血细胞直方图和散点图的临床意义讲义

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,血细胞直方图和散点图的临床意义,一、什么是直方图？,直方图是通过血细胞计数仪测量而提供的血细胞体积分布图形，这些图形可以表示出细胞群体分布情况。,检测区域,红细胞,红细胞通过小孔,库尔特原理,Oscilloscope,示波镜,检测区域,白细胞,白细胞通过小孔,库尔特原理,示波镜,直方图原理,Lymphocyte,Monocyte,Granulocyte,淋巴细胞,大单个核细 胞群,粒细胞,淋巴,嗜碱,单核,嗜酸,中性粒细胞,高频度分析-直方图,直方图,-X,轴：体积（fL）,-Y轴：相对数量,通道划分,RBC直方图：36-360fL，256个通道,PLT直方图：2-20fL，64个通道.,WBC直方图：35-450fL，256个通道,二、直方图的临床意义,红细胞直方图,在红细胞的7项参数中,RBC,、,MCV,、,RDW,和HGB是直接测定的,HCT,、,MCH,和MCHC是计算得到的.,MCV,：,平均红细胞体积,RDW,：,红细胞分布宽度(其计算为SD/MCV),35,360,红细胞直方图应用举例(1),- 铁粒幼红细胞贫血,红细胞直方图应用举例(2),- 巨幼红细胞性贫血,红细胞直方图应用举例(3),- 缺铁性贫血(早期),红细胞直方图应用举例(3),- 缺铁性贫血(发展期),红细胞直方图应用举例(3),- 缺铁性贫血(恢复期),红细胞直方图应用举例(4),- 再障,红细胞直方图应用举例(4),- 再障(输血后),红细胞直方图应用举例(6),- 地中海贫血,影响红细胞参数的其他因素(1),- 红细胞碎片,影响红细胞参数的其他因素(2),- 淋巴细胞,影响红细胞参数的其他因素(3),- 红细胞凝集,Beta 地中海贫血,RBC7.02MCV60.4,HGB13.5MCH19.2,HCT42.5MCHC31.8,RDW15.2,缺铁性贫血,RBC3.64MCV51.6,HGB 5.2MCH14.2,HCT18.8MCHC27.4,RDW22.8,缺铁性贫血,RBC5.01MCV64.7,HGB10.4MCH20.8,HCT32.5MCHC32.1,RDW36.4 R,镰刀形细胞性贫血,WBC27.6 *RMCV 91.0,RBC2.03MCH 31.5,HGB 6.4MCHC 34.6,HCT18.5RDW 20.5,恶性贫血,RBC1.80MCV127.9,HGB 8.0MCH 44.4,HCT23.0MCHC 34.7,RDW 18.8,RBC 片段影响,RBC4.20,HGB11.3,HCT33.0,MCV76.9,MCH26.4,MCHC34.3,RDW15.8,冷凝集,RBC1.45MCV147.3,HGB11.8MCH 81.7,HCT21.3MCHC 55.4,RDW 14.7 R,冷凝集,First RunAfter,Warming,RBC 3.734.68,HGB 15.015.1,HCT 38.044.4,MCV101.894.9,MCH 40.432.2,MCHC 39.633.9,RDW 13.513.8,肾衰竭,WBC 3.9MCV 108.7,RBC2.90MCH 36.9,HGB10.7MCHC 34.0,HCT31.5RDW 29.7 R,高脂血症,WBC 7.4MCV 78.1,RBC5.00MCH 27.0,HGB15.7MCHC 34.6,HCT45.3RDW 13.9,慢性肝病,WBC13.6MCV 83.3,RBC3.42MCH 28.3,HGB 9.7MCHC 34.0,HCT28.5RDW 20.7,Microcytosis,RBC5.61RMCH 16.7 R,HGB 9.3MCHC 37.5 R,HCT24.9RRDW 32.9 R,MCV44.4RPLT 80.0 R,血小板直方图,在血小板的直方图上可见两条曲线,：,一条是 2fl-20fl 的原始数据曲线;,另一条是 0fl-70fl 的拟合曲线.,血小板曲线不拟合的原因,1.,血小板计数,20%,巨大血小板,WBC13.9,Flags,PLT204WBC *R,MPV13.1Giant Platelets,小血小板,WBC 6.7,Flags,PLT211PLT R,MPV 5.9MPV R,三、什么是散点图？,散点图是白细胞分类的平面图。,中性粒细胞,嗜酸性细胞,嗜碱性细胞,单核细胞,淋巴细胞,独立定义五个细胞亚群,.,3D VCS DifferentialMorphometric Cell Analysis,Ly,Ly Mean Vol,Ly Mean,Cond,Ly Mean,Scatter,Standard Deviation :,Ly SD Vol,Ly SD Cond,Ly SD Scatter,0,256,256,256,什么是VCS技术？,VCS技术是库尔特五分类血球仪对白细胞分类的专利技术，即分类时不需传统的染色方法，仅用三个物理量，VOLUME（体积）、CONDUCTIVITY（传导性）、SCATTER（激光）将五种白细胞分开的技术。,VCS检测,八千多个白细胞逐个、直接、同时地在流式通道内接受VCS三重检测，得到各自的三维座标值,V：检测细胞体积,C：检测细胞内部核结构,S：检测细胞内部颗粒特征,体积检测(V),V,是以库尔特原理检测细胞的体积,获得的是完全的细胞体积,VCS,- DC,细胞内部结构检测(C),C,运用高频探针检测细胞的内部结构,获得细胞核复杂程度的信息,区分分叶核和非分叶核细胞,VCS - RF,VCS - Laser,S,是运用一个,宽角度的散射范围,（10,-70,）来测量细胞的颗粒特性,更好地根据颗粒特性区分淋巴细胞,、中性粒细胞和嗜酸细胞,细胞颗粒特性检测(S),VCS技术的强大威力,所有检测在相同的试剂环境下进行。,美国贝克曼库尔特,256X256X256 = 1677 万个数据点,日本希森美康,256 X 256 = 6万个数据点,VCS检测,八千多个白细胞逐个、直接、同时地接受VCS三重检测，得到各自的三维座标值,V,C,S,VCS三维分析技术,将检测过的8,192个细胞分布到一个以V、C、S为三维坐标的空间内，显示出细胞群特征。,高智能的计算机软件分析分析细胞群的位置、相对密度、轮廓、和大小。,三维坐标的数据分析位点多过,16 10,6,个。,正常白细胞散点图,Laser Scatter,V,o,l,u,m,e,o,u,t,n,d,C,c,.,正常散点图,正常散点图,正常散点图,四、散点图的临床意义,正常散点图,杆状核细胞（未成熟中性粒细胞），晚幼粒细胞，巨多核粒细胞,Region A,Laser Scatter,V,o,l,u,m,e,o,u,t,n,d,C,c,.,A,细胞体积增大，有原粒细胞，早幼粒细胞，中幼粒细胞，晚幼粒细胞等。在 AML-M3中的早幼粒细胞就在此区域。,Region A2异常现象,Laser Scatter,V,o,l,u,m,e,o,u,t,n,d,C,c,.,A2,In these four cases, the first is normal (on the left). Progressively,(,增多的）,to the right, cases are shown with an increasing number of Imm NE.,从上述四例图中，左侧第一张图为正常，依次显示为未成熟粒细胞的逐渐增多,Normal,Typical,positions of,neutrophil,P,recursor,（,原始的,）,cells in the,Scatter vs,Volume Plot,慢性淋巴细胞白血病、病毒感染、慢性淋巴细胞增生性疾病和凋亡的淋巴细胞。,Region C,异常现象,Laser Scatter,V,o,l,u,m,e,n,u,c,C,t,o,d,.,C,WBC Research Population Data,白细胞群落研究参数,Normal,正常,CLL sample with small and large lymphocytes,慢淋可有大小不等的淋巴细胞出现,B-CLL,Normal,Viral Infection,急粒,M3,，,M4,，,M5,的单核细胞核原始粒细胞，疟疾的单核组织细胞等。,Region H,异常现象,Laser Scatter,V,o,l,u,m,e,o,u,t,n,d,C,c,.,H,未成熟的嗜酸性粒细胞，见于寄生虫感染和过敏性嗜酸性粒细胞增多症。,Region K,异常现象,Laser Scatter,V,o,l,u,m,e,o,u,t,n,d,C,c,.,K,急性粒细胞白血病,WBC 4.7,Neut % 1,Blast % 72,PLT 8,Flags,ImmGrans/Bands 2,Blasts,M1 急性粒细胞性白血病,WBC74.6,Neut % 6,Myelocyte % 1,Blast % 86,PLT 105,Flags,ImmGrans/Bands 2,Blasts,M3 急性早幼粒细胞性白血病,WBC2.9,Neut % 10,Band % 1,Promyelocyte % 53,PLT 7,Flags,ImmGrans/Bands 2,Blasts,M4 粒单细胞性白血病,WBC67.8,Neut % 42,Mono % 34,Imm Grans % 7,Blast % 4,PLT 55,Flags,ImmGrans/Bands 2,Blasts,M5 单核细胞性白血病,Mono %47,ImmGran % 8,Blast %34,PLT50,Flags,Blasts,慢性粒细胞性白血病,WBC54.6,ImmGran % 1,Blast % 75,PLT 145,Flags,ImmGrans/Bands 2,Blasts,五、网织红细胞参数的临床意义,网织红细胞计数是用作红细胞产生或红细胞生成的指标，是诊断或监测贫血治疗最常用的临床指标。,网织红细胞计数是反映骨髓红细胞成长活性的简单和重要的指标。,网织红细胞的定义是：无核、具有较高水平核糖体核糖核酸（rRNA)的成熟红细胞。,网织红细胞在骨髓中成熟需要4天，成人在正常情况下，所有红系细胞均以网织红细胞形式从骨髓释放。,网织红细胞亚群分辨,网织红细胞,高成熟度网织红,成熟红细胞,白细胞,非红细胞干扰,低成熟度网织红,网织红细胞参数,RET%：,网织红细胞百分比，来源于 (网织红细胞数值所有红细胞数值)100% ，正常参考值为0.5%2.5%,RET#：,网织红细胞绝对值，来源于(网织红细胞百分比红细胞数量)，正常参考值为(0.020.1)1012/L,IRF(MI)：,网织红细胞不成熟度，来源于(不成熟的网织红细胞所有网织红细胞)，正常参考值为0.20.4,MRV：,平均网织红细胞体积，来源于所有网织红细胞体积的平均值，正常参考值为 100125fl(比正常红细胞略大),网织红细胞参数,MSCV,：平均球形红细胞体积，来源于在网织红细胞计数中所有红细胞体积的平均值，正常参考值为84104fl,HLR%：,高散射性网织红细胞百分比，来源于(高激光散射值网织红细胞所有红细胞)100%，正常参考值为0.07%0.71%,HLR#：,高散射性网织红细胞绝对值，来源于(高散射性网织红细胞百分比所有红细胞数量)，正常参考值为(0.0030.05)1012/L,网织红细胞绝对值计数更能反映骨髓增生，它是网织红细胞百分数与红细胞计数的乘积，参考值为（2484）10,9,/L。,溶血时，由于大量网织红细胞进入血循环，网织红细胞可增至6%8%以上，急性溶血时，可高达20%左右，严重者可在50%以上，绝对值常超过100 10,9,/L。,网织红细胞增高，5%常为溶血性贫血，10%，则溶血性贫血的诊断常可成立。,网织红细胞增多也可见于失血性贫血或巨幼细胞贫血近期治疗后，但失血往往有临床证据，因而可以区别。,IRF的临床意义：,未成熟网织红细胞，也称移动或张力细胞，正常情况下不足网织红细胞总数的5%。未成熟网织红细胞在大量的促红细胞生成的刺激下会释放到外周血中，如出血，某些贫血或对刺激骨髓造血治疗的反映。IRF 类似于中性粒细胞的核左移，能够提供额外的红细胞信息，这些信息可以缩短疾病从诊断到治疗或单纯的治疗时间。,IRF在其他方面的临床应用包括：,监测骨髓移植后干细胞再生情况,监测强度化疗后骨髓再生情况,监测铁、维生素B12 和叶酸治疗,监测毒性药物对骨髓的影响,通过促红细胞生成监测肾脏移植,对贫血进行分类和评价,监测新生儿输血,检测再障危象,1、提高贫血的分类、诊断和治疗,大卫等人的研究表明将IRF 与网织红细胞计数结合进行成熟度分析可提高贫血的分类。下表总结了不同临床疾病中IRF 与网织红细胞计数的相互关系。,不同临床疾病中IRF与网织红细胞计数的相互关系,临床疾病,IRF,网织红细胞计数,骨髓移植,升高,降低,溶血性贫血,升高,升高,缺铁性贫血,升高,正常到降低,B12或叶酸缺乏,升高,正常到降低,近期出血,升高,正常到升高,地中海贫血,正常到升高,升高,髓障综合征,正常到升高,正常到降低,增生低下性贫血,正常到升高,降低,再障危象,正常到降低,降低,2、监测骨髓移植后骨髓恢复情况,骨髓移植常用来治疗某些血液病和实体肿瘤。骨髓移植前病人接受大剂量的化疗和放疗来刺激骨髓。这一过程导致病人不产生或只产生少量的红细胞、白细胞和血小板，因此需要进行广泛的监测来确定使用预防性抗生素和血产品的量和时间。,骨髓移植后，CBC，分类和网织红细胞计数是监测病人骨髓恢复情况的早期指标。现已将中性粒细胞绝对计数作为骨髓髓细胞生成和骨髓移植成功的主要指标。骨髓移植后中性粒细胞或未成熟髓细胞达到或高于0.5109/L，表明髓系移植成功。尽管血小板计数是巨核细胞生成的有用指标，却很少监测血小板。因为病人需要频繁地输血小板，血小板增加可能是因输血引起，不能反映真正的移植情况。,网织红细胞的百分比上升大于1%或网织红细胞的绝对值大于或等于50109/L时是红系移植成功的指标。尽管网织红细胞计数增加代表骨髓再生情况，但它不敏感且迟于中性粒细胞出现。有人对12 例骨髓移植病人进行研究表明，同中性粒细胞绝对计数值的反应相比网织红细胞的反应要落后一到七周。,大卫等人评价了IRF在骨髓移植病人中的作用。他们发现同网织红细胞计数相比，IRF通常先于中性粒细胞计数对骨髓活性情况出现反应。IRF的优点在于它不象中性粒细胞绝对计数那样受临床或亚临床感染影响。骨髓移植后IRF升高到20%以上时表示红系移植成功。,大卫等人研究表明IRF比网织红细胞计数早一半的时间提示移植成功。大卫得出的结论是IRF是骨髓移植成功最敏感的指标，因为IRF升高是当前实验室方法可测得的最早的反应指标。,3、监测肾移植后红细胞生成情况,促红细胞生成素（EPO）是一种调节骨髓产生红细胞的激素。贫血会产生促红细胞生成应激用，使促红细胞生成素水平升高，红细胞生成增加，网织红细胞从骨髓释放到循环中。由于肾脏是EPO的主要来源，肾衰竭会导致因促红细胞生成素产生和释放缺乏而引起的贫血。尽管传统的治疗方法通过输血可维持血红蛋白水平，但是肾移植治疗慢性肾衰竭引起的贫血最有效。,莫里等人对74 例肾移植病人的如下参数进行了测量：血清促红细胞生成素、血细胞压积、网织红细胞和血肌酐。肾移植后IRF比移植前高25%，平均比网织红细胞绝对计数早7 天。莫里的结论是肾移植后IRF是一个比网织红细胞绝对计数更敏感的早期指标。,六、红细胞三个平均值的临床意义,（一）平均红细胞体积（MCV）,1、计算方法：,MCV=Hct/RBC10,15,fl,2、参考值：,血液分析仪法： 80100fl,3、意义：全血中每个红细胞的平均体积。,（二）平均红细胞血红蛋白含量（MCH）,1、计算方法：,MCH=Hb（g/L） 10,12,pg/RBC（L）,2、参考值：,血液分析仪法：2734pg,3、意义：全血中每个红细胞平均血红蛋 白含量。,（三）平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）,1、计算方法：,MCHC=Hb（g/L）/Hct,2、参考值： 320360g/L,3、意义：单位体积红细胞平均血红蛋白含量。,诊断中的应用,1、正细胞性贫血,（1）特点：MCV、MCH、MCHC均正常。,（2）常见疾病：,急性失血性贫血、溶血性贫血、再生障碍性贫血、白血病等。,2、大细胞性贫血,（1）特点：MCV正常、MCH 正常、MCHC正常。,（2）常见疾病：,巨幼细胞贫血。,3、单纯小细胞性贫血,（1）特点：MCV正常、MCH正常、MCHC正常。,（2）常见疾病：,亚急性或慢性炎症疾患、尿毒症。,4、小细胞低色素性贫血,（1）特点：MCV 正常、MCH 正常、MCHC 正常。,（2）常见疾病：,缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血、铅中毒、慢性失血性贫血等。,（五）红细胞体积分布宽度（RDW）,RDW是反映周围血红细胞间体积差异的参数，通过变异系数定量地表示红细胞体积分布的离散程度。,1、正常参考值： 14-16%。,2、临床意义,（1）小细胞均一性贫血,特点：MCV正常、RDW正常。,常见疾病：轻型珠蛋白生成障碍性贫血、慢性疾病。,（2）小细胞不均一性贫血,特点：MCV正常、RDW增高。,常见疾病：缺铁性贫血、血红蛋白S病、 -珠蛋白生成障碍性贫血、红细胞破碎综合症等。,（3）正细胞均一性贫血,特点：MCV、RDW均正常。,常见疾病：再障、白血病、化疗后、急性失血性贫血等。,（4）正细胞不均一性贫血,特点：MCV正常、RDW增高。,常见疾病：缺叶酸或维生素B12双相性贫血、铁粒幼细胞贫血、骨髓纤维化等。,（5）大细胞均一性贫血,特点：MCV正常、RDW正常。,常见疾病：多数再障、部分肝病性贫血、某些肾性贫血。,（6）大细胞不均一性贫血,特点：MCV、RDW均增高。,常见疾病：巨幼细胞贫血、免疫性溶血性贫血等。,LH500/LH750,五分类血液分析仪旗标和代码,常见的旗标和代码,旗标(数值后):,R 结果需复核,*R 计数受干扰,H 结果高于参考范,围上限,L 结果低于参考,范围下限,代码(替代数值):,- 三次计数比统一,. 不完全计算,+ 结果超出操作范围,: 流式通道堵塞,? 数据无效,白细胞计数值后出现 *R的临床意义,说明白细胞在35fl处的检测受到干扰.,在白细胞计数孔有35fl大小的颗粒通过并被当作白细胞计数,且超过一定数量,触发报警,在白细胞直方图上看,曲线在35fl处上抬,导致 *R出现的可能原因,红细胞未完全溶解,样本存在有核红细胞,由于存在大血小板、血小板聚集干扰到白细胞结果,溶血剂问题,*R出现的,处理方法,1.查看出现的概率，如概率高则先考虑溶血剂的质和量有无问题，是否应更换溶血剂,2.如只是局限的样本出现，考虑样本原因，如需确认结果，可采用手工镜检,*R出现的,处理方法,1.查看出现的概率，如概率高则先考虑溶血剂的质和量有无问题，是否应更换溶血剂,2.如只是局限的样本出现，考虑样本原因，如需确认结果，可采用手工镜检,PLT,结果后出现 R旗标的临床意义,仪器进行血小板计数时,计数 2fl,20fl,的血小板数量,再拟合出一条 0fl,70fl,的曲线,目的是为了排除计数干扰.但条件不满足时仪器不能给出拟合曲线,这时候血小板数值后出现 R .,血小板曲线不拟合的条件,：,血小板计数,20,000;血小板曲线不呈正态分布;大多数血小板分布在,3fl或,15fl区域内;PDW,20%.,导致血小板后出现 R 的原因,样本血小板异常：出现异常形态的血小板、血小板发生聚集;,存在细胞碎片，如红细胞碎片;,血小板大小不一(输血后);,电磁波或噪音干扰小孔计数.,处理方法,请手工镜检,+ 出现的临床意义,+ (代码),：结果超出仪器的操作范围,对白细胞而言计数值大于 99.910,9,/L；,对红细胞而言计数值大于7.0010,12,/L ；,对血小板而言计数值大于 99910,9,/L.,处理方法,：,用ISOTON III,液稀释标本至线性范围内再测,注: 1.先做一空白循环以防止携带污染,2.不能报告白细胞分类结果,检查仪器稀释液和溶血剂输送系统有无故障,代码 - 出现的临床意义,-,出现代表三次计数不统一,可能导致的原因,：,小孔部分堵塞；,标本有凝块；,出现细胞凝集；,出现血小板凝集；,标本稀释后未充分混匀.,. 主要表示吸样错误,.,出现主要表示吸样错误,当发生吸样错误时,所有参数的结果后都会带有 . ，同时报警PART ASP,导致的可能原因有,：,样本有凝块,堵塞吸样针系统，影响血样探测器；,样本量不够;,样本的血红蛋白浓度过低(严重贫血),血样探测器检测失败;,发生吸样错误的处理方法,1.查看样本有无凝块,如果有重取标本,没有则重新检测,再出现如上问题则涂片镜检有无凝块或细胞聚集;,2.检测标本量是否够;,3.对于严重贫血病人样本采用手动进样方式.,4.检测仪器吸样系统,如发生堵塞则清洗.,代码,:,出现的临床意义,在白细胞五项分类及网织红细胞计数中,当流式通道堵塞产生,:,代码.,在散点分布图上可有三种堵塞报警,：,- FC ,流式通道完全堵塞(无检测);,- PC1 ,流式通道检测时间延长;,- PC2 ,流式通道检测时间缩短.,导致 PC /,:,的原因,- FC ：完全堵塞;,- PC1 ：流式通道或标本通道部分堵塞导致分类时间延长;,- PC2 ：红细胞未完全溶解导致分类时间缩短,或鞘液系统问题.临床上高胆固醇和高甘油三酯血症,、血红蛋白病、药物治疗后、进行性肝病等都可导致 PC2.,导致 PC /,:,的原因,- FC ：完全堵塞;,- PC1 ：流式通道或标本通道部分堵塞导致分类时间延长;,- PC2 ：红细胞未完全溶解导致分类时间缩短,或鞘液系统问题.临床上高胆固醇和高甘油三酯血症,、血红蛋白病、药物治疗后、进行性肝病等都可导致 PC2.,