蔬菜中农药残留快速检测技术操作流程及注意事项

意事项作者：石丹丹来源：现代农业科技2014年第 02期摘要 介绍了蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的检测原理，详细概述了具体操作流 程，分析了在快速检测过程中易出现的问题，并提出相应的对策，以加快蔬菜农药残留快速检 测方法的推广应用。关键词 蔬菜；农药残留；快速检测技术；原理；操作流程；注意事项中图分类号TS207.53文献标识码A文章编号1007-5739 (2014) 01-0306-01农药残留的快速检测是把好蔬菜质量安全关的手段之一，2012年全国各地基层农技推 广体系建设项目已经启动，农药残留速测仪可以快速检测蔬菜中的农药残留，从而能够有效 地控制农药的使用量。因此，采用快速检测农药残毒技术开展蔬菜质量安全全程跟踪是目前切 实可行的有效措施1-4。1 基本原理根据有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性，造 成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死的机制，用于对农药残留的 检测中。如果蔬菜的提取液中不含有机磷或氨基甲酸酯类农药残留或残留量较低，酶的活性就 不被抑制，试验中加入的底物就被酶水解或少部分被水解，水解产物与加入的显色剂反应产生 颜色。反之，如果蔬菜的提取液中含有一定量的有机磷或氨基甲酸酯类农药，酶的活性就被抑 制，试验中加入的底物就不能被酶水解，从而不显色或颜色变化很小，用分光光度计测定吸光 值随时间的变化，计算出抑制率，就可以判断蔬菜中含有机磷或氨基甲酸类酯农药的残留情况 5-6。2 操作流程现以上海瑞鑫农药残毒速测仪为例，详细讲解农药残留快速检测操作流程。2.1 试剂配制提取液：将1袋提取液粉倒入500 mL的玻璃瓶内，加入510 mL的蒸馏水，摇匀后溶解备 用。酶：加入3.1 mL的提取液。底物：每瓶底物粉加入3.1 mL的蒸馏水。2.2 空白处理校正：仪器每天开机后，应进行1次校正。“检测”确定，选择“校正”。校 0：挡光块放入 检测通道，盖好盖板，按“0”透光变为0.0分批校正，先校正16通道，取出再校正712通 道。校 100：校正好 0 以后，将挡光块取出，保证每个通道都没有东西的情况下，盖好盖板， 按“100”，使每个通道的透光值显示在1001范围即可，若按1次没有校正到位，可以再按1 次。2.3 样品处理取表面干净的蔬菜或瓜果，将样品切成1 cmxl cm大小置于小烧杯内，用天平准确称取1 g，用移液管提取5 mL提取液浸泡，用震荡箱震荡23 min或者在常温下放置10 min，期间 晃动烧杯多次，使蔬菜中的农药能充分溶入液体内。用移液管吸取上清液2.5 mL移入比色 皿，即为检液。2.4 上机测定在比色皿内加0.1 mL酶液及0.1 mL显色剂混匀后放置15 min,然后立即加入0.1 mL底物 混匀，立即倒入比色皿中放入通道，盖好盖板，按启动键开始检测，时间到后显示结果，按 “Y”键保存结果并自动打印记录。3 注意事项3.1 提前做检测空白每次检测样品前都应对药品的活性和仪器的性能给予验证，做空白试验就是体现这个过 程。初始吸光度A1的大小一般在0.10.3, 3 min后吸光度A2在0.60.9，此时显色剂、底 物是最好的，没有失效。若A1值超过0.5，若没有人为操作失误，首先看显色剂是否颜色异 常，然后考虑底物失效的问题。Ac=A2-A1的值在0.30.8时，说明酶没有失去活性，可以 使用；通常应在0.50.6（小于0.3的原因：一是酶的活性不够，二是温度太低）。3.2操作动作快速加底物和上机的过程要尽可能地快速，最好2人共同操作。酶分解底物、分解物再与显色 剂结合的过程是非常快，如操作不熟练就会产生人为误差7。3.3 放置时间和温度时间：在标准方法中规定的是30 min,由于药品质量的改进，现在可以是1520 min （药 品质量的提高，反应时间缩短）。样品放置时间与空白放置时间严格一致。温度：3738 C （恒温箱）。根据药品性质，25 C以上的室温就可以，实际上在温度超 过10 C以上即可操做。3.4 假阴性与假阳性问题假阴性是因为某种农药对某种酶抑制作用很小或无作用而产生的，表现出无农药的假象。 假阳性是由于酶活性降低或失活，导致底物不能被水解，无法与显色剂结合显色造成的，其结 果似乎与提取液中有农药残留类似。解决办法：选择有较好活性、较强敏感性的酶。3.5 检测结果异常情况的处理若一组样品抑制率都是负值，如果已加显色剂，则考虑药品在冰箱存放时间较长、温度太 低的状态使用时经常产生这种情况。检测结果为0.00%的数据，大部分是一个假值，当抑制率小于-10%时，仪器会显示为 0.00%。因此，在使用移液枪时，应尽量与比色皿平行，离开比色皿口，不要把枪头伸到比色 皿内，一次性将药品吹入比色皿。3.6 仪器常见故障及处理一是仪器打印不正常。确保有纸时，字迹重叠或者出现乱码，可能进纸歪或者自动走纸 慢，需要调整纸或者打印时人为辅助。二是无样品时吸光值不为0。可能样池被卡住或者有液 体洒漏，这时需要关机后手转几圈或者清洗，然后重新开机预热使用。处理后仍然不能使用的 则报修。3.7 检测结果合格率为 100%的问题在样品较少的情况下出现的可能性很大；样品较多时，就存在人为因素的干扰；除去抽样 时过滤、上报结果时过滤的因素，检测过程中一些技术原因如假阴性、药品失活、检测细节的 失误等。4 参考文献1 廖瑞红，刘新文，黄丽萍蔬菜农药残留酶法快速检测技术探讨J.现代农业科技，2013 (14)：274， 276.2 梁晓文，丁运华，陈敏，等.蔬菜农药残留快速检测技术研究J.黑龙江农业科学，2013(4)： 125-129.3 赵富强蔬菜中有机磷农药残留的检测技术J.生物学教学，2012(11)： 71-73.4 黄雪梅蔬菜中农药残留快速检测技术的应用探讨J.安徽冶金科技职业学院学报，2011， 21(3)： 73-75.5 姚家彪，赵颖，潘伟，等.蔬菜和食用菌中氨基甲酸酯类农药残留检测技术J.应用化 学， 2010， 27（4）：488-493.6 吴迎春，聂峰水果蔬菜中有机磷农药残留的快速检测技术研究J陕西理工学院学报： 自然科学版， 2009， 25（3）：73-76.7 黑亮，胡月明，严会超，等蔬菜中农药残留的分析检测技术及解决措施J.广东农业科 学， 2007（8）： 63-66.