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分子生物学复习题第十九章 分子生物学常用技术一、 单选题 1. “Sourthern Blotting”指的是 (A) 将DNA转移到膜上，用DNA做探针杂交 (B) 将RNA转移到膜上，用DNA做探针杂交 (C) 将DNA转移到膜上，用蛋白质做探针杂交 (D) 将RNA转移到膜上，用RNA做探针杂交 (E) 将DNA转移到膜上，用RNA做探针杂交 2. 分子杂交试验不能用于 (A) 单链DNA分子之间的杂交 (B) 单链DNA与RNA分子之间的杂交 (C) 抗原与抗体分子之间的结合 (D) 双链DNA与RNA分子之间的杂交 (E) RNA与RNA之间的杂交 3. 探针是经过什么标记的核酸分子 (A) 用放射性同位素标记 (B) 用生物素标记 (C) 用地高辛标记 (D) A、B、C都对 (E) 用抗体标记 4. 下列哪一条在分子印渍技术中不适用 (A) DNA向NC膜转移 (B) 蛋白质向PVDF膜转移 (C) DNA向尼龙膜转移 (D) RNA向NC膜转移 (E) 蛋白质向一号滤纸转移 5. 用于核酸杂交的探针至少应符合下列哪条 (A) 必须是双链DNA (B) 必须是双链RNA(C) 必须是单链DNA (D) 必须是 100bp以上的大分子DNA (E) 必须是蛋白质 6. 核酸斑点杂交试验中可省略的步骤是 (A) 电泳 (B) 核酸样品固定于NC膜 (C) 杂交信号检测 (D) 标记探针 E) 制备样本核酸 7. 免疫印渍技术中不适合应用的步骤是 (A) 聚丙烯酸胺凝胶电泳 (B) 用NC膜或PVDF膜 (C) 靠毛细管作用进行转移 (D) 用同位素标记抗体(E) 用非同位素标记抗体 8. 原位杂交是指 (A) 在NC膜上进行杂交操作 (B) 在组织切片或细胞涂片上进行杂交操作 (C) 直接将核酸点在NC膜上的杂交 (D) 在PVDF膜上进行杂交操作 (E) 在凝胶电泳中进行的杂交 9. 有关DNA链末端终止法的不正确说法是 A) 需要ddNMP (B) 需要ddNTP (C) dNTP：ddNTP的比例要合适 (D) 需要放射性同位素或荧光染料 (E) 需要dNTP 10. 有关DNA序列自动化测定的不正确叙述是 (A) 用荧光代替了同位素标记 (B) 激光扫描分析代替人工读序 (C) 基本原理与手工测序相同 (D) 不再需要引物 (E) 需要与手工序列分析相同的模板 11. 某种遗传性疾病是由一个点突变（无限制性内切酶位点变化）引起，可以 (A) 用DNA单链构象多态性分析突变 (B) 用限制性片段长度多态性分析突变 C) 用 Western Blotting分析突变 (D) 用电泳分析基因组DNA (E) 用电泳分析细胞中的所有蛋白质 12. 免疫印渍技术指的是 (A) 结合在膜上的蛋白质分子与抗体分子结合 B) 结合在膜上的DNA分子与抗体结合 (C) 结合在膜上的RNA分子与抗体结合 (D) 结合在膜上的DNA分子与RNA分子结合 (E) 结合在膜上的免疫分子与DNA的结合 13. 同位素标记探针检测NC膜上的RNA分子(A) 叫做Northern Blotting (B) 叫做Southern Blotting (C) 叫做Western Blotting (D) 蛋白分子杂交 (E) 免疫印渍杂交 14. 用做探针的DNA分子必须 (A) 在杂交前变性 (B) 在杂交前复性 (C) 长于30个核着酸 (D) 短于30个核着酸 (E) 是双链分子 二、填空题 1 只要 DNA 或 RNA 的单链分子之间存在着一定程度的_ ，就可以在不同的分子间形成_ 。 2 利用_ 使胶中的生物大分子或大分子的片段_ ，可使之成为固相化分子。 3 存在于 NC 膜上的生物分子可以放到杂交液中，与_ 进行_ 。 4 Southern blotting 主要用于_ 的分析，也可以用于_ 。 5 Northern blotting 主要用于检测_ 的表达水平以及比较_ 表达情况。 6 蛋白质的印渍分析，也称为_ 。7 目前 DNA 序列的手工测定或自动化测定所基于的技术原理一为 _，二为_ 法。 8 限制性片段长度多态性分析（ RFLP ）是利用_ DNA 分子再经_ 即可检测出突变 DNA 。 9 基因转移技术包括_ 水平的基因转移，而且可以进行_ 水平的转移。 10 在转基因技术中，被导人的目的基因称为_ ，目的基因的受体动物称为_ 。 11 单链构象多态性分析（ SSCP ）的原理基于 DNA 单链具有_ 特点，这种特点的形成取决于_ 。12.就克隆一个基因（DNA片段）来说，最简单的质粒载体必须具备三个部分： 、 、 。一个理想的质粒载体最好分子量 。13.为了防止DNA的自身环化，可用 脱去双链DNA 。14.l噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基因组的 的范围内。15.受体细胞的感受态是_ _。人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为_时吸附DNA, _时摄入DNA。16.A/T cloning 是利用 Taq 酶 的性质 。17.RNA干扰过程中三个重要组成元件是 ， ， 和 。18.PCR扩增反应中一个循环的三个步骤依次是 ， ， 和 。19.用于荧光定量PCR标记的Taqman水解探针是在PCR循环中的 阶段中发光。20 DNA芯片的原理为 ，蛋白质芯片的原理为 。21.常规PCR技术是 对PCR扩增反应的 进行定性及定量分析；荧光定量PCR技术对PCR扩增反应中 的产物进行定量分析。22.PCR反应体系中除了含有Mg2+的缓冲体系外，还要具备 、 和 等四大要素。23.假定表达一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达载体的三个基本条件：(1)_ _ _ (2) _ _(3) _。24.较常用的定点诱变方法一般有两种即 和 。25.基因克隆时，应根据所要分离的外源基因的大小选择合适的载体，这些载体通常包含有 噬菌体、YAC 以及 、 和 等。26.蛋白质双向电泳中的第一向和第二向分别是 和 27.l噬菌体载体由于受到包装的限制，插入外源DNA片段后，总的长度应在噬菌体基因组的 的范围内。28.为了防止DNA的自身环化，可用 脱去双链DNA 。29.载体按照功能可分为 载体和 载体两类。三、名词解释题 1 DNA 印渍技术 2 RNA 印渍技术 3 蛋白质印渍技术 4 探针（ probe ） 5 基因敲除6 限制性片段长度多态性分析（ RFLP ） 7. DNA 芯片 8.RT-PCR 9.CT值 10.感受态细胞11.双向电泳12单链多态构象分析（ SSCP ）13.定点诱变技术14.实时定量PCR 15.SiRNA 16.TaqMan探针17.DNA指纹图谱五、问答题 1 核酸分子杂交的主要实验方法有哪些？主要用途是什么？ 2 基因转移和基因剔除技术在医学上可能有哪些用途？ 3 简述 RFLP 和 SSCP 检测基因突变的原理。 4 简述 DNA 末端合成终止法测定 DNA 序列的原理？ 5. PCR的基本原理是什么?用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息?6.简述将一个基因从mRNA到克隆到表达载体的过程（列出所需关键的酶和注意点）？7.简述用RNAi技术减低目的基因表达水平的机理？8.酵母双杂交的原理是什么？9.引物是 PCR 反应体系的四大要素之一， PCR 的许多应用都是通过引物设计来实现的，请问引物设计的一般原则是什么？10.何为 -互补？如何利用 -互补来筛选插入了外源 DNA 的重组质粒？11.何谓基因克隆？简述基因克隆的基本过程。第二十章 基因重组与基因工程一选择题1. F因子从一个细胞转移至另一个细胞的基因转移过程称为 (A) 转导(B) 转化 (C) 转座 (D) 转染 (E) 接合 2. 通过自动获取或人为地供给外源DNA使受体细胞获得新的遗传表型，称为 (A) 转化 (B) 转座 (C) 接合 (D) 转导 (E) 转染 3. 由插人序列和转座子介导的基因移位或重排称为(A) 接合 (B) 转染 (C) 转导 (D) 转座 (E) 转化 4. 由整合酶催化、在两个DNA序列的特异位点间发生的整合称 (A) 位点特异的重组 (B) 同源重组 (C) 随机重组 (D) 基本重组 (E) 人工重组 5. 限制性核酸内切酶切割DNA后产生 (A) 5磷酸基和3羟基基团的末端 (B) 5磷酸基和3磷酸基团的末端 (C) 5羟基和3羟基基团的末端 (D) 3磷酸基和5羟基基团的末端 (E) 以上都不是 6. 可识别并切割特异DNA序列的称(A) 非限制性核酸外切酶 (B) 限制性核酸内切酶 (C) 限制性核酸外切酶 (D) 非限制性核酸内切酶 (E) DNA酶（DNase） 7. 在重组DNA技术中催化形成重组DNA分子的是DNA (A) 解链酶 (B) 聚合酶 (C) 连接酶 (D) 内切酶 (E) 拓扑酶 8. 在重组DNA技术领域所说的分子克隆是指 (A) 建立多克隆抗体 (B) 建立单克隆抗体 (C) 有性繁殖DNA (D) 无性繁殖DNA (E) 构建重组DNA分子 9. 在下述双链DNA序列（仅列出其中一条链序列）中不属于完全回纹结构的是 (A) GGAATTCC (B) TGAATTCA (C) AGAATTCT (D) CGTTAAGC (E) AGATATCT 10. 无性繁殖依赖DNA载体的最基本性质是 (A) 卡那霉素抗性 (B) 青霉素抗性 (C) 自我复制能力 (D) 自我表达能力 (E) 自我转录能力 11. 在已知序列的情况下获得目的DNA最常用的是 (A) 筛选cDNA文库 (B) 筛选基因组文库 (C) 化学合成法 (D) 聚合酶链式反应 (E) DNA合成仪合成 12. 重组DNA技术领域常用的质粒DNA是 (A) T病毒基因组DNA的一部分 (B) 细菌染色体外的独立遗传单位 (C) 细菌染色体DNA的一部分 (D) 真核细胞染色体外的独立遗传单位 (E) 真核细胞染色体DNA的一部分 13. 某限制性内切核酸酶按GGGCGCCC方式切割产生的末端突出部分含 (A) l个核苷酸 (B) 2个核苷酸 (C) 3个核苷酸 (D) 4个核苷酸 (E) 5个核苷酸 14. 某限制性内切核酸酶切割5GGGGGGAATTCC3序列后产生 (A) 5突出末端 (B) 5或3突出末端 (C) 5及3突出末端 (D) 3突出末端 (E) 平末端 15. 直接针对目的DNA进行筛选的方法是 (A) 氨苄青霉素抗药性 (B) 青霉素抗药性 (C) 分子杂交 (D) 分子筛 (E) 电泳 16. “克隆”某一目的DNA的过程不包括 (A) 重组DNA分子导人受体细胞 (B) 外源基因与载体的拼接 (C) 基因载体的选择与构建 (D) 筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞 (E) 表达目的基因编码的蛋白质 17. 表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是 (A) 酵母表达体系 (B) 原核表达体系 (C) Ecoli表达体系 (D) 昆虫表达体系 (E) 哺乳类细胞表达体系 18. 不能用作克隆载体的DNA是 (A) 质粒DNA (B) 噬菌体DNA (C) 细菌基因组DNA (D) 腺病毒DNA (E) 逆转录病毒DNA 19. 克隆的基因组DNA可在多种系统表达，例外的是 (A) Ecoli表达体系 (B) 昆虫表达体系 (C) 酵母表达体系 (D) 哺乳动物细胞表达体系 二、填空题 1 通过自动获取或人为地供给外源 _ ，使细胞或培养的受体细胞获得新的 _ ，这就是转化作用。 2 由 _ 和 _ 介导的基因移位或重排，称为转座。 3 基因重组有两种类型，即 _ 和 _ 。 6 一个完整的基因克隆过程应包括：目的基因的获取， _ 的选择与改造， _ 的连接，重组 DNA 分子导人受体细胞，筛选出含感兴趣基因的重组 DNA 转化细胞。 7 限制性核酸内切酶是一类识别 _ 的 _ 核酸酶。 8 科学家感兴趣的外源基因又称 _ ，其来源有几种途径：化学合成，酶促合成 cDNA ，制备的基因组 DNA 及 _ 技术。 9 外源 DNA 离开染色体是不能复制的。将 _ 与 _ 连接，构建成重组 DNA 分子，外源 DNA 则可被复制。 10 根据采用的克隆载体性质不同，将重组 DNA 分子导人细菌的方法有 _ 、 _ 及感染。 三、名词解释题 1 质粒 2 限制性内切酶 3 ，载体4 DNA 克隆 5 目的基因 6 cDNA 文库 7 基因组 DNA 文库 8 回文结构 9 转座 四、问答题 1 何谓基因克隆？简述基因克隆的基本过程。 2 何谓限制性核酸内切酶？写出大多数限制性核酸内切酶识 DNA 序列的结构特点。 3 何谓目的基因？写出其主要来源或途径。 4 解释质粒，为什么质粒可作为基因载体。 5 解释基因载体，说出哪些 DNA 可作为基因的载体。 6 简述 E coli 和真核表达体系各自的优、缺点。 7. 何为 -互补？如何利用 -互补来筛选插入了外源 DNA 的重组质粒？8. 为了绘制长为3.0Kb BamH 限制性片段的限制性图谱，分别用EcoR 、Hpa 、EcoR + Hpa 消化这个片段的三个样品，然后通过凝胶电泳分离DNA片段，EB染色后观察DNA带型（如下图）。请根据这个结果，绘制一个限制性内切图谱，要标明EcoR 和Hpa 识别位点间的相对位置，以及它们之间的距离（Kb）。9.打算在细菌中表达一种稀有的人类某种蛋白质，以便能够大量制备这种蛋白。为确 保分离纯化，决定将一段6个组氨酸的短肽加到该蛋白质的N端或C端。这些带有组氨酸标签的蛋白质能够紧紧地同Ni2+柱结合，但很容易被EDTA或咪唑溶液洗脱。此法可以一步完成大量蛋白质的纯化。 下图是编码该蛋白的核苷酸序列。请设计一对PCR引物，各含有18个同该基因同源的核苷酸，能够用于扩增该基因的编码序列，另外，在N端有一个起始密码，其后是6个组氨酸密码子（组氨酸密码子为CAT）。另外设计一对引物，能够在C端加上6个组氨酸和一个终止密码。 N末端 M A T R R A A5-GGT CGT ATG GCT ACT CGT CGC GCT GCT CTT GCT GCA AGT CTC TCT TAG AAG TGT-3 L A A S L S * C末端第二十一章 基因诊断与基因治疗一、选择题1. 内源基因的变异并不包括 (A) 基因结构突变 (B) 基因重排 (C) 病原体基因侵人体内 (D) 基因表达异常 (E) 基因扩增 2. 病原体基因侵人人体主要引起哪种疾病？ (A) 遗传病 (B) 肿瘤 (C) 心血管疾病 (D) 传染病(E) 高血压3. 内源基因结构突变发生在生殖细胞可引起哪种疾病？ (A) 遗传病(B) 肿瘤(C) 心血管疾病(D) 传染病(E) 高血压4. 下列何种方法不是基因诊断的常用技术方法(A) 核酸分子杂交(B) 基因测序(C) 细胞培养(D) RFLP分析(E) PCR5. 目前认为最为确切的基因诊断方法是(A) 核酸分子杂交(B) 基因测序(C) 细胞培养(D) RFLP分析(E) PCR6. 下列哪种方法不是目前基因治疗所采用的方法(A) 基因缺失(B) 基因矫正(C) 基因置换(D) 基因增补(E) 自杀基因的应用7. 目前基因治疗中选用最多的基因载体是(A) 质粒(B) 噬菌体(C) 脂质体(D) 逆转录病毒(E) 腺病毒相关病毒8. 下列哪种方法不属于非病毒介导基因转移的物理方法？ (A) 电穿孔(B) 脂质体介导(C) DNA直接注射法(D) 显微注射(E) 基因枪技术9. 下列哪种方法属于非病毒介导基因转移的化学方法？(A) 电穿孔(B) 基因枪技术(C) DNA直接注射法(D) 显微注射(E) DEAE一葡聚糖法10. 利用正常机体细胞中不存在的外源基因所表达的酶催化药物前体转变为细胞毒性产物而导致细胞死亡的基因治疗方法是(A) 基因灭活(B) 基因矫正(C) 基因置换(D) 基因增补(E) 自杀基因的应用11. 利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是 (A) 基因灭活 (B) 基因矫正 (C) 基因置换 (D) 基因增补 (E) 自杀基因的应用 12. 通过目的基因的非定点整合，使其表达产物补偿缺陷基因的功能或加强原有功能的基因治疗方法是 (A) 基因灭活 (B) 基因矫正 (C) 基因置换 (D) 基因增补 (E) 自杀基因的应用 13. 将变异基因进行修正的基因治疗方法是 (A) 基因灭活 (B) 基因矫正 (C) 基因置换 (D) 基因增补 (E) 自杀基因的应用 二、填空题 1 基因变异致病的主要类型是_ 和 _。 2 内源基因的变异可分为_ 和_ 。 3 ，基因诊断的常用诊断技术是_ 和_ 。 4 对已知基因突变位点的检测需人工合成两种寡核着酸探针，一种是与_ 互补的寡核苷酸，另一种是与_ 互补的寡核苷酸。 5 目前用作基因转移载体的病毒有逆转录病毒_ 和_ 。 6 目前基因治疗中导人基因的方式有_ 和_ 。 7 在体外实验研究中，将基因导人哺乳动物细胞的方法有_ 和_ 两大类。 8 非病毒介导的基因转移方法可分为_ 和_ 两类。 三、名词解释题 1 基因诊断2自杀基因 3基因治疗 4RFLP 5 Ex vivo四、问答题 1 基因诊断的特点是什么？ 2 试述内源基因结构突变的主要类型以及内源基因结构突变所致的疾病。 3 简述核酸分子杂交的基本原理。 4 目前基因诊断可应用于哪些疾病？ 5 当前基因治疗拟采用哪些方法？