双向免疫扩散

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2009.11.3,*,双向免疫扩散试验,2009.11.3,指,可溶性抗原,与相应抗体在,琼脂,介质中相互扩散，彼此相遇，在比例适当处形成,沉淀线,。,根据沉淀线的有无、形状和位置对抗原或抗体进行,定性,分析，也可用于抗体的,半定量,检测,本次实验利用此原理进行,抗体效价,的测定。,实验原理,2009.11.3,2009.11.3,抗体：抗,IgG,抗原：,IgG,巴比妥缓冲液,1.5,琼脂（巴比妥缓冲液配制）,载玻片、打孔器、微量进样器,37,水浴箱,主要的试剂和器材,2009.11.3,制板,用移液管吸取,4-4.5ml,的琼脂，将其放到水平放置的载玻片上，待冷凝。,打孔,打梅花孔，各孔间的距离为,0.7-0.8cm,。,实验步骤,1,2009.11.3,倍比稀释抗体,（见下表）,加样,用微量进样器在各孔加样品,10ul,，,中央孔加抗原，周围,6,孔分别加不同稀释度的抗体,将玻片放在湿盒中,，,37 18-24h,1,2,3,4,5,6,生理盐水,25,25,25,25,25,抗,IgG,50,25,25,25,25,25,2009.11.3,在抗原和抗体孔之间会看到白色的沉淀线。,实验结果,2009.11.3,将出现白色沉淀线的最高血清稀释度作为该抗体的效价。,例：该血清中抗,IgG,抗体的效价为,1,：,4,。,实验结论,画出实验结果图并判断效价,2009.11.3,玻片要清洁，边缘无破损。,浇制琼脂板时要均匀、无气泡。,孔要打得圆整光滑，边缘不要破裂。,加样时应尽量避免气泡或加到孔外，以保证结果的准确性。,注意微量进样器每加一个样品之后，就得清洗。,注意事项,2009.11.3,