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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,能力单元八,血清学检验与生物制品,一 血清学检验定义：抗原及相应抗体在体外的特异性结合。在体外能发生可见的免疫反应。抗体主要存在于血清中，将这一反应称为,-,。,(,一,),血清学试验的特点：,1,、特异性：抗原决定簇的组成、结构不同，所产生的抗体也就不同，一种抗原只能与相应抗体结合，表现出高度的特异性。,2,、交叉性：（二）用已知测未知：用已知抗原（抗体）监测未知抗体（抗原）。,（三）最适比与带现象：最适比：抗原与抗体结合需要适当比例才能出现可见反应。带现象：如抗原过多或抗体过多，大的抗原抗体复合物很难形成，不能出现可见的反应。,（四）反应的可逆性：正常：温度：,0-40,度，,PH,：,4-9,。当,T60,度，,PH3,时，发生可逆反应。,（五）反应的两阶段型：第一阶段：抗原抗体相互结合，作用快，形成的复合物较小，不出现可见反应。第二阶段：在电解质作用下，形成大的复合物，出现各种可见反应，反应慢。（六）反应的敏感性：极微量的抗原或抗体都能检测。,二 影响血清学实验的因素,1,、电解质：常用的是氯化纳，,0.9%,生理盐水，促进可见现象的发生。,2,、温度：,37,度，适宜的温度可增加抗原抗体活性及相互接触的机会。,3,、,PH=6.8,PH=5-5.5,非特异性沉淀，,PH=2-3,离解。,4,、振荡：加速碰撞，但过强可解离。,5,、杂质：蛋白质、脂质、糖等杂志时，抑制反应进行，或引起非特异性反应。故实验设立对照。,三、血清学试验的类型：,（一）凝集试验：颗粒性抗原与相应抗体结合后，在电解质存在下互相凝结成絮片状团块的现象。参与的抗原为凝集原，抗体为凝集素。,、直接凝集试验：（,1,）平板凝集试验：例如：沙门氏菌，痢疾杆菌，布氏杆菌病，血型鉴定。（,2,）试管凝集试验：抗原等量，抗体作倍比稀释，,37,，,50%,以上为该血清的效价（滴度）。例如：布氏杆菌病，沙门氏菌。,2,、间接凝集试验：将可溶性抗原（或抗体）吸附与免疫无关的颗粒表面，再与抗体结合，出现肉眼可见的凝集现象。间接血凝试验：以红细胞为载体。正向血凝实验：红细胞,+,抗原 抗体。反向血凝试验：红细胞,+,抗体 抗原。,（,二,二,）,）,沉,沉,淀,淀,试,试,验,验,：,：,可,可,溶,溶,性,性,抗,抗,原,原,与,与,相,相,应,应,抗,抗,体,体,结,结,合,合,后,后,，,，,形,形,成,成,肉,肉,眼,眼,可,可,见,见,的,的,白,白,色,色,沉,沉,淀,淀,。,。,、,、,环,环,状,状,沉,沉,淀,淀,试,试,验,验,：,：,d=3,4,毫,米,米,试,试,管,管,中,中,，,，,抗,抗,血,血,清,清,加,加,入,入,管,管,底,底,，,，,再,再,将,将,稀,稀,释,释,的,的,抗,抗,原,原,重,重,叠,叠,其,其,上,上,，,，,阳,阳,性,性,：,：,一,一,二,二,分,分,钟,钟,出,出,现,现,反,反,应,应,，,，,一,一,小,小,时,时,，,，,三,三,-,五,h,。,例,例,如,如,：,：,炭,炭,疽,疽,病,病,诊,诊,断,断,。,。,2,、,琼,琼,脂,脂,扩,扩,散,散,实,实,验,验,：,：,机,机,理,理,：,：,略,略,例,例,如,如,：,：,蓝,蓝,舌,舌,病,病,，,，,马,马,传,传,染,染,性,性,贫,贫,血,血,，,，,MD,，,传,传,染,染,性,性,法,法,氏,氏,囊,囊,病,病,。,。,（,三,三,）,）,补,补,体,体,结,结,合,合,试,试,验,验,：,：,1,、,原,原,理,理,：,：,补,补,体,体,无,无,特,特,异,异,性,性,，,，,能,能,与,与,任,任,何,何,抗,抗,原,原,抗,抗,体,体,复,复,合,合,物,物,结,结,合,合,，,，,红,红,细,细,胞,胞,+,溶,血,血,素,素,+,补,体,体,溶,溶,血,血,，,，,阴,阴,性,性,。,。,红,红,细,细,胞,胞,+,溶,血,血,素,素,不,不,溶,溶,血,血,，,，,为,为,阳,阳,性,性,2,、,应,应,用,用,：,：,牛,牛,付,付,结,结,核,核,，,，,乙,乙,型,型,脑,脑,炎,炎,，,，,马,马,鼻,鼻,疽,疽,（四）,中,中和试,验,验：病,毒,毒或毒,素,素与相,应,应抗体,结,结合后,，,，可失,去,去对易,感,感动物,的,的致病,力,力的实,验,验。,1,、毒素,、,、抗毒,素,素的中,和,和试验,：,：,LD50,常用,2,、病毒,中,中和试,验,验：,（,1,）体外,中,中和试,验,验（,2,）体内,中,中和试,验,验,例：,口,口蹄疫,病,病毒,(FMDV)4,7d,乳鼠,乳,乳鼠死,亡,亡,FMDV+,抗血清,4,7d,乳鼠,乳,乳鼠不,死,死亡,例,例,:FMDV,仔猪肾,传,传代细,胞,胞,(IB-RS-2),单层细,胞,胞,细,细胞病,变,变,(CPU),：变圆,、,、成串,、,、空泡,、,、变形,、,、脱落,、,、裂解,FMDV+,抗血清,IB-RS-2,单层细,胞,胞,细,细胞,无,无病变,CPU,（五）,抗,抗体标,记,记技术,：,：用荧,光,光素、,酶,酶和同,位,位素等,对,对抗体,进,进行标,记,记的试,验,验技术,。,。,1,、荧光,抗,抗体技,术,术：将,荧,荧光染,料,料标记,在,在抗体,上,上制成,荧,荧光抗,体,体，标,记,记的抗,体,体仍能,与,与相应,抗,抗原结,合,合并形,成,成带有,荧,荧光的,抗,抗原抗,体,体复合,物,物。,荧光材,料,料：异,硫,硫氰酸,荧,荧光素,显微镜,下,下的荧,光,光,荧光显,微,微镜,（,1,）直接,法,法：荧,光,光染料,+,已知抗,体,体 监,测,测未知,抗,抗原。,（,2,）间接,法,法：荧,光,光染料,标,标记在,抗,抗抗体,上,上检测,未,未知抗,原,原,2,、免疫,酶,酶标抗,体,体技术,：,：,利,利,用,用抗原,抗,抗体的,特,特异性,结,结合和,酶,酶的高,效,效特异,的,的催化,作,作用，,显,显色而,建,建立起,来,来的免,疫,疫检测,技,技术。,酶,酶标记,抗,抗体抗,原,原复合,物,物上的,酶,酶在遇,到,到相应,的,的底物,时,时，能,催,催化底,物,物分解,，,，并使,底,底物中,的,的供氢,体,体呈现,颜,颜色反,应,应。,常用标,记,记酶：,辣,辣根过,氧,氧化物,酶,酶（,HRP,）。作,用,用底物,为,为过氧,化,化氢。,供,供氢体,：,：,3,，,3-,二氨基,联,联苯胺,（,（棕色,沉,沉淀）,免疫酶,组,组织化,学,学染色,法,法；邻,苯,苯二胺,（,（橙色,可,可溶物,质,质）,酶联免,疫,疫吸附,试,试验。,直接法,：,：,1,免疫酶,组,组织化,学,学染色,法,法：酶,标,标抗体,+,被检抗,原,原洗涤,过,过氧化,氢,氢,+DAB,的反应,液,液中,普,普通显,微,微镜显,色,色反应,（,（棕色,沉,沉淀）,。,。,2 Elisa,：试剂,盒,盒：酶,标,标板，,酶,酶标抗,体,体，底,物,物，阴,、,、阳性,血,血清，,终,终止液,等,等。例,如,如：猪,伪,伪狂犬,病,病，猪,生,生殖呼,吸,吸道综,合,合症等,。,。,酶标仪（新,）,）,酶标仪,谢谢各位！,谢谢观看,/,欢迎下载,BY FAITH IMEANA VISIONOF GOOD ONE CHERISHES ANDTHEENTHUSIASMTHATPUSHES ONE TOSEEKITS FULFILLMENTREGARDLESS OFOBSTACLES.BY FAITHI BYFAITH,
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