食品安全实验鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验课件

食品安全实验鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验实验一实验一 鼠伤寒沙门氏菌回复鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验突变实验食品安全实验鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验n一、目的与要求n1、了解化学毒物致突变性分析的原理及分析要求。n2、掌握回复突变的测试方法。n二、实验原理二、实验原理n 鼠伤寒沙门氏组氨酸营养缺陷型菌株不能合成组氨酸，故在缺乏组氨酸的培养基上，仅少数自发回复突变的细菌生长。假如有致突变物存在，则营养缺陷型的细菌回复突变成原养型，因而能生长形成菌落，据此判断受试物是否为致突变物。n 某些致突变物需要代谢活化后才能引起回复突变， 故需加入经诱导剂诱导的大鼠肝制备的S9混合液。食品安全实验鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验三、培养基和试剂 n1、 0.5mmol/L组氨酸-0.5mmol/L生物素溶液n2、顶层琼脂培养基n3、底层琼脂培养基n4、营养肉汤培养基n5、盐溶液(1.65mol/L KCl+0.4mol/L MgCl2)n6、0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4)n7、S9混合液n8、溶剂的选择 食品安全实验鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验四、操作方法四、操作方法 n1、增菌培养n取营养肉汤培养基5ml，加入无菌试管中，将主平板或冷冻保存的菌株培养物接种于营养肉汤培养基内，37振荡（100次/min）培养10h。该菌株培养物应每毫升不少于12109活菌数。n2、平板掺入法n 实验时，将含0.5mmol/L组氨酸-0.5mmol/L生物素溶液的顶层琼脂培养基2.0mL分装于试管中，45水浴中保温，然后每管依次加入试验菌株增菌液0.1mL，受试物溶液0.1mL和S9混合液0.5mL（需代谢活化时），充分混匀，迅速倾入底层琼脂平板上，转动平板，使之分布均匀。水平放置待冷凝固化后，倒置于37培养箱里孵育48h。记数每皿回变菌落数。n实验中，除设受试物各剂量组外，还应同时设空白对照、溶剂对照、阳性诱变剂对照和无菌对照。食品安全实验鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验五、数据处理和结果判断五、数据处理和结果判断n记录受试物各剂量组、空白对照（自发回变）、溶剂对照以及阳性诱变剂对照的每皿回变菌落数，并求平均值和标准差。n如果受试物的回变菌落数是溶剂对照回变菌落数的两倍或两倍以上，并呈剂量-反应关系者，则该受试物判定为致突变阳性。n受试物经上述四个试验菌株测定后，只要有一个试验菌株，无论在加S9或未加S9条件下为阳性，均可报告该受试物对鼠伤寒沙门氏菌为致突变阳性。如果受试物经四个试验菌株检测后，无论加S9和未加S9均为阴性，则可报告该受试物为致突变阴性。食品安全实验鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验六、试验报告六、试验报告n 试验报告应包括以下内容：n（1）受试物名称、理化性状、配制方法、使用溶剂；n（2）试验菌株：所用试验菌株；n（3）代谢活化系统：所用诱导剂；n（4）试验方法：简述操作步骤，除受试物剂量分组外，还应说明空白对照、溶剂对照和阳性对照，阳性结果判定标准；n（5）结果：以列表方式报告受试物的Ames实验结果（表1）；n（6）结论。食品安全实验鼠伤寒沙门氏菌回复突变实验表1 Ames试验菌株的回变结果（平均值标准差）TA102组别剂量(mg/皿)TA97-( S9) +( S9)TA98-( S9) +( S9)TA100-( S9) +( S9)-( S9) +( S9) 受试物自发回变溶剂对照阳性物对照