资源描述
共聚焦操作流程(总7页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company Onel-CAL -本页仅作为文档封面,使用请直接删除二、实验环境观察仪器是否有外表明显损坏,如需开启空调,一般控制在25 度。拉上窗帘,避免标本荧光淬灭及杂光干扰。三、四、开机查看实验记录,确认是否马上能开机(注意:汞灯必须在关机 20 分钟以后 才能再开启,一般为 30分钟)。确认后可执行以下操作:(务必先开电源,后 开钥匙!)。1、2、打开PSU (主电源)3、4、 打开激光器(只开启需使用的激光器)1)2) 、 氩 离 子 多 线 激 光 器 ( 458/488/515 , 应 用 染 料 : GFP/FITC/Fluo3/Alexa488/CFP/YFP 等)。3)4)MCPSU半导体综合激光器(LD405应用染料:DAPI/Hoechst/BFP等;LD635应 用染料:CY5/ Alexa647 等)。5)6) LD559 激光器(注意:电源打开后不要马上开钥匙,等待 TEMP 指示灯不闪烁 后,再开钥匙,红色指示灯不闪烁后,可正常使用)。6、打开显微镜电源 IX2-UCB 7、8、打开荧光汞灯(注意:开启后,“15 分钟内勿关”)9、User ID: Administrator10、打开电脑主机、显示器,登陆windows xp系统卜卅,比III-i心 ,双击1-1User ID: Administrator,打开FV10-ASW应用软件mH 0680。五、六、取图1、2、DIC (微分干涉差)明场立体图(1)、插入起偏镜、检偏镜(DIC滑块)。(2)、FV10-ASW软件中点击透射光观察按钮打开卤素灯快门,使用TD滑块(软件 TD lamp 项)控制卤素灯的光强,倒置显微镜下观察标本,进行标本 聚焦。1)、使用手控面板选择合适倍率的物镜下观察(注意若用60X油镜时,检偏镜部位要推上弯杆),并检查各物镜对应的DIC元件。2)、可在检偏镜部位用旋钮进行对比度的调节。 (需要时可使用,一般勿调)(3)、FV10-ASW软件中点击透射光观察按钮 *1,关闭卤素灯快门。打开 DIC 通道,执行取图操作。1) 、调节扫描速度至最快(2.0us/pixel),size为512by,点击席叭询,进行快速预扫,寻找焦平面IEXZcffliri步骤:适当调节HV、gain及offset参数- - (般为能看到图像即2) 、选择AutoHV,放慢扫描速度(扫描速度越慢,扫描时间越长,图像信噪比好,但耗时,易淬灭,一般为10-12.5 us/pixel), size为640by,点越多降噪越好,但扫描时间也越长,一般在HV较高时使用)O4) 、点击“进行取图,并保存。(注意:原始图像一定要保存 为 oib 格式)Filrei Mode5)、去掉,将扫描速度、size恢复至初始状态(扫描速度至最快,即最左端,2.0us/pixel,size为512by),为下一个标本做好准 备。2、荧光图(1)、拉出检偏镜(DIC滑块),打开汞灯机械快门(shutter)。(2) 、FV10-ASW软件中点击汞灯观察按钮,打开汞灯快门,倒置显 微镜下观察标本,进行标本聚焦(找视野)。使用手控面板,根据标本荧光探针选择合适的荧光虑色片及选择合适 的物镜下观察,WU紫外激发/蓝色荧光(eg : DAPI),WB蓝色激发/绿色荧光(eg : FITC、EGFP), WG 绿色激发/红色荧光(eg:Texas Red, Rhodamine, DsRed)(般要求标本在所用的各种荧光探针匹配的荧光虑色片下均能观察 到所需视野,eg : DAPI + FITC+ Texas Red多色荧光探针,需在WU,WB,WG下 均能观察到所需视野,DAPI 般荧光较强,FITC或Texas Red下易找些)。(注意:更换不同倍数物镜时应适当降低物镜再更换,以免损坏物镜;若用 60x油镜时,要插入检偏镜并推上弯杆。)(3)、FV10-ASW软件中点击汞光观察按钮 ,关闭汞灯快门。执行取图 操作。1)、点击 ,添加荧光染料。(最多为二色,多于二色需分别扫 描)若标本使用的荧光染料不是染料库里的染料,可选激发光及发射光谱较接 近的染料代替,这时可适当调整2)、调节扫描速度至最快(2.0us/pixel), size为512by,点击席叭诃,进行快速预扫,寻找焦平面2531 0V賈 也步骤:适当调节HV、gain及offset参数 - (般为能看到各通道uy寻找焦平面,如需放大光学倍数,可适当调节图像即可),快速调节P Sequel rtial3)、选上 Li” m (双染以上一定要选上,可避免激发光串色),选择AutoHV (AutoHV功能为自动匹配扫描速度与HV值,不选易造成 图像出现强度过饱和状态),放慢扫描速度(一般为10-12.5 us/pixel), size为640by,点击xvK-ruMi进行再预扫,调节HV、gain及offset参数至图象清晰尖锐即可。点击停止预扫描Fiber Mode4)、若背景噪音仍过多也可选上Zimm来降低随机噪音干扰(次数越多降噪越好,但扫描时间也越长,一般在HV较高时使用)。5)、点击5也进行取图,保存及相关图像处理。(注意:原始图像- 定要保存为oib格式)Fiber Mode6) 、去掉,将扫描速度、size恢复至初始状态(扫描速度 至最快,即最左端,2.0us/pixel,size为512by),为下一个标本做好取图准 备。四、刻录数据图像保存后,退出 FV10-ASW 软件,刻录数据(注意:必须用新的光盘,严禁 使用U盘、移到硬盘等)。五、关机务必先关钥匙后关电源!2、关闭荧光汞灯(注意:开启后,“15 分钟内勿关”)3、4、 关闭激光器1)、关闭LD559激光器2)、关闭 MCPSU 半导体综合激光器3)、氩离子多线激光器(注意:先关钥匙,千万别马上关闭电源,要等风 扇停止转动后再关闭电源)3、使用擦镜纸沾擦显微镜物镜(注意:一般物镜清洗液为乙醇,擦镜纸为普通擦镜纸;油镜清洗液为30%乙醇70%乙醚,擦镜纸为Olympus公司的擦镜纸。),并把物镜降低到最低点。4、关闭 shutter5、关闭显微镜电源 IX2-UCB6、等待仪器冷却后(尤其光源部分:汞灯、卤素灯、激光),盖上防尘罩注意:激光散热风扇较热,不宜盖住)
展开阅读全文