响应面法设计降低鸡蛋胆固醇中草药复方添加剂的研究

响应面法设计降低鸡蛋胆固醇的中草药复方添加剂的研究收稿日期：基金项目：国家自然科学基金资助项目（20110024）；云南省科技创新强省计划资助项目（2014AB015）作者简介：门文卉，1990.03，女，安徽人，硕士生，中草药及微生物在绿色循环农业中应用通讯作者：邓先余，男，副教授，博士，18388478575.E-mail: dengxy1008门文卉，陈晗，林连兵，邓先余*（昆明理工大学，生命科学与技术学院，云南省昆明市 邮编650500） 摘要：对泽泻、决明子、绞股蓝超微粉碎物用量进行优化组合，探索降低鸡蛋胆固醇的中草药复方添加剂配比，依据响应面法原理使用Box-Behnken设计实验数学模型并评估最优配比下中草药复方添加剂的效果。结果表明，中草药复方最佳配比为：泽泻超微粉碎物用量695.49mg，决明子超微粉碎物用量893.14mg，绞股蓝超微粉碎物用量334.13mg，该条件下检测鸡蛋胆固醇含量为2.48mmol/L，与空白对照相比，试验组的料蛋比降低了33.64%，产蛋率提高了11.73%，有显著性差异(p0.05)；显著降低了蛋黄中的胆固醇含量69.90%和甘油三酯含量41.78%(p0.05)，显著提高蛋鸡免疫能力(p0.05)。响应面法能够用于中草药复方添加剂处方配比优化，此配方能很好的降低鸡蛋胆固醇，为实际生产提供理论依据。关键词：响应面；鸡蛋；胆固醇；中草药复方 中图分类号：S831.5 The study of compound Chinese herb additives optimization for reduction of egg cholesterol content by response surface methodMENG Wen-hui, CHEN Han, LIN Lian-bin, DENG Xian-yu*（College of Life Science and Technology, Kunming University of Science and Technology, Yunnan650500, China）Abstract: The quantity of superfine comminution of Alisma orientale, semen cassia and Gynostemma pentaphyllum were optimized according to the mathematic model built by Box-Behnken Design on the rationale of response surface methodology and evaluate the effect of Chinese herb additives. The result was that: the best Chinese Herb Additives composition contained 695.49mg of superfine comminution of Alisma orientale, 893.14mg of superfine comminution of semen cassia, 334.13mg of superfine comminution of Gynostemma pentaphyllum. Under these conditions, the egg cholesterol concentrations was 2.48mmol/L. Compared with control group, the feed-egg rate was obviously dropped by 33.64%, the egg-laying rate increased obviously by 5.35%(p0.05), significantly reduce egg yolk cholesterol and triglyceride levels by 69.90%, 41.78%(p0.05), significantly increase the immune index(p0.05). Response surface methodology could be adopted for the optimize the ratio of Chinese herb additive formulation, which can lower cholesterol eggs well, provide a theoretical basis for the actual production.Key worsds: response surface methodology; egg; cholesterol content; Chinese herb additives 随着生活水平的不断提高，人们越来越重视饮食结构均衡、来源安全可靠。鸡蛋营养均衡，价格便宜深受人们喜爱，蛋黄粉、全蛋粉等产品的销量也逐年增加，但其胆固醇含量较高，长期大量食用对人类健康造成一定威胁。有研究指出从机体外摄入大量胆固醇会导致血液中的胆固醇随之升高，可能诱发脑血栓、冠状动脉硬化等心血管疾病。为避免人体从蛋中摄取过多的胆固醇并提高鸡蛋营养价值，降低鸡蛋胆固醇的研究十分必要。近年来有研究在饲料中加入他汀类化学合成药物1、益生素2、微量元素3等添加物，或是用生物工程4的方法来降低鸡蛋胆固醇，但存在化学残留、效果不显著或是难度大，短期难以达到效果等缺点。我国中草药资源丰富，且中草药毒副作用小，残留性小，合理选择不同的中草药并合理配比能使效果更好。泽泻为多年沼生泽泻科植物泽泻的干燥块茎，含有三萜、二萜、倍半萜等成分，具有治疗脂肪肝、降血糖、降血压以及减肥等多种作用5。决明子为豆科植物决明的干燥成熟种子，含有蒽醌类、脂肪酸类、吡咯酮类等成分，具有降血脂、降血压等作用6。绞股蓝属草质攀援植物，含有绞股蓝皂苷、黄酮等成分，具有清热解毒、增强机体免疫力等作用7。本研究采用泽泻、决明子、绞股蓝三种中草药复合，制成中草药复方添加剂，通过采用响应面优化设计来研究其降低鸡蛋胆固醇最佳效果的复合配比。1 材料和方法1.1 实验材料 泽泻超微粉碎物、决明子超微粉碎物、绞股蓝超微粉碎物（由四川同泰植物化工有限公司提供，超微粉碎物可以过300目筛），罗氏比色扇，分析天平（上海光正医疗仪器有限公司），游标卡尺（上海汇一尺业有限公司）、总胆固醇（CHO酶法）测试盒、甘油三酯试剂盒（酶法）、高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒（试剂盒均购买于南京建成生物工程研究所）。1.2 实验动物与饲喂 本实验选用190日龄健康、体重和产蛋率相近的绿壳蛋鸡255羽。采用随机分组原则，将其分为17组，每组15羽。预饲期14天，各组统一饲喂基础日粮，预饲期结束时统计各组鸡蛋胆固醇含量，经分析无显著差异才开始进行正式实验，正式实验4周。每组饲喂基础日粮外，按照响应面试验设计添加中草药复方添加剂。1.3 饲养管理及基础日粮组成蛋鸡养殖实验在绿色循环农业实验基地进行。采用三层立体笼饲养，每日喂干粉料2次，每次每羽鸡饲喂50克，自由采食和饮水。保持良好的通风，适宜的温度和湿度。按照常规免疫程序进行防疫和鸡舍消毒。基础日粮参照中华人民共和国专业标准NY/T 33-2004，结合绿壳蛋鸡生长情况，自行设计日粮配方，如表1所示。表1 鸡日粮组成及营养水平Table1 The composition and nutrient levelof hens daily diet 原料组成含量%营养水平含量%玉米粉61代谢能MJ/KG11.42豆粕22粗蛋白18.17麸皮2钙3.73鱼粉4.5总磷0.64石粉9蛋氨酸0.31食盐0.2胱氨酸0.27硫化钙3赖氨酸0.97预混料0.3注：1. 每千克添加维生素A 9000IU，维生素D 2500IU，维生素E 20IU，维生素12 12g，维生素K 2.4mg。2.每千克饲料添加微量元素Mn 100mg，Zn 60mg，Fe 25mg，Cu 5mg，Co 0.1mg。1.4 实验设计 采用响应面分析法（Response Surface Methodology，RSM）寻求最优参数。在前期实验的基础上，选取泽泻超微粉碎物用量（1001000mg）、决明子超微粉碎物用量（1501500mg）、绞股蓝超微粉碎物用量（60600mg）三个因素为自变量，以鸡蛋蛋黄中的胆固醇含量作为响应值，表观中草药复方添加剂降低鸡蛋胆固醇的效果。根据响应面法中的Box-Behnken实验设计原理，运用Design Expert 8.0设计3因素、3水平的响应面实验（实验因素与水平见表2，实验设计见表3，每边中心点为5，共17组实验）。表2 响应面试验因素、水平表Table2 Factors and leve1s of response surface因素编码编码水平-101泽泻超微粉碎物用量A1005501000决明子超微粉碎物用量B1508251500绞股蓝超微粉碎物用量C60330600表3 响应面设计及试验结果Table3 Experimental design and results of response surface编号因素水平蛋黄胆固醇含量(mmol/L)泽泻超微粉碎物用量（mg）决明子超微粉碎物用量（mg）绞股蓝超微粉碎物用量（mg）实测值预测值1-1-105.024.9521-103.923.863-1104.304.3641103.583.655-10-15.185.17610-14.324.317-1014.924.9481013.994.0090-1-14.965.041001-14.354.30110-114.374.42120114.444.36130002.752.52140002.532.52150002.342.52160002.472.52170002.532.521.5 验证实验 在1.2的255羽鸡外另选取30羽鸡，随机分为实验组和空白组两组，每组15羽。实验组日粮中（除基础日粮外还要）添加按照最优配方比配制的降胆固醇中草药复方添加剂，空白对照则只饲喂基础日粮，饲喂方法和管理均同1.3。预饲期2周结束后，进行4周正式试验，收集第28天的鸡蛋，进行蛋黄胆固醇含量测定。把实验组的实验值和预测值相对比，进行模型验证。1.6 中草药复方添加剂效果评估与(评估)方法1.6.1 生产性能指标 实验期间每日以组为单位记录产蛋数和蛋重，每七天末称重一周余料量，统计日均产蛋率、日均采食量和料蛋比等指标。日均产蛋率%=总蛋数/（天数*鸡的数量）*100%日均采食量（g）=（每周饲喂量-每周余料量）/（天数*鸡的数量）料蛋比=总采食量（g）/总蛋重（g）1.6.2 蛋的品质检测实验第28天，随机抽取两组鸡蛋各5枚，测定抽样鸡蛋的蛋品质指标。用分析天平测定蛋重、蛋黄重、蛋壳重，用游标卡尺测定蛋形指数、哈氏单位、蛋壳厚度，用罗氏比色扇测定蛋黄颜色。1.6.3 蛋黄胆固醇含量、甘油三酯含量的检测实验第28天，随机抽取两组鸡蛋各5枚，分离蛋黄后搅匀。称取1.00g蛋黄液，0.9%生理盐水溶解，20ml容量瓶定容待测。利用试剂盒，采用胆固醇氧化酶法测定总胆固醇含量；采用酶法测定甘油三酯含量、高密度脂蛋白胆固醇含量和低密度脂蛋白胆固醇含量。1.6.4 血清生化指标检测实验结束后禁水禁食24小时，每组抽样5羽鸡，进行翅静脉采血35mL，4静置12小时，离心10分钟（4000r/min），抽取上清液待测。利用试剂盒，采用胆固醇氧化酶法测定血清中总胆固醇含量，采用酶法测定甘油三酯含量、采用直接法测定高密度脂蛋白胆固醇含量和低密度脂蛋白胆固醇含量。根据Friedewald公式，极低密度脂蛋白=甘油三脂含量/F，其中甘油三酯含量单位为“mmol/L”，F=2.2，由此可以计算出极低密度脂蛋白的含量。1.6.5 免疫指数的测定 实验结束后禁水禁食24小时。每组随机抽取3羽鸡进行屠宰实验，摘取鸡胸腺、脾脏和法氏囊，滤纸吸取表面血液，并剥离表面脂肪和结缔组织，最后称重。免疫器官指数=免疫器官重（g）/活体重（kg）1.6.6 数据统计与处理 实验数据采用spss19.0软件 ONE-WAY ANOVA进行方差分析，采用Duncans法进行均值的多重比较，结果以“平均值标准差”表示，以P0.05作为显著性差异的判断标准。2 结果与分析2.1模型的建立及显著性检验 利用Design Expert 8.0 软件对实验数据进行多元回归拟合，得到鸡蛋胆固醇（Y）对泽泻超微粉碎物用量（A）、决明子超微粉碎物用量（B）、绞股蓝超微粉碎物用量（C）的回归方程为:Y=2.52-0.45*A-0.20*B-0.14*C+0.095*A*B-0.017*A*C+0.17*B*C+0.88*A2+0.80*B2+1.2*C2 回归方程中，各变量对响应值影响的显著性用F检验法判定，概率p值越小，则显著性程度越高：p0.01为极显著，p0.05为显著。对该模型进行方差分析和拟合度检验，结果见表4和5。由表4可知，模型的F值为99.05，p0.0001，说明该模型方程极为显著;模型不失拟（p=0.530.05），这说明该方程在被研究的回归区域拟合较好；对回归模型显著性分析可知因素C的p值0.0227，小于0.05，说明对降低胆固醇效果的影响显著；A、B的p值分别为 0.0001、0.0037，小于0.01，说明对结果影响极显著；BC的p值为0.0372，表明因素B和C对结果的交互性影响显著，而其他因素两两交互效应不显著。A2、B2、C2的p值均小于0.0001，说明对结果的影响极为显著。由表5可知决定系数为0.99，校正决定系数为0.98，均接近1，模型的变异系数较低3.41，说明该模型相关性较好，试验误差小，可以用此模型对中草药复方添加剂配比进行分析和预测。2.2 各因素及其交互作用对胆固醇含量的影响如图1所示，鸡蛋胆固醇含量随决明子超微粉碎物、泽泻超微粉碎物、绞股蓝超微粉碎物用量的增加而下降。当这三种中草药的用量到达中心值后，鸡蛋胆固醇含量又随这三种中草药用量的上升而上升。等高线形状可以反映各因素交互作用的强弱。由图1可知决明子超微粉碎物（B）、绞股蓝超微粉碎物（C）用量两因素等高线为椭圆形，交互作用明显。当决明子超微粉碎物用量为825mg，绞股蓝超微粉碎物用量为330mg时,胆固醇含量最低。AB两因素、AC两因素等高线呈近似圆形，交互作用不明显。表4 响应面方差分析Table4 Analysis of variance of response surface变异来源Source平方和Sum of Squares自由度df均方Mean SquareF值F ValueP值P Valure模型 Model15.6491.7499.05 0.0001A1.6311.6392.83 0.0001B0.3210.3218.230.0037C0.1510.158.460.0227AB0.03610.0362.060.1946AC0.00110.0010.0700.7992BC0.1210.126.590.0372A23.2413.24184.43 0.0001B22.7212.72155.19 0.0001C26.0816.08346.50 0.0001残差 Residual0.1270.018失拟项 Lack of Fit0.03530.0120.530.6857纯误差 Pure Error0.08840.022总变异 Cor Total15.7716表5 拟合度检验Table5 Goodness of fit test均值Mean3.88误差Deviation（standard deviation）0.13决定系数Coefficient of determination（R-Squared）0.99信噪比Signal to noise ratio（Adequate precision）26.07校正决定系数Adjuested Coefficient of determination（R-Squared）0.98预测决定系数Predicted Coefficient of determination（R-Squared）0.96变异系数C.V%（coefficient of variation）3.41图1 各因素及其交互作用对胆固醇含量的影响Fig1 Effect of variables and their interactions on cholesterol content2.3 模型验证经Design Expert 对实验结果进行响应面分析，可以得到中草药复方最佳配方为泽泻超微粉碎物用量为695.49mg，决明子超微粉碎物用量为893.14mg，绞股蓝超微粉碎物用量为334.13mg，胆固醇含量最低2.46mmol/L。在此配方下饲喂蛋鸡28天，检测鸡蛋胆固醇含量，结果如表6示。实验响应值2.48mol/L与预测响应值接近，表明所选模型可以较好地预测降低鸡蛋胆固醇的中草药复方添加剂参数。表6 最优条件下响应值的预测值和实验值Table6 Predicted and experimental response value at optimum conditions因素水平胆固醇含量mmol/L泽泻超微粉碎物用量决明子超微粉碎物用量绞股蓝超微粉碎物用量预测响应值实验响应值695.49mg893.14mg334.13mg2.462.480.362.4 中草药复方添加剂效果评估2.4.1 生产性能检测如表7所示，实验组与空白组相比，(实验组的)产蛋率由53.43%提高到65.16%，提高了11.73%；日均采食量由77.57g增加到89.45g，增加了13.28%；料蛋比由2.86下降到2.14，下降了33.64%，三个指标均具有显著性差异（p0.05）。表7 中草药复方添加剂对蛋鸡生产性能的影响Table7 Effects of the additive of Chinese herbal medicine compound on laying hens producing performance检测项目组别产蛋率%Laying rate日均采食量（g） Average daily feed intake料蛋比Feed-egg ratio实验组65.160.35a89.450.51b2.140.43b空白组53.430.20b77.570.49a 2.860.15a注：同列数据旁标不同小写字母表示差异显著，P0.05；相同或不标字母表示差异不显著 P0.05；下同。2.4.2 鸡蛋品质检测 如表8所示，实验组和空白组对比，（实验组的）蛋重、蛋形指数、蛋壳厚度、蛋壳相对重差异不显著（p0.05），蛋黄颜色上升两个色度，蛋黄相对重比对照组提高2.41%，具有显著性差异（P0.05）。表8 中草药复方添加剂对蛋品质的影响Table8 Effects of the additive of Chinese herbal medicine compound on egg quality组别项目实验组空白组组别项目实验组空白组蛋壳厚度（mm）Eggshell thickness0.410.070.440.06蛋重（g）Egg weight53.656.3350.443.88蛋形指数Egg shape index1.320.321.190.12蛋黄颜色Yolk color12.290.75a9.640.58b蛋黄相对重（%）Yolk relative weight29.551.44a27.141.26b哈氏单位Haugh unit87.591.7286.071.55蛋壳相对重（%）Eggshell relative weight7.320.27b7.590.39a2.4.3 免疫指数的检测 免疫器官指数是指中草药复方添加剂对蛋鸡免疫能力的作用效果，免疫器官指数=免疫器官重（g）/活体重（kg）。由表9可知，中草药复方添加剂使仔鸡的各种免疫器官指数均有增加。实验组胸腺指数、法氏囊指数和脾脏指数分别为3.16、2.79、1.99，分别比空白组提高了0.23、0.67、0.23，均具有显著差异(P0.05)。 表9 中草药复方添加剂对免疫器官指数的影响Table 9 Effects of the additive of Chinese herbal medicine compound on indices of immune organs in hens项目组别胸腺指数Thymus index法氏囊指数Bursa of Fabricius index脾脏指数Spleen index实验组3.160.13a2.790.19a1.990.14a空白组2.930.19b2.120.19b1.760.13b2.4.4 蛋黄胆固醇含量、甘油三酯含量的检测如表10所示，实验组与空白组相比，蛋黄胆固醇含量由8.24 mmol/L下降到2.48 mmol/L，下降了5.76 mmol/L；甘油三酯含量由14.29 mmol/L下降到8.32 mmol/L，下降了5.97 mmol/L。两个指标均具有显著性差异（P0.05）。表10 中草药复方添加剂对蛋黄甘油三酯和胆固醇含量的影响Table10 Effects of the additive of Chinese herbal medicine compound on triglycerides and cholesterols concentration in egg yolk 项目组别胆固醇(mmol/L)TC甘油三酯(mmol/L)TG实验组2.480.36a8.320.25a空白组8.240.67b14.290.57b2.4.5 血清生化指标的检测 如表11所示，实验组与空白组相比，胆固醇下降52.90%、甘油三酯下降55.23%、低密度脂蛋白胆固醇下降51.85%、极低密度脂蛋白胆固醇含量下降32.62%，高密度脂蛋白胆固醇含量上升75.6%，均具有显著性差异（p0.05）。表11 中草药复方添加剂对血清生化指标的影响Table11 Effects of the additive of Chinese herbal medicine compound on serum biochemical indices项目组别胆固醇(mmol/L)TC甘油三酯(mmol/L)TG低密度脂蛋白胆固醇(mmol/L)LDL-CH高密度脂蛋白胆固醇(mmol/L)HDL-CH极低密度脂蛋白胆固醇(mmol/L)VLDL-CH实验组2.030.26a6.941.32a0.130.03a0.820.16a4.750.71b空白组4.311.16b15.501.46a0.270.02b0.200.03b7.050.66a3 讨论现已有文献报道中草药可以提高蛋鸡生产性能，通过改变饲料成分能改善鸡蛋品质8，如蛋黄颜色和蛋壳厚度。朱宁等7报道以黄芪、山楂、麦芽、党参等12味中药组成的1%复方添加剂能提高仔鸡的平均体重、平均日增重提高6.3%，料蛋比下降3.5%。本实验使用优化后的中草药复方添加剂连续饲喂蛋鸡28天后，与空白对照组相比能显著提高产蛋率、日均采食量、料蛋比,提高蛋黄比重，加深蛋黄颜色，提高鸡蛋品质。本实验结果可能是因为中草药特有的清香能促进鸡群的进食，加快消化，增加采食量，同时中草药可以影响鸡卵子的质量和数量，改善蛋黄颜色和增加蛋黄比重，促进产蛋率的提高。胸腺为细胞免疫器官，脾脏为外周免疫器官，法氏囊是体液免疫器官。免疫器官指数能直观反映蛋鸡的免疫水平。有研究表明中草药能在一定程度上提高机体免疫水平。Wu等9报道贯叶连翘提取物可以提高小鸡体内抗体而调节免疫水平，达到治疗禽流感的目的。10Hueza等人报道在肉鸡日粮中加入0.75%的决明子，饲喂42天发现其可以增强巨噬细胞的活性，增加鸡体内过氧化氢含量。本实验结果表明，和空白对照组相比实验组能够显著提高胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数。蛋鸡约2月龄时法氏囊最发达，以后随着性器官发育日渐成熟而逐步萎缩。大量试验显示，鸡体内的免疫细胞B细胞主要来源于法氏囊。本复方能提高免疫能力的原因可能是其能促进免疫器官的良好生长发育，并且延缓了免疫器官的萎缩，可以直接加强机体的体液免疫功能和器官免疫功能。高密度脂蛋白为血清蛋白之一，可输出胆固醇促进胆固醇的代谢，所以现在作为动脉硬化预防因子而受到重视。高密度脂蛋白运载周围组织中的胆固醇，再转化为胆汁酸或直接通过胆汁从肠道排出。所以高密度脂蛋白是一种抗动脉粥样硬化的血浆脂蛋白，是冠心病的保护因子，俗称“血管清道夫”。低密度脂蛋白是一种运载胆固醇进入外周组织细胞的脂蛋白颗粒，然后胆固醇可被氧化成氧化低密度脂蛋白，当低密度脂蛋白，尤其是氧化修饰的低密度脂蛋白过量时，它携带的胆固醇便积存在动脉壁上，久了容易引起动脉硬化。因此低密度脂蛋白被称为“坏的胆固醇”。本实验配制的中草药复方添加剂能显著降低蛋黄和血清中胆固醇和甘油三酯含量，显著降低血清中低密度脂蛋白胆固醇的含量，升高血清中高密度脂蛋白胆固醇的含量。中医临床辩证一般认为高脂血症主要是气滞血瘀、肝肾亏虚、脾虚痰湿等证引起，在治疗时辨证施治，多用补益肝肾、健脾化湿、活血化瘀、清热通便、消食化痰药。泽泻具有利水、清湿热和泄热等功效，可用于治疗小便不利、水肿胀满、泄泻尿少、痰饮眩晕、热淋涩痛以及高血脂症等病症；决明子入肾经和肝经，有消积通便、清肝益肾、逐痰化浊、降脂等功效；绞股蓝归肝脾，具有健脾祛痰、利湿化瘀、降浊等功效。现代临床药理研究表明泽泻中主要成分为三萜类化合物，能抑制外源性胆固醇和甘油三酯的吸收，影响内源性胆固醇代谢，加速三酰甘油的水解或影响肝脏对其合成，同时升高高密度脂蛋白胆固醇含量，清运动脉壁上的胆固醇，促进肝脏脂质的代谢和排泄11。决明子中主要成分为蒽醌类化合物，具有降血脂的作用。研究指出其可以减少胆固醇的吸收，二来促进脂类转运和排泄，第三可以降低胆固醇合成酶的活性或减少乙酰辅酶A的生成6。绞股蓝主要成分为绞股蓝皂苷，具有抗肿瘤、降血脂、延长细胞寿命的作用12。张文涛13指出泽泻有减轻肝脏脂质蓄积的作用，减小脂肪空泡，减轻细胞炎症浸润的作用。卢锟刚14等人报道将决明子、丹参、绞股蓝配伍使用能显著降低高脂血症小鼠的血中胆固醇和甘油三酯，升高血清中高密度脂蛋白胆固醇。綦振峰15等人报道将山楂和决明子提取物配伍使用饲喂小鼠，能显著降低小鼠的肾脏指数、肝脏指数、低密度脂蛋白胆固醇含量,极显著升高高密度脂蛋白胆固醇含量。本中草药复方添加剂降低胆固醇的作用效果与文献报道一致，都能很好地达到预期目标。4 结论利用实验设计软件Design Expert 8.0，采用Box-Behnken 实验设计，对用于降低鸡蛋胆固醇含量的中草药复方添加剂的配比进行优化，结果表明三种中草药超微粉碎物降低鸡蛋胆固醇含量的效果依次为：泽泻决明子绞股蓝，决明子和绞股蓝之间存在显著的交互作用，泽泻和决明子、泽泻和绞股蓝之间的交互作用不明显。中草药复方添加剂最佳配比为：泽泻超微粉碎物用量695.49mg，决明子超微粉碎物用量893.14mg，绞股蓝超微粉碎物用量334.13mg，该条件下预测鸡蛋胆固醇含量为2.46mmol/L。采用该条件进行了重复试验，得到的验证结果2.48 mmol/L和预测值吻合较好，说明优化效果显著，进一步证明该回归模型是有效可靠的。评估本中草药复方添加剂发现其可以提高产蛋率11.73%，降低料蛋比33.64%；显著降低蛋黄胆固醇含量69.90%和甘油三酯含量41.78%；血清胆固醇下降52.90%、血清甘油三酯下降55.23%、血清低密度脂蛋白胆固醇含量下降51.85%、血清极低密度脂蛋白胆固醇含量下降32.62%，血清高密度脂蛋白胆固醇含量上升75.6%；胸腺指数、法氏囊指数和脾脏指数分别提高了0.23、0.67、0.23。本中草药复方添加剂降低胆固醇的作用较好，能很好的达到预期目标，为实际生产提理论依据。参考文献 1 Qureshi A A, Peterson D M. 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