。 改变饲料的营养成分，同时对养分的吸收利用率下降10%,增加料肉比，延长出栏时间。 霉菌在消耗营养物质的过程中分解饲料中的,