血清成分分析课件

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,11/7/2009,#,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,血清胆固醇的定量测定,血清清蛋白与-球蛋白的分离与鉴定,血清谷丙转氨酶活性的鉴定及活力测定,实验内容,血清胆固醇的定量测定（邻苯二甲醛法）,胆固醇及其酯在硫酸存在下与邻苯二甲醛作用，产生的紫红色物质对550nm波长的光有最大吸收。100ml样品中胆固醇含量在400mg之内与吸光度呈良好线性关系。,实验数据,编号,0,1,2,3,4,吸光度值,0,0.177,0.405,0.604,0.745,对照,家鸡血清,对照,乌鸡血清,吸光度值,0,0.037,0,0.053,实验结果,标准曲线：y=0.0019x,家鸡的血清总胆固醇含量,：,19.47mg/100ml,乌鸡的血清总胆固醇含量：27.89mg/ml,查资料得：鸡的血清胆固醇含量,在,51196mg/100ml之间是在可信范围。,分析与讨论,实验所得的数据偏低，可能的原因：,1.,试管未干燥，沾有较多的水分，使得标准胆固醇应用液被稀释，浓度偏低。,2.,此次所用的血清本身胆固醇含量比一般的个体偏低。,3.,取血清的过程中，有些残留在试管壁上。,血清清蛋白与-球蛋白的盐析、透析与浓缩,上清液（主要是清蛋白 ）,离心,血清离心 取沉淀,沉淀（主要是-球蛋白）离心取 沉淀,将得到的样品装入透析袋中，置于烧杯中，用流水冲刷一小时。,血清清蛋白与-球蛋白的鉴定（醋酸纤维素薄膜电泳法）,醋酸纤维素薄膜是用二乙酸纤维素制成的，它具有均一的泡沫样的结构，厚度仅为,120m，有强渗透性，对分子移动无阻力,。,浸泡点样电泳染色漂洗,实验结果（家鸡血清电泳图谱）,分析与讨论,查资料得：电泳图谱中，清蛋白与点样线的距离比球蛋白远。,1.条带的颜色较深，是因为漂洗不够彻底。,2.全血清条带有多条重叠，是因为血清中有多种蛋白。,3.血清清蛋白条带出现两条线，可能是因为盐析时，球蛋白中掺有其它蛋白。,谷丙转氨酶活性的鉴定,观察,肝脏,中谷丙转氨酶所催化的氨基移换反应。通过,纸层析法,检查底物谷氨酸的减少和产物丙氨酸的生成。,实验结果（家鸡肝脏）,分析与讨论,酶液处有两个条带，离圆心较近的为谷氨酸，较远的为丙氨酸，而且与另一端的谷氨酸相比，量较少。煮沸的酶液只有一个条带，是因为谷丙转氨酶已失活，无法将谷氨酸转换为丙氨酸。条带附近还是有浅色的痕迹，可能是因为点样时，不小心碰到了别处。,血清谷丙转氨酶活力单位测定,本实验用丙氨酸和-酮戊二酸为底物，经转氨作用生成谷氨酸和丙酮酸。丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用生成2，4-二硝基苯腙，此物质碱性条件下呈棕红色，其颜色的深浅与丙酮酸的含量成正比，可用比色法进行定量测定。通过与标准溶液的比较，即可计算出酶的活力单位数。,实验数据,0,1,2,3,4,5,吸光度值,0,0.425,0.651,0.622,0.717,0.866,家鸡,对照管,乌鸡,对照管,吸光度值,0.019,0,0.030,0,实验结果,标准曲线：y=0.0019x,家鸡的GPT活力单位数：10,乌鸡的GPT活力单位数：30,分析与讨论,查资料知道实验所得的数据偏低，,可能的原因：,1.,试管未干燥，导致待测液浓度降低。,2.,静置前，未将待测液充分摇匀，导致待测,液浓度分布不均。,3.,可能保温时间不够，导致反应不够充分。,谢谢观看,