灭菌方法与无菌操作--课件

任务四任务四 灭菌方法与常用灭菌设备灭菌方法与常用灭菌设备1ppt课件欣弗事件欣弗事件2ppt课件同时，黑龙江省哈医大二院收治同时，黑龙江省哈医大二院收治9 9例因使用例因使用“欣弗欣弗”而产生不良反应的而产生不良反应的患者。他们的年龄在患者。他们的年龄在2020岁至岁至7575岁之间，均是在当地医院或在药店中购买岁之间，均是在当地医院或在药店中购买“欣弗欣弗”后在诊所静脉点滴的。结束后，这后在诊所静脉点滴的。结束后，这9 9名患者均出现寒颤、发冷、名患者均出现寒颤、发冷、发热等症状，其中发热等症状，其中5 5例伴有顽固性低血压性休克，例伴有顽固性低血压性休克，4 4例出现意识障碍。例出现意识障碍。20062006年年7 7月月2727日，青海省药监局最先向国家药监局报告，日，青海省药监局最先向国家药监局报告，在青海省西宁市部分患者使用了在青海省西宁市部分患者使用了“安徽华源安徽华源安徽华源安徽华源”生产的生产的“欣弗欣弗欣弗欣弗”注射液后，先后出现注射液后，先后出现胸闷、心悸、肾区疼痛、腹胸闷、心悸、肾区疼痛、腹胸闷、心悸、肾区疼痛、腹胸闷、心悸、肾区疼痛、腹痛、过敏性休克、肝肾功能损害痛、过敏性休克、肝肾功能损害痛、过敏性休克、肝肾功能损害痛、过敏性休克、肝肾功能损害等严重不良反应。等严重不良反应。随后，广西、浙江、山东等地也相继出现了相同药物所引发的严重随后，广西、浙江、山东等地也相继出现了相同药物所引发的严重不良反应病例。不良反应病例。3ppt课件女女童童父父亲亲抚抚着着女女儿儿的的遗遗照照悲恸不已哈哈哈哈尔尔尔尔滨滨滨滨因因因因静静静静点点点点欣欣欣欣弗弗弗弗致致致致死死死死女女女女童童童童生生生生前前前前照照照照片片片片湖南教师因注射欣弗导致死亡，亲属悲痛欲绝湖南教师因注射欣弗导致死亡，亲属悲痛欲绝湖南教师因注射欣弗导致死亡，亲属悲痛欲绝湖南教师因注射欣弗导致死亡，亲属悲痛欲绝西安一患者注射欣弗后病危西安一患者注射欣弗后病危西安一患者注射欣弗后病危西安一患者注射欣弗后病危孩子盼望妈妈快快醒来孩子盼望妈妈快快醒来孩子盼望妈妈快快醒来孩子盼望妈妈快快醒来4ppt课件5ppt课件国家食品药品监督管理局会同安徽省食品国家食品药品监督管理局会同安徽省食品药品监督管理局对安徽华源生物药业有限公司药品监督管理局对安徽华源生物药业有限公司进行现场检查。经查，该公司进行现场检查。经查，该公司20062006年年6 6月至月至7 7月月生产的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液生产的克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液未按未按未按未按批准批准批准批准的工艺参数灭菌的工艺参数灭菌的工艺参数灭菌的工艺参数灭菌，降低灭菌温度，缩短灭菌时，降低灭菌温度，缩短灭菌时间，增加灭菌柜装载量，影响了灭菌效果。间，增加灭菌柜装载量，影响了灭菌效果。经经中国药品生物制品检定所中国药品生物制品检定所中国药品生物制品检定所中国药品生物制品检定所对相关样品进对相关样品进行检验，结果表明，无菌检查和热原检查均不行检验，结果表明，无菌检查和热原检查均不符合规定。符合规定。安徽华源生物药业有限公司安徽华源生物药业有限公司违反规定生产，违反规定生产，是导致这起不良事件是导致这起不良事件的主要原因。的主要原因。6ppt课件 药品监管部门根据药品监管部门根据中华人民共和国药品管理法中华人民共和国药品管理法中华人民共和国药品管理法中华人民共和国药品管理法有关有关规定，对安徽华源生产的规定，对安徽华源生产的“欣弗欣弗”药品按药品按劣药劣药劣药劣药论处。论处。并作出如下并作出如下处理处理处理处理决定：决定：安徽华源生物药业有限公司因生产劣药被收回安徽华源生物药业有限公司因生产劣药被收回大容量注射剂生产资格和大容量注射剂生产资格和“欣弗欣弗”药品批准文号，药品批准文号，企业负责人被撤职。企业负责人被撤职。由安徽省食品药品监督管理局没收该企业违法所得，并处倍罚款；由安徽省食品药品监督管理局没收该企业违法所得，并处倍罚款；安徽省食品药品监督管理局监督该企业停产整顿，回收该企业的大容量安徽省食品药品监督管理局监督该企业停产整顿，回收该企业的大容量注射剂；注射剂；由国家食品药品监督管理局撤销该企业的由国家食品药品监督管理局撤销该企业的“欣弗药品的批准文号，委托欣弗药品的批准文号，委托安徽省食品药品监督管理局收回批件；安徽省食品药品监督管理局收回批件；对安徽华源召回的对安徽华源召回的“欣弗欣弗”药品，由安徽省药监部门依法监督销毁。药品，由安徽省药监部门依法监督销毁。7ppt课件8ppt课件基本概念基本概念无菌无菌 在一定的物体或介质中无任何活的微生物。灭菌灭菌 应用物理或化学等方法将物体上或介质中所有微生物及其芽胞全部杀死（包括所有细菌繁殖体和芽孢）消毒消毒 以物理或化学等方法杀灭物体上或介质中的病原微生物（芽孢和非病原微生物不一定能杀死）防腐防腐/抑菌抑菌 用物理或化学等方法抑制微生物的生长和繁殖9ppt课件D D值值：在一定灭菌温度下被灭菌物品中微生物数减少：在一定灭菌温度下被灭菌物品中微生物数减少90%90%所需时间。所需时间。Z Z值值：在一定温度下对特定的微生物灭菌时，降低一个：在一定温度下对特定的微生物灭菌时，降低一个lgDlgD所需升高所需升高的温度数，即灭菌时间减少到原来的的温度数，即灭菌时间减少到原来的1/101/10时所要升高的温度或相同时所要升高的温度或相同灭菌时间内，杀灭灭菌时间内，杀灭99%99%的微生物所需提高的温度，单位为的微生物所需提高的温度，单位为。一、一、一、一、D D D D与与与与Z Z Z Z值在灭菌中的意义与应用值在灭菌中的意义与应用值在灭菌中的意义与应用值在灭菌中的意义与应用10ppt课件11ppt课件F F值值：是为了比较不同灭菌温度的灭菌效果而设计的一个指标。在：是为了比较不同灭菌温度的灭菌效果而设计的一个指标。在一定灭菌温度一定灭菌温度T T，给定，给定Z Z值所产生的灭菌效果，与设计的参比温度值所产生的灭菌效果，与设计的参比温度ToTo给定给定Z Z值所产生的灭菌效果相同时所相当的时间，单位为值所产生的灭菌效果相同时所相当的时间，单位为minmin。F F0 0值值：是是指指在在一一定定灭灭菌菌温温度度（T T）、Z值值为为10所所产产生生的的灭灭菌菌效效果果与与121、Z值为值为10所产生的灭菌效果相同时所相当的时间。所产生的灭菌效果相同时所相当的时间。是是将将被被灭灭菌菌物物品品在在灭灭菌菌过过程程中中不不同同的的受受热热温温度度与与时时间间折折算算到到与热压与热压121121、Z Z值为值为1010灭菌时热效力相当的灭菌时间。灭菌时热效力相当的灭菌时间。二、二、二、二、F F F F与与与与F F F F0 0 0 0值在灭菌中的意义与应用值在灭菌中的意义与应用值在灭菌中的意义与应用值在灭菌中的意义与应用蒸气灭菌蒸气灭菌12ppt课件13ppt课件 也就是说，不管温度如何变化，也就是说，不管温度如何变化，t分钟内的灭菌效果，相分钟内的灭菌效果，相当于在当于在121灭菌灭菌F0分钟的效果，即他把所有温度下的灭分钟的效果，即他把所有温度下的灭菌效果都转化成菌效果都转化成121下灭菌的等效值下灭菌的等效值14ppt课件物理灭菌法物理灭菌法干热灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法湿热灭菌法紫外线灭菌法紫外线灭菌法辐射灭菌法辐射灭菌法微波灭菌法微波灭菌法滤过灭菌法滤过灭菌法化学灭菌法化学灭菌法气体灭菌法气体灭菌法浸泡与表面消毒法浸泡与表面消毒法化学药剂灭菌法化学药剂灭菌法无菌操作法无菌操作法无菌检查法无菌检查法灭菌方法灭菌方法灭菌方法灭菌方法红外接种环灭菌红外接种环灭菌三、灭菌方法与常用灭菌设备三、灭菌方法与常用灭菌设备三、灭菌方法与常用灭菌设备三、灭菌方法与常用灭菌设备15ppt课件一、物理灭菌法一、物理灭菌法一、物理灭菌法一、物理灭菌法 干热空气穿透力弱，温度不易均匀，而且灭菌温度较高，故不干热空气穿透力弱，温度不易均匀，而且灭菌温度较高，故不适宜用于大部分药品及橡胶、塑料制品的灭菌。适宜用于大部分药品及橡胶、塑料制品的灭菌。（一）干热灭菌法（一）干热灭菌法干热灭菌法是利用火焰或干热空气进行灭菌的方法。干热灭菌法是利用火焰或干热空气进行灭菌的方法。1.火焰灭菌法火焰灭菌法2.干热空气灭菌法干热空气灭菌法 适宜于不易被火焰损伤的瓷器、玻璃和金属制品等器具的灭菌。适宜于不易被火焰损伤的瓷器、玻璃和金属制品等器具的灭菌。16ppt课件（二）湿热灭菌法（二）湿热灭菌法一、物理灭菌法一、物理灭菌法一、物理灭菌法一、物理灭菌法利用饱和水蒸气或沸水进行灭菌的方法。利用饱和水蒸气或沸水进行灭菌的方法。分类分类 热压灭菌、流通蒸汽灭菌、煮沸灭菌和低温间歇灭菌等。热压灭菌、流通蒸汽灭菌、煮沸灭菌和低温间歇灭菌等。特点特点 湿热蒸气比热大，穿透力强；湿热蒸气比热大，穿透力强；细菌在湿热条件下菌体吸收水分，蛋白质较易凝固；细菌在湿热条件下菌体吸收水分，蛋白质较易凝固；水蒸气与物品接触而凝结成水，放出汽化热，提高温度，水蒸气与物品接触而凝结成水，放出汽化热，提高温度，加速细菌死亡。加速细菌死亡。17ppt课件1.1.热压灭菌法热压灭菌法 在高压灭菌器内，利用高压水蒸气杀灭微生物的方法，称为热在高压灭菌器内，利用高压水蒸气杀灭微生物的方法，称为热压灭菌法。压灭菌法。本法是公认的最经典、最可靠的灭菌方法本法是公认的最经典、最可靠的灭菌方法，经热压灭菌处理，经热压灭菌处理，能杀灭被灭菌物品中的细菌增殖体和芽胞，故凡能耐热压灭菌的药能杀灭被灭菌物品中的细菌增殖体和芽胞，故凡能耐热压灭菌的药物制剂，均可采用。物制剂，均可采用。卧式热压灭菌柜卧式热压灭菌柜18ppt课件1.1.热压灭菌法热压灭菌法热压灭菌所需的温度、压力与时间热压灭菌所需的温度、压力与时间19ppt课件卧式热压灭菌柜示意图卧式热压灭菌柜示意图20ppt课件21ppt课件热压灭菌器操作热压灭菌器操作 注意问题：注意问题：（1）使用前应认真检查灭菌器的主要部件是否正常完好。）使用前应认真检查灭菌器的主要部件是否正常完好。（2）灭菌时，必须首先将灭菌器内的冷空气排出。）灭菌时，必须首先将灭菌器内的冷空气排出。（3）灭菌时间必须从全部待灭菌物品达到预定的温度时算起，并维持规）灭菌时间必须从全部待灭菌物品达到预定的温度时算起，并维持规定的时间。定的时间。1.1.热压灭菌法热压灭菌法灭菌柜灭菌柜22ppt课件热压灭菌器操作热压灭菌器操作 注意问题：注意问题：（4）灭菌完毕后停止加热，待压力表逐渐下降至零，才能放出锅内蒸气，）灭菌完毕后停止加热，待压力表逐渐下降至零，才能放出锅内蒸气，锅内外压力相等后，开启灭菌器，待被灭菌物品温度下降至约锅内外压力相等后，开启灭菌器，待被灭菌物品温度下降至约80时，时，才可以把灭菌器的门全部打开，这样可有效避免内外压相差太大或冷空才可以把灭菌器的门全部打开，这样可有效避免内外压相差太大或冷空气突然进入而造成锅内玻璃瓶炸裂、药液冲出锅外的事故发生。气突然进入而造成锅内玻璃瓶炸裂、药液冲出锅外的事故发生。1.1.热压灭菌法热压灭菌法23ppt课件2.流通蒸气灭菌法与煮沸灭菌法流通蒸气灭菌法与煮沸灭菌法3.低温间歇灭菌法（又称为低温间歇灭菌法（又称为“巴斯德灭菌法巴斯德灭菌法”）4.影响湿热灭菌的因素影响湿热灭菌的因素微生物的种类和数量微生物的种类和数量药物与介质的性质药物与介质的性质蒸气的性质蒸气的性质灭菌时间灭菌时间湿热灭菌湿热灭菌饱和蒸气饱和蒸气湿饱和蒸气湿饱和蒸气过热蒸气过热蒸气不饱和蒸气不饱和蒸气在常压下使用在常压下使用100 流通蒸气加热杀灭流通蒸气加热杀灭微生物的方法。灭菌时间微生物的方法。灭菌时间30-60 min不不能保证杀灭所有的芽孢，非可靠灭菌方能保证杀灭所有的芽孢，非可靠灭菌方法。法。v待灭菌物品放在沸水中解热灭菌法。待灭菌物品放在沸水中解热灭菌法。24ppt课件通过热蒸汽或沸水使蛋白质变性而杀灭微生物的方法。湿热穿透力强，灭菌效果较干热好。煮沸或流通蒸汽灭菌：常压下沸水和蒸汽的温度是100，一般处理3060min可杀死细菌繁殖体，但不能完全杀灭芽孢。此法适用于不能高压蒸汽灭菌的物品。低温间隙灭菌（巴斯德灭菌法）：将物品先用6080加热（或煮沸）1h，然后置2025保存24h（或常温过夜），使其中残存的芽孢萌发成繁殖体，再用以上条件灭菌，如此反复三次。本法适用于不耐高温或高温下易变质的物品，但很费时。25ppt课件热压灭菌法：影响灭菌的因素：（1）不同细菌的不同发育时期与数量，繁殖期对热的抵抗力大于衰老期，细菌芽孢的耐热性更强。细菌越少灭菌时间越短。（2）药物性质与灭菌时间，达到有效灭菌的前提下可适当选择灭菌时间和温度。26ppt课件热压灭菌法：影响灭菌的因素：（3）蒸气的性质：蒸气有饱和蒸气，湿饱和蒸气和过饱和蒸气。饱和蒸气含热量高，热的穿透力较大，灭菌效力高，湿饱和蒸气有水分，穿透力差，灭菌效力低。过热蒸气温度高于饱和蒸气，但穿透力差，灭菌效力低。（4）介质的性质，制剂中含有营养物质，增强细菌的抗热性，细菌也受pH值的影响，中性环境中的耐热性最好，碱性次之，酸性不利于细菌的发育。27ppt课件（三）紫外线灭菌法（三）紫外线灭菌法 紫外线的穿透能力弱，但能穿透清洁的空气和纯净的水，因而广泛紫外线的穿透能力弱，但能穿透清洁的空气和纯净的水，因而广泛用于空气灭菌与表面灭菌。用于空气灭菌与表面灭菌。灭菌波长：灭菌波长：220290nm 灭菌力最强：灭菌力最强：254 257nm适宜温度：适宜温度：10 55 相对湿度：相对湿度：45%60%灭菌时间：灭菌时间：0.5 1h一、物理灭菌法一、物理灭菌法一、物理灭菌法一、物理灭菌法28ppt课件（四）微波灭菌法（四）微波灭菌法 微波通常是指频率在微波通常是指频率在 300MHz到到300kMHz 之间的电磁波。之间的电磁波。一、物理灭菌法一、物理灭菌法一、物理灭菌法一、物理灭菌法29ppt课件（五）辐射灭菌法（五）辐射灭菌法 辐射灭菌又称电离辐射灭菌，是利用辐射灭菌又称电离辐射灭菌，是利用-射线射线或或-射线射线进行照射，穿进行照射，穿透物品杀灭微生物而达到灭菌目的的方法。透物品杀灭微生物而达到灭菌目的的方法。60C0-射线是高能射线，穿透力强，不仅绝大数生物体对射线敏感，射线是高能射线，穿透力强，不仅绝大数生物体对射线敏感，而且适用于较厚样品，特别是已包装密封物品的灭菌，灭菌效果可靠，而且适用于较厚样品，特别是已包装密封物品的灭菌，灭菌效果可靠，并可有效地防止并可有效地防止“二次污染二次污染”。一、物理灭菌法一、物理灭菌法一、物理灭菌法一、物理灭菌法30ppt课件（五）辐射灭菌法（五）辐射灭菌法一、物理灭菌法一、物理灭菌法一、物理灭菌法一、物理灭菌法辐射灭菌法的辐射灭菌法的特点特点 不升高灭菌产品的温度，穿透性强，适合于维生素、抗不升高灭菌产品的温度，穿透性强，适合于维生素、抗生素、激素、医疗器械、高分子材料等的灭菌。生素、激素、医疗器械、高分子材料等的灭菌。辐射灭菌法的辐射灭菌法的缺点缺点 设备费用高，有些药物灭菌后疗效可能降低，对液体药设备费用高，有些药物灭菌后疗效可能降低，对液体药剂的稳定性也有影响，同时还要注意安全防护问题。剂的稳定性也有影响，同时还要注意安全防护问题。辐射灭菌法的辐射灭菌法的原理原理 射线可直接破坏细菌射线可直接破坏细菌DNA，导致微生物死亡。，导致微生物死亡。31ppt课件二、滤过除菌法二、滤过除菌法二、滤过除菌法二、滤过除菌法 滤过除菌法，利用物理阻流的作用，主要用于不耐热的低黏度药物滤过除菌法，利用物理阻流的作用，主要用于不耐热的低黏度药物溶度和相关气体物质的洁净除菌处理。溶度和相关气体物质的洁净除菌处理。（一）微孔薄膜滤器（一）微孔薄膜滤器 是目前应用最广泛的滤过除菌器，一般是目前应用最广泛的滤过除菌器，一般应选应选用用0.22m以下孔径的滤膜作滤材。以下孔径的滤膜作滤材。32ppt课件 垂熔玻璃滤器的滤板孔径有多种规格，上海玻璃厂的垂熔玻璃滤器的滤板孔径有多种规格，上海玻璃厂的6号号(孔径孔径2m以以下下)、长春玻璃总厂的、长春玻璃总厂的G6号号(孔径孔径1.5m以下以下)和天津滤器厂的和天津滤器厂的IG6号号(孔径孔径2m以下以下)三种规格滤板制成的垂熔玻璃滤器可以作为滤过除菌器使用。三种规格滤板制成的垂熔玻璃滤器可以作为滤过除菌器使用。（二）垂熔玻璃滤器（二）垂熔玻璃滤器33ppt课件繁殖期微生物大小约为繁殖期微生物大小约为1m，芽孢大小约，芽孢大小约0.5 m或者更小或者更小。34ppt课件（三）砂滤棒（三）砂滤棒应用滤过除菌法的注意事项应用滤过除菌法的注意事项 药液均应经过预滤处理，一般先用粗滤装置滤除较大颗粒的杂药液均应经过预滤处理，一般先用粗滤装置滤除较大颗粒的杂质，再用砂滤棒或质，再用砂滤棒或G5、G4号垂熔玻璃滤器滤除微细沉淀物或较大杆菌号垂熔玻璃滤器滤除微细沉淀物或较大杆菌、酵母菌，最后再用微孔薄膜滤器或、酵母菌，最后再用微孔薄膜滤器或G6号垂熔玻璃滤器滤过，并收集号垂熔玻璃滤器滤过，并收集滤液及时分装。滤液及时分装。必须无菌操作，必要时在滤液中还须添加适当的防腐剂。必须无菌操作，必要时在滤液中还须添加适当的防腐剂。35ppt课件（三）砂滤棒（三）砂滤棒应用滤过除菌法的注意事项应用滤过除菌法的注意事项对新使用或已多次重复使用的滤器，须检查滤过除菌的效果，必要时可测对新使用或已多次重复使用的滤器，须检查滤过除菌的效果，必要时可测定滤器的孔径或采样作细菌学检查。定滤器的孔径或采样作细菌学检查。36ppt课件三、化学灭菌法三、化学灭菌法三、化学灭菌法三、化学灭菌法使病原体蛋白质变性，发生沉淀；使病原体蛋白质变性，发生沉淀；与细菌的酶系统结合，影响其代谢功能；与细菌的酶系统结合，影响其代谢功能；降低细菌的表面张力，增加菌体胞浆膜降低细菌的表面张力，增加菌体胞浆膜 的通透性，使细胞破裂或溶解。的通透性，使细胞破裂或溶解。化学药品杀菌化学药品杀菌或抑菌的机制或抑菌的机制 化学灭菌法是使用化学药品杀灭微生物，达到灭菌目的的方法。化学灭菌法是使用化学药品杀灭微生物，达到灭菌目的的方法。化学灭菌法一般包括气体灭菌法和浸泡与表面消毒法。化学灭菌法一般包括气体灭菌法和浸泡与表面消毒法。灭菌指示剂灭菌指示剂37ppt课件杀菌谱广；杀菌谱广；有效杀菌浓度低；有效杀菌浓度低；作用速度快；作用速度快；性质稳定，不易受有机物、酸、碱及其他物理、化学因素的影响；性质稳定，不易受有机物、酸、碱及其他物理、化学因素的影响；三、化学灭菌法三、化学灭菌法三、化学灭菌法三、化学灭菌法理想的化学灭菌剂应具备下列条件：理想的化学灭菌剂应具备下列条件：38ppt课件易溶于水，可在低温下使用；易溶于水，可在低温下使用；毒性低，对物品无腐蚀性，不易燃烧爆炸；毒性低，对物品无腐蚀性，不易燃烧爆炸；无色，无味，无臭，灭菌后易于从被灭菌物品上除去，无残留；无色，无味，无臭，灭菌后易于从被灭菌物品上除去，无残留；价格低廉，来源丰富，便于运输。价格低廉，来源丰富，便于运输。三、化学灭菌法三、化学灭菌法三、化学灭菌法三、化学灭菌法理想的化学灭菌剂应具备下列条件：理想的化学灭菌剂应具备下列条件：灭菌生物指标灭菌生物指标39ppt课件三、化学灭菌法三、化学灭菌法三、化学灭菌法三、化学灭菌法1.环氧乙烷灭菌法环氧乙烷灭菌法2.甲醛蒸气熏蒸灭菌法甲醛蒸气熏蒸灭菌法3.其他蒸气熏蒸灭菌法其他蒸气熏蒸灭菌法1.醇类醇类2.酚类酚类3.表面活性剂表面活性剂4.氧化剂氧化剂5.其他其他（一）气体灭菌法（一）气体灭菌法（二）浸泡与表面消毒法（二）浸泡与表面消毒法40ppt课件五、无菌操作法（自学）五、无菌操作法（自学）五、无菌操作法（自学）五、无菌操作法（自学）六、无菌检查法（自学）六、无菌检查法（自学）六、无菌检查法（自学）六、无菌检查法（自学）1.无菌操作室的灭菌无菌操作室的灭菌 无菌操作室的空气应定期灭菌，常用甲醛、丙二醇或乳酸等蒸气熏蒸。无菌操作室的空气应定期灭菌，常用甲醛、丙二醇或乳酸等蒸气熏蒸。2.无菌操作无菌操作1.无菌检查法无菌检查法2.中成药的中成药的微生物学检查与活螨检查微生物学检查与活螨检查41ppt课件