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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第,四,章高效液相色谱法和超临界流体色谱法,4.5.1,一般条件选择,4.5.2,分离类型的选择,4.5.3,流动相的选择,第六节,HPLC,的应用,4.6.1,高效液相色谱的分析应用,4.6.2,制备型液相色谱,第五节液相色谱分析条件的选择,choice of analytical condition for HPLC,High performance liquid chromatography and Supercritical fluid chromatography,2024/11/28,4.5.1,一般条件的选择,1. 影响分离的因素与提高柱效的途径,液体的扩散系数仅为气体的万分之一，则在高效液相色谱中,速率方程中的分子扩散项,B/u,较小，可忽略不计，即,H = A + C u,液体的黏度比气体大,100,倍，密度为气体的,1000,倍，故降低传质阻力是提高柱效主要途径。,载体粒度较大时的,LC,曲线。,2024/11/28,由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。,液相色谱中，不可能通过增加柱温来改善传质。分离过程需要保持恒温。,改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。,上图为粒度较大时的,LC,曲线,左图为粒度较小时的,LC,曲线,2024/11/28,2.流速,流速是调整分离度和出峰时间的重要可选择参数。,3.固定相及分离柱,气相色谱中的固定液原则上都可以用于液相色谱，其选用原则与气相色谱一样。但在高效液相色谱中，分离柱的制备是一项技术要求非常高的工作，一般很少自行制备。,2024/11/28,4.5.3,流动相的选择,选择流动相时应注意以下几个普遍性的问题：,（,1,）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。,（,2,）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。,（,3,）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。,（,4,）选择的流动相应满足检测器的要求。如当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。,2024/11/28,在选择流动相时，溶剂的极性是选择的重要依据。常用溶剂的极性大小顺序为：,水,(,最大,) ,甲酰胺,乙腈,甲醇,乙醇,丙醇,丙酮,二氧六环,四氢呋喃,甲乙酮,正丁醇,乙酸乙酯,乙醚,异丙醚,二氯甲烷,氯仿,溴乙烷,苯,四氯化碳,二硫化碳,环己烷,己烷,煤油,(,最小,),当纯溶剂不能满足分离要求时，多采用混合溶剂或梯度洗脱。,2024/11/28,多元混合溶剂的溶剂极性参数计算,式中,i,为混合溶剂中各溶剂的体积百分数。,二元混合溶剂的则为,式中,A,，,B,分别为二元混合溶剂中溶剂,A,和溶剂,B,的体积百分数。,2024/11/28,例,4-3,在一反相色谱柱上，当流动相为,30%,甲醇和,70%,水,(,体积比,),时，某组分的保留时间为,25.6min,，死时间为,0.35min,，如何调节溶剂配比使组分容量因子为,5,？,解：初始值,= 0.75,即调整溶剂比例为,75%,甲醇和,25%,水可使该组分的,k,值为,5,。,2024/11/28,溶剂的选择性,溶剂和样品分子间的作用力用接受质子的能力,x,e,、给予质子的能力,x,d,和静电力,x,n,(,由偶极矩决定,),三种参数来表征，并以,x,e,、,x,d,和,x,n,构成一个三角坐标图,。,溶剂可分为八组而分别位于图中不同区。,I,组的,x,e,值较大，属质子受体溶剂；,VII,组的,x,d,值较大，属质子给于体溶剂；,V,组的,x,n,值较大，属偶极作用力溶剂。同组溶剂在分离中具有相似的选择性，不同组差别较大。,2024/11/28,4.6,HPLC,的,应用,4.6.1,HPLC,的,应用,1. 环境中有机氯农药残留量分析,可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。,固定相,：,薄壳型硅胶(37,50,m),流动相：正己烷,流 速：1.5,mL/min,色谱柱：50,cm,2.5mm(,内径),检测器：示差折光检测器,2024/11/28,3. 血浆分析,2024/11/28,4.6.2,制备型液相色谱,获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。,半制备柱（内径8,mm，,长度15 30,cm），,一次制备量0.1,mg。,1.,色谱柱的柱容量（柱负荷）,对分析柱：不影响柱效时的最大进样量；,对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量；,超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。,超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子,k,降低10%为宜。,2024/11/28,3. 制备型液相色谱,制备型液相色谱,：结构与分析型一样，但泵流量大、进样量大、采用制备柱；柱后馏分收集器。,制备柱,：内径2050,mm，,柱长50,cm。,2024/11/28,请选择内容,结束,4.1,高效液相色谱法的特性,4.2,高效液相色谱仪,4.3,液相色谱固定相与流动相,4.4,液相色谱中的主要分离类型,4.5,液相色谱分析条件的选择,4.6,高效液相色谱法的应用,4.7,离子色谱法,4.8,超临界流体色谱法,2024/11/28,
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