泌尿系统与男性生殖系统药效学研究设计方法.ppt

泌尿系统与男性生殖系统药效学研究的设计和方法 天马行空官方博客 第一节急性肾功能衰竭药一 试验设计的医学基础急性肾功能衰竭 简称ARF 是危急重症 属中医 癃闭 关格 肾风 等范畴 其临床表现主要是小便点滴而下 或点滴全无 起病往往突然发作 治疗乃根据 腑以通为用 的原则 着重于通 实证宜清湿热 散瘀结 利气机而通水道 虚证宜补脾肾 助气化而达到小便自通的目的 改善少尿 氟质血症和肾小管坏死是治疗ARF药效学的主要研究内容 二 药效学研究的实验设计 一 急性肾衰动物模型l常用动物模型 1 大鼠血红蛋白尿ARF模型 以甘油肌内注 24h后即有尿素氮升高 少尿或无尿等类似人的ARF症状 2 犬去甲肾上腺素模型 雄性犬麻醉以适当的去甲肾上腺素经 侧肾动脉连续滴注 引起肾流量急剧下降 同侧输尿管收集的尿量也相减少等一系列肾衰症状 3 犬夹闭肾动脉引起的ARF模型 麻醉犬用外科手术暴露肾动脉夹闭1h 引起的缺血性肾功能衰竭 4 汞剂引起的动物ARF模型 以适当剂量的氯化汞静脉注射家兔 皮下或静脉给大鼠 l 2日引起肾小管损伤 出现急性肾功能障碍的 系列变化 5 大鼠抗生素ARF模型 大剂量抗生素 庆大霉素 给大鼠腹腔注射 通过影响肾小管上皮细胞膜脂代谢及抑制线粒休的能量代谢 造成肾小管损害 引起尿量改变及尿蛋白和尿素氮升高等急性症状 2观察指标 1 生化指标 血肌酐 BUN 血清尿素氮 Scr 水平 24h肌酐 尿素总排出量 24h肌酐清除率 2 尿常规检查 24h总尿量 24h蛋白和管型等 3 病理形态学检查 4 其他可供分析的指标 血清总蛋白和白蛋白 对主要以损害肾小管功能的模型 如庆大霉素ARF模型可选择NAG酶及溶菌酶作为观察指标反映肾小管损伤的严重程度 3 方法学评价 1 ARF模型较多 从机制分为缺血性和中毒性 一般认为大鼠血红蛋白尿性ARF模型二种机制均有 接近于人的创伤性ARF 特别是积压综合征 在此模型早期 肾血管阻力增加 肾血流量减少 肾皮质区域的血管重度收缩 如所试药物可能有类似于异博定的降低肾血管力 增加肾血流量等作用 采用此模型较适当 本模型所用动物价廉易得 方法简便 病变稳定 在 定时间内做动态观察 也可用家兔 以便多次采血检查 此模型是新药药效较常用的模型 2 家犬去甲肾上腺素及家犬夹闭动脉引起的ARF模型均属缺血性ARF 机制相同 所用动物相同 3 汞剂引起的ARF属于中毒性ARF模型 特点为简单易行 病变较稳定 用家兔 大鼠 小鼠作模型动物 天马行空官方博客 二 相关药效学试验和机制研究1 辅助试验对能反映解除主症有作用的其他试验 如药物的利尿作用 血管扩张作用对高血钾 酸中毒的控制作用 以及药物对其他原因引起的氮质肌症的影响 均可酌情选用 2 作用原理研究如用水清除率 截流分析实验 肾小管微穿刺技术等探时药物作用部位和功能 这研究对了解新药特点很有意义 三 阳性对照药 1 地塞米松 2 维拉帕米 异博定 三 急性肾衰动物模型建立方法 一 大鼠血红蛋白尿ARF模型1 原理肌内注射甘油后 大鼠肾血流减少 肾小管内皮细胞肿胀 增大了肾血管阻力 血管节段性坏死 外膜纤维化 血管自身调节功能丧失 导致肾小球滤过下降 另外 肾小球及肾小管用围纤维蛋白沉积 血臂内血液淤积 血栓形成 血流不畅 导致肾小球滤过率下降 肾小管坏死 2 操作方法采用体重150 250g雄性大鼠 置代谢笼中 纪录正常饮水量从尿量 用药前禁水24h 选体重减轻并有脱水的大鼠以50 甘油按10ml kg分别在两侧后肢肌内注射 大鼠自由进食和饮水 般于2h后出现血红蛋白尿 48h形成稳定模型 1 5日内进行实验 3 造模成功指标和药物疗效观察 1 24h尿量较对照组明显减少 尿蛋白明显升高 2 BUN Set明显增高 血清总蛋白减少 3 血清K Na增高 4 病理学检杳可见明显的肾小管病变 所试药物的药效可根据用药后对以上指标的改善来评价 结果进行组间比较 统计学处理采用t检验 4 注意点 1 个别大鼠叫在肌注甘油后 肾脏损害过重而北亡 2 禁水24h后体重减轻明显 脱水严重的大鼠选作实验动物效果较好 二 犬去甲肾上腺素ARF模型l原理去甲肾上腺素引起肾血管收缩而致肾小球的血流减少 肾小球滤过减少 组织缺血 缺氧加重对肾组织损害从而产生ARF 2 操作方法取10 20kg雄性家犬 以戊巴比妥钠30mg kg 静脉注射麻醉后 于术分离 侧输尿管 插入管收集尿液 从肾动脉按每分钟0 75ug kg 滴注去甲肾上腺素 连续40min停药 1 4h内可进行实验 对照组用地塞米松或右旋糖酐 静脉注射 肾衰阴性对照组用等量生理盐水 每组动物至少5只 3 药物疗效的评价指标 1 尿量及尿常规检查 用药前1h及用药1h 2h 4h后 2 BUN Scr 血清总蛋白和白蛋白 血清K和Na 药前1h及用药1h 2h 4h后 3 病理学检查 所试药物的药效可根据以上指标的改善来坪价 结果进行检验作组间比较 4 注意点 1 集尿套管内应预充满温水并防止导臂弯曲而阻碍尿液通畅 2 实验前勿给高蛋白饮食 如肉类 否则影响BUN水平 三 犬夹闭肾动脉引起的ARF模型1 操作方法取10 20kg雄性家犬 以戊巴比妥钠30ug kg静脉汴射麻醉 于术暴露左侧肾动脉 夹闭1h后放开 使血流再通 从侧输尿骨导管收集尿液 肾衰阳性对照组用地塞米松 0 1mg kg 或右旋糖酐 相对分子质量75000 10ml kg 静脉注射 肾衰阴性对照组 只手术 不夹闭肾动脉 用等量生理盐水 每组动物至少5只 2 原理 评价指标等同犬去甲肾上腺素模型 天马行空官方博客 四 汞剂引起的动物ARF模型1 原理一般认为是由于汞离子经肾小球滤过后 被肾小管上皮细胞重吸收 并在细胞内累积 与细胞膜和细胞内巯基 一SH 和二硫基 一S一S一 等结合 影响酶活性 受累细胞由于汞 硫反应而损害细胞及其膜的功能与结构 细胞呼吸功能丧失 变性坏死 并部分脱落于管腔中阻塞肾小管 使原尿通过受阻 受损的肾小管通透性增高 原尿漏出并返回肾血管 因而产生少尿 无尿 原尿漏至肾间质 形成间质水肿 压迫肾小管 氯化汞中毒还可引起肾血流重新分布 肾皮质缺血 髓质淤血 肾小管滤过减少 也是引起ARF的原因之 2 操作方法2kg以上的健康成年家兔 雌雄均可 以氯化汞2 5mg kg 次静脉注射 氯化汞可用生理盐水或蒸馏水配成适当浓度的溶液 测定前3日的血 尿的尿素氮和肌酐含量 取平均值作自身对照 注射氯化汞后的的5日 每天作同样测定 以后可改为隔天或多日测1次 至肾功能正常 进行尿常规检查 3 注意点 1 HgCl2溶液必须是新鲜配制 2 精确收集24h尿 在收集甜内事先加入少量甲苯 以防腐败 3 实验动物所食饲料 青菜不加限制 五 庆大霉素ARF模型1 原理大剂量氨糖类杭生索 AG 在动物体内大部分以原形从尿中排出 小部分被近端小管吸收 导致药物在肾皮质蓄积 抑制肾皮质细胞溶酶体内的磷脂酶A和C 导致磷脂 磷脂酰肌醉在溶酶体内菖积 溶酶体由于磷脂的沉积 最后破裂而致细胞损伤 此外 AG还作用于线粒体氧化磷酸化 造成肾小管损伤 2 操作方法Wistar雄性大鼠 体重250 300g 腹腔注射庆大霉素140mg kg 体重 共7日 治疗组动物注射的同时给药物 阳性药用维拉帕米 每大鼠每日灌胃15mg kg 体重 空白对照则给溶剂 3 评价指标 1 尿量及尿常规检查 2 BUN Scr 血清总白和白蛋白 血清K和Na 3 尿NAG酶反溶曲酶的检查 4 病理组织学检查 第二节慢性肾功能衰竭药一 实验设计的医学基础慢性肾功能衰竭 简称CRF 由于多种慢性肾患发展到晚期 肾实质损害引起肾功能严重损害 体内氮质及其代谢产物潴留 不能维持体内水 电解质及酸碱平衡而引起临床症状 是一危重综合征 祖国医学虽无CRF这个病名 但根据其发病 症状及演变规律 可归纳为 关格 癃闭 溺毒 虚劳 等 患者多见倦怠乏力 气短懒言 纳差腹胀 恶心呕吐 四肢麻木 皮肤瘙痒 腰腿酸软 面色晦暗 肌肤甲错 舌淡有齿痕或色紫暗并有瘀斑 舌苔白滑或厚腻 脉沉弱 综上所述属脾肾气虚证并兼有湿浊或瘀血 故以 健脾益肾 通腑降浊 活血化瘀 法治疗 现代医学则以改善肾功能 促进氮质化合物等毒素的排出 纠正水 电解质和酸碱紊乱 纠正贫血等方法以延缓病程进展 二 药效学研究的实验设计 一 对疾病动物模型的治疗作用试验1 常用动物模型 1 大鼠腺嘌呤CRF模型 大鼠经含0 5 0 75 腺嘌吟 adenine 饲料喂养引起的 2 大鼠5 6肾切除的CRF模型 经两期外科手术切除大鼠5 6肾造成的CRF 3 大鼠经液氮冷冻肾脏引起的模型 和模型 2 相似 只是用冷冻代替一期手术的大部分切除 4 小鼠电凝摘除肾脏CRF模型 以电烧灼小鼠右侧肾表面 2星期后摘除左肾的外科手术制作的模型 5 其他模型 如柔红霉素 阿霉素等致大鼠CRF模型 根据新药可能的作用机制特点选择适当的模型 以上模型的具体建立方法将在后面叙述 试验治疗的给药途径应与临床一致 2观察指标 1 各组动物血液毒素物质的比较 一般认为尿毒症毒素物质应具备以下几个条件 该物质的理化性质和结构明确 血液中的浓度增高 该物质与CRF特定的临床发现相关 随血液中该物质浓度降低 临床症状和体症改善 在肾功正常的实验动物中能用该物质复制与CRF类似的临床症状 目前已从CRF患者中分离出约200种蛋白质代谢产物 其中100多种物质成分比止常值高 这些毒素物质分为小分子 相对分子质量小于500 如肌酐 尿素氮 胍类和胺类 中分子 相对分子质量为500 5000 大分子 相对分子质量大5000 如旁腺索 生长激素等 凡是公认为CRF毒素物质应当是反应新药疗效最主要的指标 目前临床和评价药效多用的观察指标是肌酐 尿素氮 2 其他可供分析的指标 各组动物间体重 死亡率的比较 尿量及尿液成分分析 主要为尿蛋白含量的比较 各组动物红细胞数 血红蛋白和红细胞比积的比较 各组动物间血钠 钙 磷 钾等电解质含量的比较 肾脏组织病理学观察 二 相关药效学试验1 血压试验按常规方法观察药物对大鼠血压的影响 2 利尿试验用水负荷大鼠或CRF模型大鼠常规方法观察药物有无利尿作用 三 阳性对照药1 包醛氧淀粉或爱西特 活性炭 适用于以吸附肠道毒素来促进毒裹排除 缓解症状的新药 2 尿毒清颗粒刑适用降低毒素 改善肾功能为主要功效 用于慢性肾功能衰竭 氮质血症和尿毒症早期的新药 3 地塞米松地塞米松0 1mg kg 体重 肌内注射 每日一次 属非特异性作用 可减轻病情 三 动物模型建立方法 一 大鼠腺嘌呤CRF模型1 原理高浓度腺嘌吟通过黄嘌呤氧化酶的作用生成极难溶于水的2 8 二羟腺嘌吟 后者沉积在肾小管 影响了氮质化合物的排世 导致氮质血症 毒素蓄积从电解质和氨基酸代谢紊乱 最终引起肾功能衰竭 2 制作方法用含0 75 腺嘌吟 adenine 饲料喂养大鼠 每日投放量约350mg kg 体重 全部动物自由摄取饲料和饮水 3 造模成功的指标和药物疗效观察大鼠随着进食腺嘌吟饲料的日数增加而日渐消瘦 畏寒拱背 体毛脱落 生长抑制 多尿 血肌酐 尿素氮水平升高 喂饲2星期后可见升高 中分子物质水平升高 电解质代谢紊乱 高磷 高钾 低钠 低钙等 氨基酸紊乱 主要为必需氨基酸降低 贫血 病理学观察表明 肾脏明显增大 第八星期较肾脏大4倍多 肾组织内有大量腺嘌崎代谢物结晶沉积 大部分肾小管破坏 有淋巴细胞浸润 局部纤维纵织增生 药物疗效观察 1 一般观察 动物的体重 尿量 体毛和 般活动状况 2 生化及血液检查 3 尿液检查 24h尿量及尿蛋白总量 4 肾脏病理形态学观察 肉眼及组织学观察 有条件时可作病理切片的图像分析 4 注意点 1 为了减少差异 最好用雄性动物 2 采血时应特别住意防溶血 3 配制饲料时 腺嘌呤要充分与饲料混合均匀 4 亦可配成含0 5 腺嘌呤的饲料 二 大鼠5 6肾切除的CRF模型1 原理大鼠5 6肾切除后残余在肾单位中血液动力学改变 引起残余肾单位的高滤过蛋白尿 导致肾小球硬化为主要特点的CRF 2 制作方法大鼠用戊巴比妥钠30 35mg kg体重腹注射麻醉 局部剪毛 常规皮肤消毒 背左侧或腹部切口 充分暴露左侧肾肌 剥离肾包膜 迅速切除上 下极 以明胶海绵压迫止血 然后分层缝合 术后7 10日行第二次手术 同样方法麻醉 右侧背部切开暴露右肾 结扎肾蒂 摘除右肾 3 造模成功的指标和药物疗效观察大鼠伤口应无出血和感染 术后大鼠体重明显下降 食量 活动量均减少 体毛疏松不齐 术后7日可山现蛋白尿 BUN Scr水平逐渐升高 电解质紊乱 氨基酸代酣紊乱 贫血 组织病理学观察 可见残余肾脏代偿性增大 镜检可见肾小球毛细管扩张 内皮细胞肥大 系膜基质增生 大鼠上皮内皮细胞坏死 毛细管腔消失的肾小球玻璃样变性从硬化的病理过程 药物的疗效观察基本同腺嘌呤 4 注意点 1 手术要熟练 最好由1人切除 以减少损伤误差 2 手术注意防止损伤肾上腺 摘除肾脏时要结肾蒂 3 切除肾脏时最好在腹膜外进行 尽量不打开腹膜进入腹腔 以减少感染机会 4 如果用药时间长或需要损伤程度轻 可在手术前用低蛋白饲料 5 应设假手术组代替正常动物对照组 三 大鼠经液氮冷冻肾脏引起的CRF模型1原理与大鼠5 6肾切除的CRF模型基本相同 2操作方法实验用成年健康大鼠 雄性 体重200 300g 注射戊巴比妥钠40mg kg 体重 麻醉 常规消毒皮肤 背部一侧切口 分离肌层 暴露左肾 用食指从腹部相应部位轻轻向上顶起 肾脏即滑出皮肤切口外面 这样便操作 然后剥离筋膜 将预先浸入液氮瓶内的冷刀依次在肾脏的上下极和外侧前后共4个位 每处冷冻40s 然后复位肾脏 分层缝合 2星期后 以同样的操作二期手术 摘右肾 术后6 12星期呈现稳定的模型 3造模成功的指标和药物疗效观察等与大鼠5 6肾的模型同 4注意用该模型评价新药药效成功的关键是冷冻损伤肾脏的程度要适当 多人操作 应冷冻损伤度一致 四 小鼠电凝摘除肾脏CRF模型1原理烧灼小鼠右肾表面2星期后左肾摘除 烧灼肾皮质坏死 肾小球 肾小管大量破坏 残余肾单位的功能代偿性增强 形成以肾小球硬化 肾间质组织纤维化为主要特点的模型 2 制作方法小鼠麻醉后 背右侧切口0 8cm 暴肾脏 剥离周围脂肪组织及肾包膜 用电烧灼电凝右肾表面 深度约1mm 保留距肾门周围2mm的皮质部分不受烧灼 将经烧灼的肾脏放回 缝合肌层与皮肤 操作全过程不超过l0min 14日后二期手术 依法麻醉 摘除左肾 3 注意点 1 电灼烧要掌握好深浅度 最好1人操作以减少误差 2 小鼠血清肌酐水平甚低 0 1mg dl 常规方法测不出 第三节慢性肾炎药一 实验设计的医学基础慢性肾炎 慢性肾小球肾炎 属中医 水肿 水气 肿胀 等范畴 是较难治的症 病因难除 常见有肺肾气虚 脾肾阳虚 肝肾虚 水湿 湿热 血瘀 其临床表现为水肿 高血压 蛋白尿 血尿及肾功能损伤等 现代医学认为 慢性肾炎仅少数是由急性肾炎发展来 而大多数由病理类型决定其病情必然迁延发展 起病即为慢性 治疗慢性肾炎的中药 应有 治本作用 去外 内致病因子的继续作用 治标作用 二 药效学研究的实验设计 一 对慢性肾炎动物模型的治疗作用实验1常用动物模型 1 兔Masugi模型 以抗兔 大鼠 肾血清静肺注射兔 至蛋白尿出现 形成模型 2 大鼠Heymann模型 以大鼠肾皮质匀浆弗氏完全佐剂制成同种免疫复合物 给同种大鼠腹腔注射 至蛋白尿出现 形成模型 3 兔C BSA血清免疫复合物肾炎模型 以天然牛血清蛋白 C BSA 静脉注射给家兔 形成模型 2观察指标 尿蛋白定量 血肌酐及血尿素氮 病理学检查 二 阳性对照药药典或中成药中用治疗慢性肾炎的新药 均可用作对照药 与待测药物一样 给药剂量以临床成人给药剂量来计算 三 慢性肾炎动物模型建立方法 一 兔 或大鼠 Masugi肾小球肾炎模型1 原理本方法用羊抗兔血清引起兔或大鼠肾小球肾炎 2 操作方法本模型为抗肾小球基底膜肾炎模型 预先制备羊抗兔的抗肾血清 取2 2 5kg家兔 不计性别 处死后 取肾脏 插入导管 生理盐水反复冲洗后 取肾皮质5g研浆 与弗氏完全佐剂混匀成10ml 加生理盐水20ml 制成悬液 给绵羊皮下或肌内分5处汁射 每处1ml 每1星期1次 4次 于末次注射后2星期 采羊血分离血清 加入生理盐水洗漂3次的等量兔红细胞 混匀 过夜充分吸附 离心弃除血细胞 吸取上清液 水浴中o 5h灭活用 即抗肾血清 制备肾炎模型 用上述抗肾血清 给2 2 5kg家兔每次静脉注射1 5 2ml 每半小时1次 1 8次 至出现蛋白尿 模型形成 实验分组 肾炎模型组均注射抗肾血清 新药组分三个剂量组 阳性对照组可用地塞米松0 1mg kg 每日1次 或环磷酰胺6mg kg 每日1次 阴性对照组用等量生理盐水 正常组不注射抗肾血清 仅用等量的生理盐水 每组用动物至少6只 二 大鼠Heymann肾小球肾炎模型1 原理本方法用大白鼠肾组织 注射给同种大鼠 经过一段时间 受试动物产生抗原 抗体复合物 沉淀于肾小球血管壁而形成肾小球肾炎 2 操作方法本模型为同种免疫复合物型肾炎模型 取150 200g的大鼠 不计性别 处死取出肾脏插入导管 用生理盐水反复冲洗后 取肾皮质5g研成匀浆与弗氏完全佐利混匀成10ml 加生理盐水20ml 给同种大鼠做腹腔内注射 2星期1次 每次2ml 3 6次 直至出现蛋白尿 说明模型形成 3 造模成功的指标和药物疗效观察同Masugi肾炎模型 实验可延长1 4星期 每星期测1 3次 4 注意点Heymann肾炎常需l 4星期或更长 生化指标的测量应进行多次 并和造模前后 给药前后作比较 第四节前列腺增生药一 实验设计的医学基础西医学认为 前列腺增生是由于体内性激素平衡失调 前列腺平滑肌增生形成 临床表现为 尿频 尿急 排尿不畅 夜尿增多等 西医药物治疗 般用雌激素 睾酮还原酶抑制剂或受体阻滞剂等处理 中医认为前列腺肥大属 癃闭 范畴 常以 温补肾气 清热利尿 破瘀散结 或 补阳行阳 活血杜瘀 攻实散结 的原则来治疗 二 药效学研究的实验设计 一 对前列腺增生动物模型的治疗作用试验1 常用动物模型 1 激素法前列腺增生模型 以内酸睾丸素皮下注射而形成前列腺增生 2 老年犬前列腺增生模型 选择有自发性前列腺增生的老龄犬观察药物疗效 3 尿生殖窦植入法模型 向前列腺内植入胎鼠的尿生殖窦组织而形成前列腺增生 以上模型和建立方法将在后面叙述 试验治疗和给药途径符合临床要求 局部用药的剂量大小应以有关给药的频度或药物浓度确定 2 观察指标 1 前列腺指数 前列腺重mg g 体重 2 前列腺的形态学观察 镜检可见腺上皮和平滑肌前列腺细胞肥大者呈高柱状 胞核也增大 前列腺肥大者腺体直径增大 腺体间质甚少 彼此紧贴 呈 背靠背 形 间质可见弥散的淋巴细胞反应或出现淋巴滤泡 3 血清酸性磷酸酶的含量 可用麝香草酚肽法测定 4 前列腺DNA 可用牛胸腺DNA作为标准 按二苯胺法测定 5 前列腺组织的多巴胺含量 因为多巴胺主要来自前列腺 测定前列腺组织中的多巴胺可作为探索药物作用机制和手段 3 方法学评价上述多种方法造成的模型各有特点 激素法前列腺肥大模型方法简便迅速 适宜药物筛选 但与人类疾病的相关性较小 老年前列腺增生犬与人类发病机制相似 是公认的研究人类前列腺增生的合适动物模型 但来源较少 难于广泛用作药物筛选 胚胎尿生殖窦植入法小鼠前列腺肥大模型上需外源性激素 可在短期内产生预期的增生 不干扰前列腺肥大药物检测 动物操作容易 一般认为此模型可用于探索人类前列腺肥大的疾病过程 二 其他试验1 抗炎试验前列腺肥大者常见炎细胞浸润 具有局部抗炎作用的药物也利于本症症状的改善 通过制造一般的炎症模型来评价其抗炎药效即可 本症常口服给药 应注意剂量的合理性 2 镇痛试验前列腺肥大者常因膀胱流道梗阻 排尿不畅 具有胀痛感 如新药有 局部 镇痛作用 可用相适应的实验加以证实 3 体外抗菌试验见有关章节 三 阳性对照药物 对于清热利尿 破瘀散结的本类新药可以前列泰片 前列宁 癃闭散 祛癃胶囊等作对照药物 三 动物模型建立方法 一 激素法 丙酸睾丸素 模型1 原理根据前列腺增生由体内性激素失衡有关理论 添加外源性激素可使前列腺迅速增生 2操作方法小鼠每日皮下注射丙酸睾丸素5mg kg 21日后形成前列腺肥大 可开始进行试验治疗 3 造模成功指标与药物疗效观察镜检前列腺 与空白对照组比较增生程度 或取前列腺称重计算前列腺指数以及测前列腺中DNA含量与空白对照组比较 药效可根据前列腺镜检 前列腺指数 DNA含量 磷酸酶含量来评价 4 注意点选用小鼠尽可能体重相近 鼠龄相同 雄性激素水平无显着差异 二 老年犬前列腺增生模型1 原理犬的前列腺增生与人发病机制相似 因此 犬的前列腺增生与人类的前列腺增生最为相近 是迄今公认为研究人类前列腺增生 观察药物的治疗作用合适的动物模型 2 动物和实验步骤选取雄性杂种家犬 先经直肠指诊断及前列腺明显增大者 再经B超检查测定前列腺体积 证实为前列腺增大者供实验 3 药物疗效观察用B型超声显象法测定前列腺体积 近似值 最大横径x纵杆x厚径 比较用药前后体积变化 4 注意点 1 犬前列腺增生与年龄有关 实验用犬宜选老年 7 10岁龄 前列腺增生明显者 2 从外地 非本地动物房 选来的犬必须在本地动物房饲养2个月使之适应实验环境和饮食条件 三 小鼠尿生殖窦植入法模型1 原理胚胎与成年前列腺细胞相互作用 诱导成年前列腺细胞增小 可能是由于成年前列腺胚胎生长能力的重新恢复 2 操作方法取体重250 300g 7 10周龄雄性大鼠在戊巴比妥钠60mg kg 体重 腹腔注射麻醉下剖开腹部 仔细分离前列腺 用针尖或有锋利尖端的小镊向前列腺内植入16日胎鼠的尿生殖窦组织 对照组进行同样手术操作 但仅用针头探刺两次作为假手术 然后缝合腹壁 3 造模成功的指标和药物疗效观察指标同激素法模型 4 注意点 1 胎鼠的尿生殖窦诱导前列腺增生有雄激素依敕性 必须选用成年雄性小鼠 7 10周龄 2 增生程度与胚胎尿生殖窦植入的数目成比例 所以每只小鼠植入的胎鼠尿生殖窦的数目必须相同 3 尿生殖窦不同部分植人诱导成年大鼠前列腺增生度差异大 所以植入小鼠前列腺的胎鼠尿生殖窦必须无明显差异 第五节前列腺炎药一 实验设计的医学基础前列腺炎是泌尿科疾病 症状包括会阴不适 尿痛 残尿感 腰痛 尿道灼热 尿频 小腹痛等主要症状 根据其产生的病因 临床分为细菌性和非细菌前列腺炎两类 前列腺炎多由大肠杆菌 金黄色葡萄球菌感染所致 而非细菌性炎症 主要由炎细胞浸润腺腔梗阻 间质纤维化产生 治疗以清热解毒 活血祛瘀 利水通淋 中医认为 前列腺炎属 癃闭 范畴 二 药效学研究的实验设计 一 对前列腺炎药动物模型的治疗作用试验1 常用动物模型 1 大鼠实验性非细菌前列腺炎病理模型 以l 角叉菜胶生理盐水0 1ml注射在前列腺头相连接的精囊内 2 大鼠前列腺纤维增生炎症病理模型 以25 消痔灵注射0 2ml注射囊内侧前列腺背 3 大鼠实验性细菌前列腺病理模型 以大肠杆菌生理盐水悬液 注射在与前列腺头相接的精囊内 2 观察指标 1 前列腺病理形态学检查 2 前列腺液检查 检查其细胞数 对实验性细菌性前列腺炎模型还叮作细菌培养 检查其菌数 3 卵磷质小体密度 前列腺液中 3 方法学评价各种方法造成的模型各有特点 注射消痔灵形成实验性前列腺炎 利用药物药理作用特点而形成 直接 简单方便 实验性细菌性前列腺炎的模型和实验性非细菌性前列腺炎模型制做方法易行而可靠 炎症周期适合抗炎药的筛选 二 其他试验1 抗菌试验由于本病部分是由细菌感染而发 故可以抗菌试验为其药效学依据 2 抗炎试验可用一般抗炎方法进行 3 止痛试验用以衡量治疗药物的辅助作用 三 阳性对照药物前列康 氧氟沙星 前列宁等 三 动物模型的建立方法 一 非菌性前列腺炎的模型的建立1 原理注入角叉菜胶生理盐水 能引起前列腺液检验指标的显著改变 而注入等量灭菌生理盐水则不能引起显著改变 2 操作方法麻醉动物 切口 暴露前列腺 在前列腺头叶上的精液囊注入1 角叉菜胶生理盐水溶液 术后缝合 术后24h可形成非细菌性前列腺炎的模型 3 造模成功指标前列腺液中白细胞数增加 卵磷质小体密度减少 前列腺液细菌培养阴性 腺体标本病理形态学检查诊断为病变前列腺炎 4 注意点需有注射不含角叉菜胶生理盐水作正常对照 观察是否形成前列腺炎模型 二 实验性前列腺炎的模型制备1原理应用消痔灵的药理作用 注射后造成前列腺纤维增生炎症阶段 形成实验性前列腺炎症 2 操作方法麻醉 切口 暴露前列腺 在精囊内侧的前列腺背叶注射消痔灵 缝合 术后7日前列腺炎造模成功 3造模成功指标解剖观察腺组织与周围黏连 结节 灰白色点状硬化 硬化 显微观察炎细胞浸润 呈团簇状 腺腔梗阻 间质纤维化 4注意点取正常大鼠的前列腺组织标本作为对照 三 大鼠实验性细菌前列腺炎病理模型建立1 原理由大肠杆菌感染引起前列腺液中白细胞提高及卵磷质小体密度减少 引起前列腺形态的炎性病变 2 操作方法麻醉 切口 暴露前列腺 在大鼠精囊内注射1 4x107个 ml大肠杆菌生理盐水混悬液1ml 2 3日后形成细菌性前列腺炎的模型 3 造模成功的指标镜检前列腺液中卵磷质小体密度减少 白细胞数增加 前列腺标本病理形态学检查诊断为前列腺炎模型 4 注意点 前列腺液细菌培养 定期观察菌落形态学及菌落数 注射时菌液不能外漏 所用针头以4号为好