2019届人教版微生物的培养与应用单元测试

微生物的培养与应用学校：姓名：班级：考号：1、 下列生物学实验操作中，能顺利达到实验目的的是（）A. 利用五点取样法抽样调查国道两侧隔离带中一枝黄花的密度B. 利用在牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素筛选能分解尿素的细菌C. 在固体培养基上稀释涂布大肠杆菌培养液获得单菌落D. 切取小块植物叶片直接接种到某种植物组织培养基上获得植株2、反刍动物如牛和山羊，具有特殊的器官一瘤胃，瘤胃中生活着多种微生物，研 究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究，请回 答：（1） 在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是（ 多选）。A.酒精灯 B.培养皿 C.显微镜 D.无菌水 E.接种环（2）向试管内分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净的原因是。（3） 刚果红可与 形成红色复合物，研究人员在刚果红培养基平板上，筛选到了几株有 透明降解 圈的菌落（见图1） O图中降解圈 大小与纤 维素 酶的 有关。图中降解纤维素能力最强的菌株是（填图中序号）。（4） 纤维素酶高产菌株在-20 C长期保存时，菌液中常需加入一定量的 保 藏。（5） 研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株 A和B,在不同温度和pH条件下进行 发酵，测得发酵液中酶活性的结果见图 2,推测菌株更适合用于人工瘤胃发酵，理由是O（2） 要改良现有的乳酸菌种的育种方式的原理是 。菌种经过处理后，再接种于经过 法灭菌处理的 （填“固体”或“液体”）培 养基 中，28d振荡扩大培养。（3）已知“改良MC琼脂培养基”中含有碳酸钙，遇酸溶解而使培养基变得透明；“孟加拉红琼脂培养基”含氯霉素，可抑制绝大多数细菌的生长。对乳酸菌进行计数时应选择上述 培养基，用方法接种，挑选出具有透明圈的菌落进行计数。如果每个平板均接种了0. I mL样品并培养，接种的4个平板菌落数分别是 210、230、470、190,则样品中菌种A的数量为 个/mL。 平板划线法一般不用于活菌计数的原因是5、塑料（聚乙烯）在自然界中很难降解，俗称“白色污染”，北京航天大学杨军 教授偶然发现装米的塑料袋上有许多孔洞，还有虫子和飞蛾爬出。带着这些疑问， 杨军教授对虫子消化道的微生物进行分离，从而找到了能降解塑料的微生物，回答 有关问题：（1） 实验室分离聚乙烯塑料降解菌时应当以 唯一碳源。在获取肠道微生物后应先进行选择培养，其目的是 ,选择培养时所用的培养基从物理性质上属于培 养基。（2）对选择培养后的微生物分离时，可以釆用平板划线法和稀释涂布平板法，当采用平板划线法分离微生物时，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末 端开始划线，这样做的目的是 ，当釆用稀释涂布平板法分离微生物时，（需要/不需要）进行梯度稀释。两种方法都得到了多种菌落，根据它们的菌落特征对细菌进行分类，菌落特征包括菌落形状、大小、和等方面。6、大肠杆菌与我们日常生活关系非常密切，它寄生在人体的大肠和小肠里，结构 简单，繁殖迅速，容易培养，是生物学上重要的实验材料。正常情况下，大多数大 肠杆菌不但不会给我们的身体健康带来任何危害，反而还能竞争性抵御致病菌的进 攻，同时还能帮助人体合成维生素 K2,与人体是互利共生的关系。（1）实验室常用牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌的纯化培养。下表为培养基 配方（配制1 000 mL）:成分用量牛肉膏5.0 g蛋白胨10.0 gNaCl5.0 g 表中的牛肉膏和蛋白胨主要为大肠杆菌的培养提供 等营养物质（至少答两点）；NaCI的作用是（至少答两点）。 为了达到纯化目的，该配方中还应该加入 。 培养基的配制过程为：计算f称量f溶化f火菌f倒平板。其中溶化后火菌前一一定要进行的操作是调 pH,培养细菌时需将培养基的 pH调至。 纯化大肠杆菌：微生物接种最常用的方法是 和，前者不仅能纯化而且能计数。（2）大肠杆菌分解乳糖产生酸，因细菌带正电会被伊红染成红色，再与美蓝结合会 形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。在牛肉膏蛋白胨固体培养基加入一定量的 伊红一美蓝溶液，这样的培养基是 _ _（填“选择”或“鉴別”）培养基。中国的卫 生标准是每1 000 mL饮用水中大肠杆菌不得超过 3个，在培养基上每1 000 mL合格饮用水形成的菌落数（填“大于”、“小于”或“等于” ）3个，原因是 7、35%-40%勺甲醛水溶液（福尔马林）可作为防腐剂，其防腐的原理是使蛋白质变 性。自然界中有能分解甲醛的细菌和真菌。下图为分离和纯化分解甲醛细菌的实验 过程。3无机懑辰-即狂*银蕩绘幕4无就園依培养 基-甲能， 慎海培幕?尢抚选 体坯粗 基-甲號. 换萬培杀（1 ）过程的目的是,过程培养出的是培养基灭菌的常用方法是利用高温可以使微生物的等物质发生变性。（2）通过培养能获得 。若下图甲表示在平板培养基上的第一次和第二次划线，请在图乙中画出第三次划线，划线后在恒温培养箱中培养时，培养皿须 倒置，目的是。（3）经过过程后，取样测定甲醛浓度，选出 ，再分离、培养菌株。为研究甲醛初始浓度对菌株降解甲醛能力的影响，做了有关实验并得到如下图结果（4）由上图可知，当甲醛的初始浓度小于1200 mg/L时，菌株当甲醛的初始浓度增高至1 600 mg/L时，48小时后菌株对甲醛的降解能力很弱，甚至失去降解能力，其原因可能是 8、下面是筛选抗链霉素大肠杆菌的实验步骤及相关图解。实验步骤： 把大量对链霉素敏感的大肠杆菌接种在不含链霉素的培养基1的表面，进行培养。待其长出密集的小菌落后，用影印法接种到不含链霉素的培养基二上，随即在影 印到含链霉素的培养基 3上，进行培养。 在培养基3上，出现了个别抗链霉素的菌落，将其挑选出。如下图:的培昴基含毬的请分析回答:（1）配制培养大肠杆菌的培养基，一般都含有水、碳源、无机盐和氮源等四类营养物质。试从细胞的元素组成分析，其原因是 。（2） 从功能上看，含有链霉素的培养基 3属于。（3） 由上图可知，原始菌种接种到培养基1的方法是 。（4） 对培养基2和培养基3上的菌落进行比较，在培养基 2上找到培养基3上相 应的菌落。挑取其中一个菌落，接种到含链梅素的培养基4上。经培养，发现有较多的菌落。则发生抗链霉素基因突变与接触到抗链酶素的时间关系是 。9、利用植物为原料生产的燃料乙醇和生物柴油等“绿色能源”，其应用在一定程度上能够减缓人类对煤、石油等燃料的消耗。科学家发现，在微生物A和微生物B的作用下，利用植物秸秆为原料可生产燃料乙醇（如下图甲）；在微生物 M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图乙）。请据图回答：（團甲）（1）图甲中微生物 A利用自身合成的酶、.酶和酶等，把作物秸秆中分解成葡萄糖；微生物B利用葡萄糖发酵生产乙醇应控制的条件是。来源:学#科#网Z#X#X#K（2）图乙中用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用 、等方法从油料作物中提取；筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供，培养基灭菌采用的最适方法是 法。（3）测定培养液中微生物数量，可选用 法直接计数10、下图是微生物的接种实验中的一些步骤。请回答下列有关问题（1）步骤前的一步操作是 ，该操作用到的主要仪器是 (2) 实验步骤的目的是 ，步骤、之间还需要将接种环 。(3) 指出步骤操作不当的地方 。(4) 分别用三个平板培养三种细菌(E.coli、s.albus、B.subtnis )，然后在培养 基上打出直径为3mm勺孔，并在孔中加入一定浓度的甲抗生素，经过一定时间培养后，可以在孔的周围观察到一圈清晰区，此乃抑制细菌增长所致。测量清晰区的直 径(如下图所示)，数据如下表。细菌不同浓度甲抗生素条件下清晰区的直径(mm5(1 g/mL甲抗生素7.5 i g/mL甲抗生素10 i g/mL甲抗生素15 i g/mL甲抗生素20 i g/mL甲抗生素E.coli710141616S.albus一581317B.subtilis5791419 S.albus和B.subtilis对甲抗生素敏感的区别是。 有人感染E.coli而患病，医生使用20 口 g/mL甲抗生素给予治疗，试用生物进化理论解释这种不明智的做法 。 采养殖池中的水样lmL稀释100倍，吸取稀释后的水样lmL,接种于E.coli选择 性培养基上培养，一段时间后观察菌落并计数，重复三次实验结果如下图。该养殖池每mL水含有E.coli个。11、下面是筛选抗链霉素大肠杆菌的实验步骤及相关图解。 实验步骤： 把大量对链霉素敏感的大肠杆菌接种在不含链霉素的培养基1的表面，进行培养。 待其长出密集的小菌落后，用影印法接种到不含链霉素的培养基二上，随即在影 印到含链霉素的培养基 3上，进行培养。 在培养基3上，出现了个别抗链霉素的菌落，将其挑选出。如下图：戟1堵界耳请分析回答：(1) 配制培养大肠杆菌的培养基，一般都含有水、碳源、无机盐和氮源等四类营养物质。试从细胞的元素组成分析，其原因是 。(2) 从功能上看，含有链霉素的培养基3属于。(3) 由上图可知，原始菌种接种到培养基1的方法是。(4) 对培养基2和培养基3上的菌落进行比较，在培养基 2上找到培养基3上相 应的菌落。挑取其中一个菌落，接种到含链梅素的培养基4上。经培养，发现有较多的菌落。则发生抗链霉素基因突变与接触到抗链酶素的时间关系是 。12、尿素是一种重要的农业氮肥，但是尿素不能被农作物直接吸收，只有被土壤中 的细菌分解变成氨才能被利用。(1) 为了从土壤中获得尿素分解菌，首先要配制 的选择培养基。尿素分解菌之所以能够分解尿素，是因为它们能够产生 ，将尿素分解成氨。(2) 为了统计尿素分解菌的数量，我们常采用稀释涂布平板法，但计数值往往偏，是因为。同时为了计数的准 确性，我们往往只统计菌落数 范围的平板。(3) 筛选尿素分解菌的培养基制备过程中，尿素因加热而分解，所以常采用 法除菌。(4) 将实验获得的优质尿素分解菌进行短期保藏，常将其接种到 , 4C下可保藏36个月。13、以下是在推进生态文明建设过程中，合理利用微生物的实例。 农作物秸秆可用于还田、造纸、养殖蘑菇、生产乙醇等，既能解决集中焚烧污染 环境问题，又能变废为宝。 农业生产上广泛使用的除草剂在土壤中不易被降解，长期使用会污染土壤，可选 育人降解该除草剂的细菌修复被污染的土壤。请回答：(1) 用于生物工程的目的菌大多是从自然环境中筛选纯化出来的。在选育能分解除草剂(一类含氮有机物)的目的菌时，应将土壤浸出液接种在以 为唯一氮源的固体培养基上。对固体培养基进行灭菌处理常用的方法是 ,为检测灭菌效果可对培养基进行 。(2) 稻杆还田以及利用秸秆生产乙醇的过程都需要以纤维素为 的微生物。分离该类微生物时应用含纤维素的培养基进行培养，并加入 形成红色复合物进行筛选，目的菌应从周围有 的菌落中选取。(3) 生产乙醇过程中常用的微生物是 ，发酵过程中检测该微生物数量可采用的方法有显微直接计数(或血球计数板)法和 ，后者统计得到的菌落数目往往比活菌的实际数目 。14、土壤中的产脲酶细菌在污水处理中具有巨大的应用前请回答：(1) 从土壤分离产脲酶细菌过程中，培养基中髙浓度尿素的作用是杀死 的微生物，并为产脲酶细菌提供 ;除了营养物质外，培养基的配制还应控制等条件(答出两点即可)。(2) 采用稀释涂布平板法接种时，将聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个 。与分离真菌相比，分离产脲酚细菌的样品稀释度不同，原因是 。(3) 初步筛选出的产脲酶细菌，在培养基中加入酚红指示剂，能对分离的菌种做进一步鉴定，其原理是。15、科研人员选取5g 土壤样品，加入到含100 mL培养基M的锥形瓶中，在30C条 件下振荡培养5天，取出5 mL培养液接种到相同的新鲜培养基，按此步骤，连续 培养5次，分离获得菌株 Q18利用该菌，科研人员进一步探索其降解柴油的最佳 条件，获得 验结果如下图所示。请回答下列问题。图I柴油添加的影晌图2表面活性剂的彩响（1） 本研究中的“土壤样品”最好选自什么样的环境？ 。（2） 为获得菌株Q18，实验使用的培养基 M应以为唯一碳源，从物理形态上判断其属于培养基，连续培养5次的主要目的是 。（3） 在5次连续培养后，需要利用 （填方法）接种培养液，再在适宜温度下培养 24 h 后，挑取的菌落，进行重复培养，直到分离出单一菌株。（4）据实验结果图分析，若某地区土壤发生柴油重度污染，则可以，并添加浓度为 的表面活性剂，以 利于提高其对柴油的降解效果。16、某科研人员欲从丛台酒中温大曲中分离高产淀粉酶的细菌，以丛台酒厂提供的 成熟中温大曲为材料，用淀粉培养基进行培养，得到如下所示结果（对每个生长出 单菌落的培养皿进行碘薰）。请回答下列问题：（1） 淀粉为高产淀粉酶的细菌提供 ，常用法对淀粉培养基进行灭菌。从功能上讲，该培养基属于 培养基。（2） 对上述高产淀粉酶的细菌纯化培养的方法有 和。（3） 图中菌落的周围出现透明圈的原因是 ，从图中可以看出，菌株 （填字母）产生淀粉酶能力最强。（4）使用后的培养基丢弃前一定要进行 处理，以免污染环境。17、影响酱油卫生指标的细菌主要有酎热的芽抱杆菌和耐盐菌。某生物兴趣小组欲从酿制的酱油中筛选出耐盐菌。请回答：.（1） 在筛选过程中，应将酱油接种于含有适量 的固体培养基上：从功能上讲，该培养基属于培养基；对该培养基灭菌的方法是。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白培养基培养一段时间，发现空白培养基上出现了一些菌落。空白培养基上出现菌落的原因是： :。（2） 在筛选耐盐菌的过程中，必须在无菌条件下完成的操作是（多选）。配制培养基 倒平板接种培养（3 ）若要统计活的耐盐菌的数目，把酱油接种到培养基上常采用的方法 为;统计结果一般用菌落来表示，统计的菌落数往往比活菌的实际数目，原因是。（4）在纯化耐盐菌的过程中，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因 是，避免出现此种现象应该采取的措施是 。18、塑料的生物降解，是一个世界性的难题。北京航天航空大学赵军教授带领的团队所进行的研究，引人瞩目。他们从一种吃塑料（聚乙烯）的蜡虫肠道内容物中分离出8个菌株，并对其中的2个菌株进行了深入研究。蜡虫f肠道内容物f接种、培养、分离f菌种鉴定f菌种保藏(1) 塑料的生物降解，主要是利用某些生物分泌特定的 的作用；(2) 上述步骤中“培养”是为了 ，其培养基应以聚乙烯为 并如入水和 等制作而成。培养一定时间后，根据 对菌种进行初步分离；(3) 研究人员将其中两个菌株 YT1、YP1分别接种到含有聚乙烯膜的培养基中连续 培养，部分结果如下图一、二所示。 图一显示，两个菌株在实验条件下，增殖能力更强的是 。图中缺少对照组的数椐，根据实验设计的意图，对照组的细胞密度应该为 . 图二是对两个菌株进行聚乙烯减重分析的实验结果，可以得出的主要结论是19、细菌浸入人体后，有些种类寄生在宿主细胞内，另一些种类存在于人体的内环 境中。为探究某种细菌 a的存在部位，科学家以从未感染过此细菌的小鼠作为研究 对象(小鼠的生理状况相同)，结果如下表。回答以下相关问题：步骤组别甲乙丙丁1给小鼠注射适量的细菌 a给小鼠注射等量的生理盐水分离T细胞分离血淸分离T细胞分离血淸2分别注射已经感染细菌 4的小鼠，培养一-段时间3检测小鼠脾脏中细菌a的数量结果+ + + + + + + + + +(分离的T细胞中含有效应T细胞；“ +”表示细菌a数量的多少)(1) 实验中，对照组的是 。(2) 步骤2中小鼠感染细菌a的天数应,该这属于实验中 变量的控制，在注射细胞或血清之前，还需要增加的操作是（3）从结果分析，由于乙组和丁组的细菌数量基本相同，说明通过 免疫不能有效的抑制细菌 a的增殖。通过甲组的结果说明细菌 a生活在。20、石油烃是石油管道泄漏的主要污染物。为了筛选出分解石油烃能力较强的微生 物，进行了如下系列操作。请回答问题：（1）分解石油烃的微生物一般从土壤中分离，获取土壤样品的取样地点最好选在0（2）图1表示获取土壤样品后的研究过程。土壇样品将单荫落接种进廿培养为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，？号瓶所用的液体培养基的成分共 有的特点是 ，从而有利于分解石油烃的微生物的生长。（3） 可采用图2中平板乙所示的 （方法）检测图1的号瓶中分解石 油烃的微生物数量。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，这样做的目的是 ;然后，将图1号瓶中的1mL菌液稀释100倍，在3个平板上用该方法分别接入 0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数 分别为39、38和37。据此可得出每毫升该菌液中的活菌数为 个。（4）1 .若实验室采用图3中的操作分离纯化优良菌种，首次接种最合理的排序是。（Dn .下列有关操作正确的是 （填字母）。A划线分离时，需要把接种环深入到培养基中进行接种 B划线时要将最后一区域的划线与第一区域的划线相连 C.超净工作台在使用前，可用紫外线灯杀菌参考答案答案第1页，总7页1、【答案】C【解析】2、【答案】(1) CE(2) 避免培养基污染棉塞菌2B菌株在较高温度和酸性环境下酶的活性更高(3) 纤维素量与活性(4) 甘油(5) B;发酵过程会产热和产酸,【解析】3、【答案】(1)防止琼脂中带入少量的含氮化合物，而使微嗜氮微生物生长选择(富集(2) 平板划线法操作第一步及每次划线之后都要灼烧接种环、第二次及其后的划法分离微生物时，需要进行梯度稀释。菌落特征包括菌落形状、大小、隆起程度和颜色等方面。6、【答案】（1）碳源、氮源和维生素为大肠杆菌提供无机营养，维持培养基的渗透压与细菌细胞相同琼脂（或凝固剂）中性或弱碱性稀释涂布平板法平板划线法（2）鉴别 大于饮用水中还有其他细菌，在伊红一美蓝固体培养基上形成的紫黑色菌落不超过3个，但形成的菌落数远大于 3个【解析】（1）表中的牛肉膏和蛋白胨主要为大肠杆菌的培养提供碳源、氮源和维生素NaCI的作用是提供无机盐，还可以维持培养基的渗透压与细菌细胞的相同，以保证细菌正常的生命活动。 为了达到纯化目的，需用用固体培养基，所以该配方中还应该加入凝固剂琼脂。 配制培养基时如果是培养细菌的需将培养基的pH调至中性或弱碱性。 纯化大肠杆菌时最常用的方法是稀释涂布平板法和平板划线法，稀释涂布平板法还能计数，所以该空的顺序一定是稀释涂布平板法和平板划线法。（2）在培养基中加入伊红一美蓝溶液，这样的培养基是鉴别大肠杆菌的，会出现紫黑色菌落，属于鉴别培养基。国家规定1OOOm饮用水中大肠杆菌不得超过 3个，在鉴别培养基上每1000mL合格饮用水形成的菌落数会大于 3个，因为饮用水中还有其他细菌， 在伊红一美蓝固体培养基上形成的紫黑色菌落不超过3个，但形成的菌落数远大于 3个以甲醛为唯一碳（3）避免水甲醛浓度源的细菌蛋白质和核酸（2）单个菌落7、【答案】（1）增加目的菌的菌群数量（提高目的菌的种群密度）滴污染培养基甲醛浓度最低的培养瓶（4）可以完全降解甲醛过高会使菌体蛋白质变性，从而降低了细菌降解甲醛的能力（或甲醛浓度过高会产生毒害作用，降低了细菌降解甲醛的能力 ）【解析】根据题意和图示分析可知：在分离和纯化分解甲醛的细菌的过程中，通过过 称制取各种菌的悬浊液，过程用完全培养基培养后，可以获得大量微生物，从而增加 目的菌的菌群数量；中的培养基中的碳源只含有甲醛，只有可以分解甲醛的细菌能够 存活，所以通过过程可以筛选出能分解甲醛的微生物，即培养出以甲醛为唯一碳源的 细菌；构成生物的重要物质是蛋白质和核酸，所以利用高温可以使微生物的蛋白质和核 酸等物质发生变性。过程可以获得单个菌落，获得单个菌落过程中常用的接种方法是 平板划线法或者稀释涂布平板法，为避免水滴污染培养基，在恒温培养箱中培养时，培 养皿须倒置。经过过程后，取样测定甲醛浓度，选出甲醛浓度最低的培养瓶， 再分离、 培养菌株。由图中的曲线图可知，当甲醛的浓度小于1200mg/L时，菌株可以把甲醛完全降解掉,但是当甲醛的初始浓度为 1600mg/L时，48小时后菌株对甲醛的降解能力很弱甚至失去 降解能力的原因是甲醛的初始浓度太大，会产生毒害作用，使菌体蛋白质变性，从而降 低了细菌降解甲醛的能力。8、【答案】（1）细胞的组成元素都是从环境的营养物质中摄取的（2）选择培养基（3）稀释涂布平板法（4）抗链霉素基因突变发生在该菌接触到链霉素之前（5）基因突变具有低频性（6）细胞质基质、细胞质基质【解析】9、 【答案】（1） C1 Cx葡萄糖苷纤维素 无氧（2）压榨 萃取（8）. 碳源高压蒸汽灭菌（3）显微镜直接计数【解析】（1）植物秸秆中的主要成分是纤维素，图甲中微生物A利用自身合成的C酶、Cx酶、葡萄糖苷酶等把纤维素分解成葡萄糖；葡萄糖经无氧呼吸产生乙醇。（2）植物油不易挥发，不宜选用蒸馏法提取，但易溶于有机溶剂，可选用压榨、萃取等方法从油料作物中提取；植物油含有C、H、O元素，可用作培养基中的碳源，培养基灭菌常采用高压蒸汽灭菌法。（3）测定培养液中微生物数量，可选用显微镜直接计数法。10、 【答案】（1）. 灭菌（2）.高压蒸汽 （3）. 灭菌锅（4）.对接对于饫浓度的甲抗生素B.subtiJis 较敏感 （5）.护环进划线的首尾区域不应相连（6）.冷却行灭菌 （7）.高浓度的甲抗生素不能起到更好的抗菌效果，但会快速提高抗生素抗性基因的基因频率（8）. 900【解析】试题分析：阅读题干和图表可知，本题的知识点是微生物的是实验室培养技术 和应用，梳理相关知识点，然后根据问题的具体要求分析综合做出解答。（1）据图分析，步骤是倒平板，前面一个步骤是灭菌，一般高压蒸汽灭菌锅进行灭 菌。（2）实验步骤接种前灼烧接种环，目的是杀灭接种环上可能引起污染的微生物；步骤、之间还需要将接种环冷却，避免高温杀死要接种的菌种。（3）步骤操作中，接种环划线的首尾区域不应相连。（4）根据表格分析，S.albus与B.subtilis 相比，B.subtilis 对于低浓度的甲抗生 素较敏感。 根据表格数据分析，高浓度（20 口 g/mL）的甲抗生素不能起到更好的抗菌效果，但会快速提高抗生素抗性基因的基因频率，因此医生使用20 口 g/mL甲抗生素给予治疗是不明智的。 根据观察到的菌落数，求其平均值为9,又因为是1ml水样稀释了 100倍所观察的数据，所以该养殖池每毫升水含有E.coli 9X 100=900个。11、 【答案】（1）细胞的组成元素都是从环境的营养物质中摄取的（2）选择培养基（3）稀释涂布平板法（4）抗链霉素基因突变发生在该菌接触到链霉素之前【解析】（1）细胞的组成元素都是从环境的营养物质中摄取的，因此配制培养大肠杆菌的培养基，一般都含有水、碳源、无机盐和氮源等四类营养物质。（2） 链霉素是抗生素，对大肠杆菌具有选择作用，因此含有链霉素的培养基3属于选 择培养基。（3）据图分析，1号培养基的接种方法为稀释涂布平板法。（4）培养基2和培养基3上相同的菌落，是具有抗链霉素性状的大肠杆菌，将其中一 个菌落接种到含链霉素的培养基上，出现较多的菌落，则说明该抗性基因突变发生在该 菌接触链霉素之前。12、基因工程是从分子水平对基因进行操作，从而实现人们定向改造生物，得到人们所 需要的生物性状或生物产品的技术。目的基因的获取是基因工程的第一步，常见的方法 是构建基因组文库。请分析并回答下列问题：（1）构建基因组文库的一般步骤： 提取某种生物体内的 ，用适当的限制酶处理，得到一定范围大小的DNA片段; DNA片段分别与载体结合，得到重组载体； 重组载体导入到的群体中储存，基因组文库构建完成。（2） 与基因组文库相比，cDNA文库的基因数相对要少。其原因是 。（3） 载体与DNA片段结合前，需要使用同种的限制酶处理。其目的是 。（4） 受体赃导人顏維之前，常用 理，提高导入的成功率。【答案】（1）全部DNA或全部基因受体菌（2）cDNA文库只能收集到生物发育到某时期己发生转录的基因，而基因组文库能收集到全部基因（3）以获得与DNA片段相同的粘性末端（4） Ca2+【解析】（1）构建基因组文库的一般步骤为： 提取某种生物体内的全部 DNA或全部基因，用适当的限制酶处理，得到一定范围大小 的DNA片段； DNA片段分别与载体结合，得到重组载体； 重组载体导入到受体菌的群体中储存，基因组文库构建完成。（2）cDNA文库只能收集到生物发育到某时期己发生转录的基因，而基因组文库能收集到全部基因，因此与基因组文库相比，cDNA文库的基因数相对要少。（3） 载体与DNA片段结合前，需要使用同种的限制酶处理，以获得与DNA片段相同的 粘性末端。（4）将重组DNA导入受体菌群之前，常用钙离子处理，以提高导入的成功率。12、 【答案】（1）以尿素为唯一氮源脲酶 （2）小当两个或多个细菌连在一起时，平板上显示一个菌落30-300（ 3）滤膜 （4）固体斜面培养基【解析】（1）为了从土壤中获得尿素分解菌，首先要配制以尿素为唯一氮源的选择培养 基。尿素分解菌之所以能够分解尿素，是因为它们能够产生脲酶，将尿素分解成氨。（2）采用稀释涂布平板法统计尿素分解菌的数量时，当两个或多个细菌连在一起时，平 板上显示一个菌落，因此计数值往往偏小。为了计数的准确性，我们往往只统计菌落数 为30-300范围的平板。（3）筛选尿素分解菌的培养基制备过程中，尿素因加热而分解，所以常采用滤膜法除菌。（4）将实验获得的优质尿素分解菌进行短期保藏，常将其接种到固体斜面培养基上，4 C下可保藏36个月。13、【答案】（1）.除草剂 高压蒸汽灭菌法不接种培养（或空白培养）（2）.碳源刚果红（CR）较大透明圈 （3）.酵母菌 稀释涂布平板法少【解析】试题分析：微生物培养过程中，培养基的主要成分有：水、无机盐、碳源、氮 源.培养微生物时还需要满足微生物生长对pH特殊营养物质以及氧气的要求。微生物常见的接种的方法：平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划 线，在恒温箱里培养；在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌 数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释 后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。（1）根据题意分析，实验的目的是选育分解除草剂（一类含氮有机物）的目的菌，因此应该将土壤浸出液接种在以除草剂为唯一氮源的固体培养基上；固体培养基常用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，以不接种培养（或空白培养）为对照，检测灭菌效果。（2）秸秆还田提高土壤肥力以及利用秸秆生产乙醇的过程的原理主要是土壤中微生物 以纤维素等有机物为碳源，合成自己需要的有机物；刚果红是一种染料，它可以与纤维 素形成红色复合物，但并不和纤维二糖、葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分 解后刚果红-纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解为中心的透明 圈，进而可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。（3）乙醇是酵母菌无氧呼吸的产物；酵母菌的计数方法有显微直接计数（或血球计数板）法和稀释涂布平板法，后者观察到的菌落往往有重叠现象，因此得到的值一般偏小。14、 【答案】（1）.不能耐受高浓度尿素（不能利用尿素）氮源 pH 、无菌（2）.菌落土壤中不同微生物的密度不同（3）.产脲酶细菌分解尿素，使培养基pH升高，指示剂变红色【解析】本题考查尿素分解菌的分离和培养及培养基的成分相关知识，意在考察考生对 知识点的识记理解掌握程度。（1）从土壤分离产脲酶细菌过程中，培养基中高浓度尿素的作用是为了杀死不能耐受 高浓度尿素的微生物，并未脲酶细菌提供氮源。除了有碳源、氮源、水分和无机盐外， 配制培养基还应控制培养基的 pH,溶氧量等且要无菌。（2）采用稀释涂布平板法接种时，将聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。分离不同的微生物时对样品的稀释度不同，主要是因为土壤中不同微生物的密度不同。（3）初步筛选出的产脲酶细菌，在培养基中加入酚红指示剂，因为产脲酶细菌可以分 解尿素，使培养基pH升高，指示剂变红色，从而达到鉴定目的。15、 【答案】（1）容易受到柴油污染的土壤（2）柴油 液体扩大能分解柴油细菌的数量（3）平板划线法形态、大小、颜色等方面具有菌株Q18菌落特征 （4）对被柴油重度污染的土壤进行稀释，使柴油浓度降低至4 000m？ kg-1左右6mg? g-1【解析】（1）依题意可知：分离获得的菌株Q18是一种柴油降解菌，因此本研究中的“土 壤样品”最好选自易受到柴油污染的土壤。（2）为获得菌株Q18,实验使用的培养基 M应以柴油为唯一碳源，从物理形态上判断其属于液体培养基。在实验过程中，科研人员在“30C条件下震荡培养5天，取出5mL培养液接种到相同的新鲜培养基，按此步骤，连续培养5次，其主要目的是扩大能分解柴油细菌的数量。（3）为分离出单一菌株 Q18,应利用平板划线法接种培养液，再在适宜温度下培养24h后，挑取形态、大小、颜色等方面具有菌株Q18菌落特征的菌落，进行重复培养，直到分离出单一菌株。对比分析柱形图1和2,在柴油添加量为4000mg. kg-1、表面活性剂的浓度为 6mg. g-1 时，柴油的降解率最高。可见，若某地区土壤发生柴油重度污染时，则可将被柴油重度 污染的土壤进行稀释，使柴油浓度降低至4000mg kg-1左右，并添加浓度为 6mg g-1的表面活性剂，以有利于提高对柴油的降解效果。16、 【答案】（1）碳源高压蒸汽灭菌选择（2）平板划线法 （5）. 稀释涂布平板法（3）细菌分泌淀粉酶将菌落周围的淀粉水解C（4）灭菌【解析】（1）淀粉是多糖，可以为细菌提供碳源，常用高压蒸汽灭菌法对淀粉培养基进 行灭菌。淀粉培养基可以分离高产淀粉酶的细菌，属于选择培养基。（2）纯化细菌常用的方法有稀释涂布平板法和平板划线法。（3）高产淀粉酶的菌株在含有淀粉的固体培养基上可释放淀粉酶分解淀粉，在菌落周围形成透明圈，因此图中 C菌株产生淀粉酶的能力最强。17、 【答案】（1） NaCI（食盐）选择 高压蒸汽灭菌对培养基的灭菌不彻底倒平板时培养基被污染（或培养皿灭菌不合格等）（2）（3） 稀释涂布平板法低两个或多个细胞连在一起时，平板上只能观察到一个菌落（4） 酱油中耐盐菌浓度过高对酱油进行梯度稀释（或加大稀释倍数）【解析】18、 【答案】（1）酶 （2）增加目的菌株数量 唯一碳源 无机盐（和氮源） 菌落特 征（或菌落的形态、菌落的颜色）YT1 0 YT1 和YP1都能降解聚乙烯，其中 YP1的 降解能力更强【解析】试题分析：本题主要考查微生物的筛选和培养。要求学生熟知微生物的筛选和 培养过程，以及会分析题目所给曲线图，得出结论（1）某些生物分泌特定的酶，能够降解塑料。（2）接种、培养、分离中的培养，是为了增加目的菌株数量。本操作是为了筛选能分 解聚乙烯的菌种，其培养基应以聚乙烯为唯一碳源、并如入水和无机盐等制作而成。培 养一定时间后，根据菌落特征（或菌落的形态、菌落的颜色）对菌种进行初步分离；（3） 由于在同一时间范围内，YT1组的细胞密度较 YP1更大，说明增殖能力更强的是 YT1。对照组为未加入菌株的含有聚乙烯膜的培养基，其细胞密度应该为0与对照组相比，YT1和YP1的聚乙烯减重较大，且 YP1的聚乙烯减重较 YP1大，说明 YT1和YP1都能降解聚乙烯，其中 YP1的降解能力更强。19、 【答案】（1）丙、丁（ 2）相同无关检测小鼠脾脏中细菌 a的数量 （3）体液宿主细胞内【解析】（1）该实验的目的是探究某种细菌 a侵入小鼠体内后的存在部位，因此自变量 为是否给小鼠注射适量的细菌a,据此分析表中信息可知：甲、乙是实验组，丙、丁是对照组。（2）步骤2中小鼠感染细菌a的天数是无关变量，应控制相同，这属于实验中对无关变量的控制。该实验的因变量是通过检测小鼠脾脏中细菌a的数量来反映细菌a在小鼠体内的存在部位，因此在注射细菌a或生理盐水之前，还需要增加的操作是检测小鼠脾脏 中细菌a的数量，以便与注射细菌 a或生理盐水之后的检测结果进行对比。（3）表中实验结果显示：乙组和丁组的细菌a数量基本相同，说明通过体液免疫不能有效的抑制细菌a的增殖。分离的T细胞中含有效应T细胞，效应T细胞能够导致靶细胞（被细菌a侵入的细胞）裂解死亡，甲组的细菌a数量明显少于丙组，说明细菌 a生活在宿主细胞内。20、 【答案】（1）被石油污染处（2）以石油烃为唯一碳源（3 ）稀释涂布平板法检测培养基灭菌是否合格3.8x 104（4） C【解析】（1）要获取相应的菌种，应到相应的环境中获取，获取土壤样品的取样地点最 好选在被石油污染明显处。（2）为了能有效地分离出分解石油烃的微生物，过程一所用培养基，其成分的特 点是以石油烃为唯一碳源，从而有利于目的菌的生长，抑制其他微生物的生长。（3）据图乙可以看出，图乙平板的菌落基本呈均匀分布，所用操作方法为稀释涂布平 板法。在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养一段时间，这样做的目的是检测培养基灭菌是否合格，3个平板上的平均菌落数分别为（39+38+37） /3=38个，因此 每毫升该菌液中的活菌数为（C/V）x M=（ 38/0.1 ） x 100=3.8 x 104个。（4）I 平板划线的操作的基本步骤是：右手持接种环，经火焰灭菌，即图中的；待 凉后，在火焰旁打开盛有菌液的试管棉塞，并将试管口过火焰，即图中的；将以冷却 的接种环伸入菌液，沾取一环菌液，即图中的；将试管口过火焰并塞上棉塞，即图中 的；左手斜持琼脂平板，并将皿盖打开一条缝，右手于火焰近处將接种环迅速伸入平 板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，接种环不应划破培养基表面，即图中的；烧灼 接种环，杀灭环上残留菌液，即图中的；待冷却后从第一区域划线的末端开始往第二 区内划线，重复以上操作，在第三四五区内划线，注意不要将最后一区的划线与第一区 相连。故正确的顺序是。II 划线分离时，不能把接种环深入到培养基中进行接种，只能在培养基表面进行划线操作，A错误；划线时最后一区的划线不能与第一区的划线相连，B错误；超净工作台在使用前，可用紫外线灯照射 30分钟，以杀死物体表面或空气中的微生物，C正确。答案第7页，总7页3、生物固氮是固氮微生物将大气中的氮还原成氨的过程，将固氮微生物菌剂施入 土壤，可提高土壤氮素含量，促进作物生长。回答下列问题：（1）为了筛 选固氮菌，所用琼脂使 用前用蒸 馏水浸泡、洗涤3次，目的是。为增加固氮菌的数目，分离纯化前需要进行 培养，以增加固氮菌总数目。（2） 用来筛选固氮菌更为简单的接种方法是，操作要点有（答出两点即可）。（3） 经过初步培养后，研究人员将获得的某固氮菌液进行梯度稀释，吸取103 4 5稀释倍数的菌液各O.ImL,分别涂布在三个平板上，一段时间后形成的菌落数依次为 18、 17、19,该同学以平均菌落数18进行计数，可求得原菌液固氮菌的浓度为 个 /L。你认为该同学的计数方法是否正确？ （填“正确”或“不正确”），说明理由。4、某罐装泡菜制造厂希望通过改良现有的乳酸菌菌种提高泡菜中的乳酸产量。请 回答相关问题：（1）微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是 。线操作总要从上一次划线的末端开始划线(3) 1.8 X 1010不正确应涂布多个稀释倍数的平板，以获得菌落数在30-300个的平板【解析】4、 【答案】(1).防止外来杂菌污染(2).基因突变高压蒸汽灭菌液体(3) .改良MC琼脂 稀释涂布平板法2100得到的菌落多数不是单一菌落，菌落数远小于活菌数【解析】本题考查微生物培养与应用， 解题关键是微生物培养中的相关技术及注意事项。(1) 微生物培养中获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染。(2) 乳酸菌是原核生物，可通过诱导基因突变的方法改良现有的乳酸菌种。由于乳酸 菌在固体培养基上菌落较小，生长缓慢，所以用液体培养基扩大培养乳酸菌，接种前培 养基用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。(3) 乳酸菌通过发酵能产生有机酸，所以对乳酸菌进行计数时应选择改良MC琼脂培养基，用稀释涂布平板法方法接种；平板菌落数为470的与其他平板相差较大，应选择平板菌落数分别是210、230、190三个平板计算平均值：样品中菌种A的数量=2100个/mL;用平板划线法接种得到的菌落多数不是单一菌落，菌落数远小于活菌数，所以平 板划线法一般不用于活菌计数。5、 【答案】(1)聚乙烯获得数目较多的聚乙烯降解菌液体 (2)将聚集的微生物逐步稀释，以便获得单个菌落需要隆起程度颜色【解析】试题分析：培养基为微生物提供生长、繁殖和积累代谢产物的营养物质，营养 物质归纳为碳源、氮源、生长因子、无机盐和；根据化学成分分为合成培养基、天然培 养基等根据用途分选择培养基、鉴别培养基；根据性质分为液体、半固体和固体培养基。 筛选目的微生物需要使用选择培养基.微生物的接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法可以用来进行微生物的计数。(1) 筛选能降解聚乙烯塑料的微生物，需要使用以聚乙烯为唯一碳源的选择培养基； 在获取肠道微生物后筛选的目的是获得数目较多的聚乙烯降解菌，使用的是液体培养 基。(2) 釆用平板划线法接种微生物时，为了将聚集的微生物逐步稀释，以便获得单个菌 落，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线；釆用稀释涂布平板答案第8页，总7页