相差显微镜的原理

相差显微镜的原理、结构和应用曾晓飞相差显微镜是荷兰科学家Zernike于1935年发明的，用于观察未染色标本的显微镜。活细胞 和未染色的生物标本，因细胞各部细微结构的折射率和厚度的不同，光波通过时，波长和振 幅并不发生变化，仅相位发生变化（振幅差），这种振幅差人眼无法观察。而相差显微镜通过 改变这种相位差，并利用光的衍射和干涉现象，把相差变为振幅差来观察活细胞和未染色的 标本。相差显微镜和普通显微镜的区别是:用环状光阑代替可变光阑，用带相板的物镜代替 普通物镜，并带有一个合轴用的望远镜1相差显微镜的基本原理当一束平行光通过被检测标本，遇到一种物点时，由于各物点对光的吸收程度不同，在显微镜 视场中可见到灰度（即明暗度）不同的各物点图像,这是由于光的振幅不同所致。如果标本中的 物体近乎透明，视场中就看不出明显的灰度差别。但由于各种物点对光波产生了衍射和折射； 使得通过的光波因延迟而发生了偏离，其光程就有了一定的差别，即产生了所谓“位相差”。人 眼不能分辨这种位相差,但可以设法将这种位相差转换成振幅差。相差显微镜就是利用光的干涉原理,将位相差转换成振幅 差（即明暗差）的显微镜装置.2相差显微镜的基本构成1）与聚光镜装在一起的可转换的环状光栏它是一套在黑色的玻璃片电有一个无色透光圈 的装置，分别适配低、中、高倍接物镜和油镜。由光源进入的光，只能通过透光环进入光路中。2） 带位相板的物镜 是在物镜透镜聚焦平面上加了一圈灰黑色涂层“板”的接物镜肉眼 可以看到黑色的圈）。3）调焦（对光）目镜 原理类似一种望远镜，用于在显微镜中对上述两种装置的焦点调节，其 长度可以通过手工改变。4）一种绿（或青）色的滤光片。以上4部分均由厂家配套供应,通常在使用前临时装于与之匹配的显微镜上见图2。目前，国 内外销售的高档显微镜，一般都备有相差装置。3 相差显微镜的使用1）安装相差装置将普通显微镜的聚光镜卸下，将带环状光栏的聚光镜装到相匹配的显微镜 上;将显微镜的普通物镜卸下，换上带位相板的物镜;将目镜换成相差显微镜专用的调焦目镜； 在光源进光处放置专用的绿色滤光片（有时可以不用）。2）对光和聚焦通过调焦目镜和粗细调节螺旋的调节,直至视野中可清晰地看到有一个白 圈和一个黑圈。黑圈是固定的,白圈则可通过聚光镜装置上的调节螺旋加以移动，使黑圈与白 圈完全重合。取下调焦目镜，换上显微镜原来的目镜，即可进行检查。4相差显微镜图像的特点相差显微镜有暗相差和明相差之分，暗相差显微镜下看到的细胞和细菌,与染色后的见到的大 不相同。5 相差显微镜的应用1）血液学检验2）尿分析3）对活细胞的连续观察参考文献：1龚尔璋甘平医用物理学M.北京:科学出版社,2001. 177-2朱晓辉朱忠勇相差显微镜的原理、结构和临床应用