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维生素B1的测定,营养0901 徐燕萍 张晶荧 赵莎莎 赵小娟,. 结构与性质,嘧啶 亚甲基 噻唑 连成的季铵盐化合物,维生素B1,又称硫胺。分子式C12H17ClN4OS。它是人体必需的13种维生素之一,是一种水溶性维生素,属于维生素B族,为无色结晶体,溶于水,在酸性溶液中很稳定,在碱性溶液中不稳定,易被氧化和受热破坏。,测定意义,由于人体不能自行合成维生素B1,必须从食物中摄取。因此,人体需依赖食物提供足够的维生素B1,测定各种食品维生素B1含量多少将对食品营养价值评价十分重要。如果由于食物摄入量不足,或因食物的加工、运输、储存、烹饪不当,使维生素B1受到破坏或损失,都会造成维生素B1的缺乏。因此,食品中的维生素B1测定对指导食品加工、保存、膳食营养配比等都有一定的意义。,维生素B1是人体能量代谢,特别是糖代谢所必需的,故人体对它的需要量通常与摄取的热量有关。当人体的能量主要来源于糖类时,维生素B1的需要量最大。 成人的建议每日摄取量是1015mg。妊娠、哺乳期每天摄取1516mg;在生病、生活紧张、接受手术时,要增加必要用量。,来源简介 维生素B1广泛存在于天然食物中,含量较丰富的有:动物内脏(肝、心及肾)、肉类、豆类、花生及精细加工的谷物类。谷物类是我国人民的主食,也是维生素B1的主要来源。但过分去除麸皮与糠,维生素B1损失很多,烹调加碱可使维生素B1损失增高。,维生素B1的测定方法: 分光光度法; HPLC法; 荧光分光光度法等。,分光光度法,分光光度法是将维生素B1生成游离型后,与重氮化试剂对氨基苯乙酮反应,生成紫红色色素,移至二甲苯中测定其浓度。本法灵敏度差,只适用于食品中维生素B1含量高的试样。,高效液相色谱法,把维生素B1衍生化后导入高效液相色谱仪,经柱分离,通荧光检测器测定。本法适用于体系复杂的样品,干扰严重时采用此法。,荧光法,这里我们主要介绍荧光法 参考GB/T 5009.84-2003 食品中硫胺素(维生素B1)的测定,方法原理,试样在酸性溶液中加热,提取维生素B1,经蛋白分解酶处理,使维生素B1成为游离型。再经层析柱纯化,去除荧光淬灭物质,同时浓缩,用碱性铁氰化钾溶液将其氧化成硫色素,在紫外线下,硫色素发出荧光,再给定的条件下以及没有其他物质干扰时,此荧光之强度与硫色素量成正比即与溶液中维生素B1量成正比。,操作步骤,1.样品处理 样品采集后用匀浆机打成匀浆于低温冰箱中冷冻保存,用时将其解冻后使用。,2.样品提取,3.净化,a.脱脂棉铺于盐基交换管的交换柱底部,再加约1g活性人造浮石使之达到交换柱的1/3高度。b.用移液管加入提取液2060ml。c.加入约10ml热蒸馏水冲洗交换柱,弃去洗液,重复三次。d.加入20ml50g/L酸性Kcl,收集此液于25ml刻度试管内。凉至室温,用250g/L酸性Kcl定容至25ml,即为净化液。,做空白试验 重复上述操作,将20ml维生素B1标准使用液加入盐基交换管以代替试样提取液,即得到标准净化液。,4.氧化,将5ml试样净化液分别加入A、B两个反应瓶; 同时将5ml标准净化液分别加入A1、B1两个反应瓶中。,Maizel-Gerson 反应瓶,氧化流程,反应瓶要同时振摇,准确计时90s.,5、测定,荧光测定条件: 激发波长365nm;发射波长435nm;激发波狭缝5nm;发射波狭缝5nm。 依次测定下列荧光强度: a. 样品空白荧光强度(样品反应瓶A); b. 标准空白荧光强度(标准反应瓶A1); c. 样品荧光强度(样品反应瓶B); d. 标准荧光强度(标准反应瓶B1);,6.计算,式中:X样品中硫胺素含量,mg/100g; U样品荧光强度; Ub样品空白荧光强度; S标准荧光强度; Sb标准空白荧光强度; c硫胺素标准工作液浓度,g/ml; V用于净化的硫胺素标准工作液体积,ml; V1样品水解后定容之体积,ml; V2样品用于净化的提取液体积,ml; m样品质量,g;,试剂作用,1、蛋白分解酶:用于试样的蛋白分解。2、盐酸:水解样品。3、氯化钾:该热溶液可从盐基交换管中的浮石里解析出维生素B1。4、铁氰化钾碱性溶液:氧化游离的维生素B1,生成硫色素。5、正丁醇:溶解紫外荧光物质硫色素试剂。,注意事项,1 、加热酸性Kcl时不能使其沸腾,热Kcl滤速较快,而不沸则是使其不至因过饱和而在洗涤中结晶析出阻塞交换柱。 2、 紫外线会分解破坏维生素B1,所以维生素B1形成后要快速测定。 3、 氧化中加铁氰化钾是整个实验的关键,对每个样品所加试剂的次序、快慢、振摇时间等都必须尽量一致,尤其是用正丁醇提取硫色素时必须保证准确振摇90s。,谢谢!,
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