实验三唾液淀粉酶的活性观察

实验三、实验三、唾液淀粉酶的活性观察唾液淀粉酶的活性观察 指导老师：刘建昌、池雪林指导老师：刘建昌、池雪林一、目的一、目的n n掌握温度、掌握温度、pH、激活剂和抑制剂如何影、激活剂和抑制剂如何影响酶的催化活性及其影响机理。响酶的催化活性及其影响机理。二、原理二、原理n n酶酶是由活细胞分泌的生物催化剂。是由活细胞分泌的生物催化剂。n n酶促化学反应进行的能力即称为酶促化学反应进行的能力即称为酶活性（酶酶活性（酶活力）活力）n n在一定条件下，能使酶活性达到最高时的温在一定条件下，能使酶活性达到最高时的温度即酶的度即酶的最适温度最适温度n n而能使酶活性达到最高时的而能使酶活性达到最高时的pHpH即酶的即酶的最适最适pHpHn n能使酶由无活性变为有活性或使酶活性增高能使酶由无活性变为有活性或使酶活性增高的物质称为酶的的物质称为酶的激活剂激活剂n n能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫能降低酶活性却又不使酶变性的物质叫酶的酶的抑制剂抑制剂。n n本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受理化本实验用唾液淀粉酶为材料来观察酶活性受理化因素影响的情况。唾液中含有唾液淀粉酶，唾液因素影响的情况。唾液中含有唾液淀粉酶，唾液淀粉酶的底物是淀粉。淀粉在该酶的催化下会随淀粉酶的底物是淀粉。淀粉在该酶的催化下会随着时间的延长而出现不同程度的水解，从而得到着时间的延长而出现不同程度的水解，从而得到各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。各种糊精乃至麦芽糖、少量葡萄糖等水解产物。而碘液能指示淀粉的水解程度。而碘液能指示淀粉的水解程度。淀粉淀粉糊精糊精麦芽糖麦芽糖+少量葡糖少量葡糖淀粉酶淀粉酶淀粉酶淀粉酶紫红、暗褐或红色紫红、暗褐或红色加碘加碘 （蓝色）（蓝色）棕黄色棕黄色三、试剂及器材三、试剂及器材（1 1）（）（w/vw/v）淀粉溶液）淀粉溶液 要求新鲜配制。要求新鲜配制。（2 2）稀碘溶液）稀碘溶液（3 3）不同）不同pHpH溶液溶液缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液（4 4）（）（w/vw/v）蔗糖溶液）蔗糖溶液（5 5）斑氏试剂）斑氏试剂（6 6）1 1（w/vw/v）NaClNaCl溶液溶液（7 7）1 1（w/vw/v）CuSOCuSO4 4溶液溶液（8 8）白瓷板（或比色板）白瓷板（或比色板）（9 9）恒温水浴锅）恒温水浴锅（1010）电炉）电炉 四、操作四、操作n n1.1.唾液淀粉酶应用液的制备唾液淀粉酶应用液的制备（1 1）每人取一个干净的饮水杯，装上蒸馏水。）每人取一个干净的饮水杯，装上蒸馏水。（2 2）先用蒸馏水漱口，将口腔内的食物残渣清）先用蒸馏水漱口，将口腔内的食物残渣清理干净。理干净。（3 3）口含约）口含约20mL20mL蒸馏水，做咀嚼动作蒸馏水，做咀嚼动作1-2min1-2min，以分泌较多的唾液。然后将口腔中的唾液吐入以分泌较多的唾液。然后将口腔中的唾液吐入一个干净的小烧杯中。一个干净的小烧杯中。n n2温度对酶活性的影响温度对酶活性的影响（1 1）取）取）取）取3 3支试管，按表支试管，按表支试管，按表支试管，按表4-24-2进行实验。进行实验。进行实验。进行实验。试试试试管管号管管号管管号管管号1 12 23 30.50.5淀粉淀粉淀粉淀粉(mL)(mL)5 55 55 5pH 6.8pH 6.8缓缓缓缓冲液冲液冲液冲液(mL)(mL)0.50.50.50.50.50.5稀稀稀稀释释释释唾液唾液唾液唾液(mL)(mL)0.50.50.50.50.50.5不同温度（不同温度（不同温度（不同温度（）冰水浴冰水浴冰水浴冰水浴3737水浴水浴水浴水浴沸水浴沸水浴沸水浴沸水浴（2 2）在干净的比色板上，于各孔分别滴）在干净的比色板上，于各孔分别滴2 2滴碘液。滴碘液。（3 3）每隔）每隔1min1min从第从第2 2支试管中取反应液支试管中取反应液1 1滴，与比色板滴，与比色板孔穴中的碘液混合，观察颜色的变化。孔穴中的碘液混合，观察颜色的变化。（4 4）待第）待第2 2支试管中的反应液与碘液混合后颜色不再支试管中的反应液与碘液混合后颜色不再变化时，取出试管，向各试管滴加碘液变化时，取出试管，向各试管滴加碘液3 3滴。观察记滴。观察记录各管颜色。录各管颜色。说明温度对酶活性的影响。说明温度对酶活性的影响。n n3 3pHpH对酶活性的影响对酶活性的影响（1 1）取）取3 3支试管，按表支试管，按表4-34-3编号后进行实验。编号后进行实验。管号管号管号管号1 12 23 30.50.5淀粉淀粉淀粉淀粉(mL)(mL)2 22 22 2不同不同不同不同pHpH的的的的缓缓缓缓冲液冲液冲液冲液（mLmL）pH5.0pH5.02 2pH6.8pH6.82 2pH8.0pH8.02 2稀稀稀稀释释释释唾液唾液唾液唾液(滴滴滴滴)101010101010摇匀后，将各管置37水浴中处理。（2）每隔1min从的试管中取1滴反应液滴于白瓷板上，随后滴加稀碘液1滴，观察颜色变化。（3）待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液3滴。观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度。解释pH对酶活性的影响。n n4酶的专一性（1 1）取）取2 2支试管，按支试管，按4-44-4编号后进行实验。编号后进行实验。（2 2）将各管摇匀后，一起放入）将各管摇匀后，一起放入3737水浴处理水浴处理10min10min。（3 3）取出试管，分别加入斑氏试剂）取出试管，分别加入斑氏试剂2ml,2ml,混匀。混匀。（4 4）将各管置于沸水浴中煮沸）将各管置于沸水浴中煮沸10-20min10-20min。观察并。观察并解释解释结果结果。管号管号1 12 20.50.5淀扮淀扮(mL)(mL)2 20.5%0.5%蔗糖蔗糖(mL)(mL)2 2稀释唾液稀释唾液(mL)(mL)1 11 1管号管号管号管号1 12 23 30.50.5淀扮淀扮淀扮淀扮(mL)(mL)3 33 33 3pH6.8pH6.8缓冲液缓冲液缓冲液缓冲液(mL)(mL)0.50.50.50.50.50.51 1硫酸铜镕液硫酸铜镕液硫酸铜镕液硫酸铜镕液(mL)(mL)111 1氯化钠溶液氯化钠溶液氯化钠溶液氯化钠溶液(mL)(mL)1 1蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水(mL)(mL)1 1稀释唾液稀释唾液稀释唾液稀释唾液(mL)(mL)1 11 11 1n n5 5唾液淀粉酶的激活剂和抑制剂唾液淀粉酶的激活剂和抑制剂唾液淀粉酶的激活剂和抑制剂唾液淀粉酶的激活剂和抑制剂（1 1）取）取3 3支试管，按表支试管，按表4-54-5编号后进行实验。编号后进行实验。（2 2）将各管摇匀后，一起放入）将各管摇匀后，一起放入3737水浴保温。水浴保温。（3 3）每隔）每隔1min1min从第从第2 2支试管中取出支试管中取出1 1滴反应液滴于滴反应液滴于白瓷板上，滴加稀碘液白瓷板上，滴加稀碘液1 1滴，观察其颜色变化。滴，观察其颜色变化。（3 3）待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液）待颜色呈棕色时，向各管中加稀碘液1-31-3滴。滴。观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，观察各管颜色，比较各管中淀粉水解的程度，并并解释之解释之。