资源描述
,专题13,生物技术实践,直击考纲,1.酶在洗涤等方面的应用(A)。2.制备和应用固相化酶(A)。3.发酵食品加工的基本方法(A)。4.微生物的分离和培养(A)。5.实验：(1)探究酶在洗涤方面的应用(b)；(2)酵母细胞的固定化技术(b)；(3)腐乳的制作(a)；(4)果酒和果醋的制作(b)；(5)微生物的分离与培养(b)；(6)DNA的粗提取与鉴定(b)。,真题重温,知能回归,典题特训,微生物的利用,真题重温,1.判断下列有关微生物的培养与应用的叙述(1)常用液体培养基分离获得细菌单菌落(2012大纲全国，5B)()(2)用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板(2009安徽，6A)()(3)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有平板划线法和稀释涂布平板法(2011新课标全国，39节选)(),(4)测定培养液中微生物数量，可选用显微镜直接计数法计数(2010山东，34节选)()(5)玉米秸秆中的纤维素经充分水解后的产物可被酵母菌利用发酵生产酒精。培养酵母菌时，该水解产物为酵母菌的生长提供碳源。发酵过程中检测酵母菌数量可采用显微镜直接计数法或稀释涂布平板法计数(2014山东，35节选)(),2.(2013新课标全国，39)临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。回答下列问题：(1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用_法或_法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。,解析微生物纯化的方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法。,划线(平板划线),稀释涂布(或涂布),(2)取该单菌落适当稀释，用_法接种于固体培养基表面，在37培养箱中培养24h，使其均匀生长，布满平板。解析根据微生物的特点对其进行一系列浓度梯度稀释，然后用涂布法接种于固体培养基表面，再在适宜条件下培养。,涂布,(3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A_；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B_；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明_；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的_。,解析对某种抗生素越敏感的致病菌，在该抗生素存在的范围内越不易生存，形成的透明圈就越大。故含A的滤纸片周围出现透明圈，说明有抗生素A的地方该致病菌受到抑制；B的周围没有透明圈，说明致病菌对抗生素B不敏感，通过含C的透明圈要比A的透明圈小，说明该致病菌对C的敏感性比A的弱；D出现了透明圈，说明该致病菌对D敏感，但是在透明圈上出现一个菌落，又排除杂菌污染，判断此菌落的微生物对抗生素D产生了耐药性。答案敏感不敏感该致病菌对C的敏感性比对A的弱耐药菌,(4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素_。解析根据以上分析，为达到抗菌的目的，最好选择抗生素A。,A,3.(2013四川，10节选)普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的-淀粉酶基因转入酵母菌中，经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种(过程如图甲所示)。,(1)图甲中，过程需要的酶有_。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以_作为唯一碳源。、过程需重复几次，目的是_。解析图甲中过程为构建基因表达载体，需要的酶有限制性核酸内切酶及DNA连接酶；欲筛选可直接利用淀粉的菌种，宜制备以淀粉为唯一碳源的选择培养基；图示、过程需重复几次，其作用在于“纯化”，从而进一步筛选出分解淀粉能力更强的酵母菌。,限制性核酸内切酶、DNA,连接酶,淀粉,进一步筛,选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌,(2)某同学尝试过程的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_；推测该同学接种时可能的操作失误是_。解析图乙所示培养基平板中的菌落呈分散分布，应为采用稀释涂布平板法接种的结果，然而，该平板上菌落并非“均匀分布”而是相对集中于左侧，这可能是由于制作平板时“涂布不均匀”所致。,稀释涂布平板法,涂布不均匀,(3)以淀粉为原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵，接种_菌的发酵罐需要先排气，其原因是_。解析若以“淀粉”为原料，则相对于普通菌种，工程酵母菌因转入了-淀粉酶基因，其利用淀粉的能力将更强，故发酵产生CO2的能力更强，因此需要先排气。,工程酵母,工程酵母菌分解淀粉产生葡萄糖的能力强，导,致酒精发酵产生CO2的速率更快,1.微生物的培养,知能回归,(1)无菌技术：主要包括消毒和灭菌。消毒方法：常用煮沸消毒法、巴氏消毒法。常用灭菌方法：灼烧灭菌接种环、接种针等金属器具；干热灭菌主要针对玻璃器皿等；高压蒸汽灭菌主要针对培养基等。,(2)如图为倒平板操作过程，操作时要待培养基冷却至50左右时，在酒精灯火焰附近进行。制备固体培养基最后要将平板倒置，其主要目的是防止培养皿盖上的水珠滴入培养基造成污染。,(3)平板划线操作,(4)稀释涂布平板法：先将菌液进行一系列梯度稀释后涂布平板，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而在培养基表面形成单个菌落。如图所示：,2.某种微生物的分离与计数(1)分离选择培养基培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。培养基中缺乏氮源时，可以分离得到固氮微生物。当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。,(2)计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数a.筛选菌株：利用以尿素为唯一氮源的选择培养基筛选菌株。b.计数方法：活菌计数法和显微镜直接计数法。前者为了增强实验的说服力和准确性，则需设置重复组，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。c.过程：土壤取样样品的稀释微生物的培养与观察。,分解纤维素的微生物的分离a.实验原理,即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。b.流程：土壤取样选择培养梯度稀释涂布平板挑选菌落。,(3)鉴定方法,1.下列有关实验室中微生物培养和分离的叙述，错误的是()A.获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵B.高温灭菌的目的是杀死所有微生物C.划线分离可在培养基上获得均匀分布的单菌落D.稀释涂布平板法可用于计数活菌数目,典题特训,解析微生物培养过程中要进行无菌操作，防止外来杂菌的入侵，A正确；高温灭菌可杀死所有微生物，B正确；划线分离可在培养基上获得逐渐变稀分布的单菌落，C错误；稀释涂布平板法中根据菌落的数目可计数活菌数目，D正确。答案C,2.某学者欲研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。下列操作错误的是()A.利用平板划线法对细菌进行计数B.以石油为唯一碳源的培养基筛选C.采用稀释涂布平板法分离菌种D.称取和稀释土壤时应在火焰旁,解析稀释涂布平板法有利于将细菌分离形成单个菌落，利于计数，因此，如果是通过菌落数来估算细菌的数量，应该采用稀释涂布平板法对细菌进行计数；要筛选出能分解石油的细菌，应该采用选择培养基，即以石油作为唯一碳源进行培养，在这种培养基上只有能分解石油的细菌才能生长繁殖；操作时要无菌操作，称取和稀释土壤应在火焰旁。答案A,3.下列关于微生物的营养，说法正确的是(多选)()A.对一些微生物来说，同一种物质既可作碳源又可作氮源B.凡是碳源都能提供能量C.除水以外的无机物仅提供无机盐D.无机氮源也可能提供能量解析此题考查我们对微生物的营养和能源的理解。对一些微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳源，又是氮源。CO2是光能自养细菌的碳源，但不能提供能量。CO2和N2是无机物，也是微生物的碳源和氮源。硝化细菌所利用的氮源是无机氮源氨，同时氨也为硝化细菌提供用以化能合成作用的能源。,AD,4.下列对无菌操作转接培养物的操作顺序的叙述，正确的是()接种环在火焰上灼烧灭菌在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞打开棉塞的试管口通过火焰将已冷却的接种环伸入菌液，沾取一环菌液转移到一装有无菌培养基的试管中将试管口塞上棉塞接种环再次灼烧灭菌A.B.C.D.,C,5.(2014新课标全国，39)为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌分离等工作。回答下列问题：(1)该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为_。,解析为了检测培养基平板灭菌是否合格，可在涂布接种前，随机取灭菌后的空白平板先行培养一段时间。0.1mL稀释液中平均有(393837)/338个活菌，则每毫升稀释液中活菌的数目为38/0.1380，则稀释前每毫升水样中活菌数目为3801003.8104，则每升水样中活菌数目为3.810410003.8107。,答案检测培养基平板灭菌是否合格3.8107,(2)该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过_灭菌，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是_。,解析接种环、接种针等金属用具可直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，以达到迅速彻底灭菌的目的。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，其目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。,灼烧,将聚集的菌体,逐步稀释以便获得单个菌落,(3)示意图A和图B中，_表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。,解析比较图A和图B可以看出：A培养基中细菌的分布呈线性，是用平板划线法接种培养后得到的结果；B培养基中细菌均匀分布，是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。,B,(4)该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液中_的含量，同时可使菌体与培养液充分接触，提高_的利用率。解析振荡培养可以提高培养液中溶解氧的含量，还可以使菌体与培养液充分接触，提高了营养物质的利用率，因此振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。,溶解氧,营养物质,6.(2014四川，10)有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境。研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分离降解苯磺隆的菌株和探索其降解机制的实验过程如图甲、图乙所示。,(1)微生物生长繁殖所需的主要营养物质有碳源、水、_四类，该实验所用的选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_。解析微生物生长繁殖需要的主要营养物质包括碳源、氮源、水和无机盐四类。根据题意可知，土壤中某些微生物有降解苯磺隆的能力，该实验的目的是探索其降解机制，因此，需要分离出有降解苯磺隆能力的土壤中的某些微生物，故选择培养时为了排除其他碳源的干扰，培养基中唯一碳源只能是苯磺隆。,氮源和无机盐,只有能利用苯磺隆的微生物能,正常生长繁殖,(2)与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基常需添加生长素和_，这些植物激素一般需要事先单独配制成_保存备用。解析与微生物培养基相比，植物组织培养的培养基需要添加生长素和细胞分裂素，用于调节植物细胞再分化；这些植物激素一般需要事先单独配制成母液保存备用。,细胞分裂素,母液,(3)纯化菌株时，通常使用的划线工具是_。划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，其他划线上有菌落。造成划线无菌落可能的操作失误有_。,解析纯化菌株时，通常使用的划线工具是无菌接种环。划线的平板培养后，发现第一划线区域的划线上不间断地长满了菌，第二划线区域所划的第一条线上无菌落，而其他划线上有菌落。造成此现象的原因可能有两个：一是接种环灼烧后未冷却，菌种接触到高温的接种环而死亡；二是划第二划线区域第一条线时未从第一区域末端开始。答案接种环接种环灼烧后未冷却；划线未从第一区域末端开始,(4)为探究苯磺隆的降解机制，将该菌种的培养液过滤离心，取上清液做图乙所示实验。该实验的假设是_，该实验设计是否合理？为什么？_。,解析根据图乙所示实验中的上清液加入蛋白酶溶液推测，实验目的是探究目的菌株是否能分泌降解苯磺隆的蛋白质，实验设计不合理之处是缺少不加蛋白酶溶液、其他条件同图乙的空白对照。,泌降解苯磺隆的蛋白质,不合理，缺少空白对照,目的菌株能分,7.研究被石油污染过的土壤中细菌数量，并从中筛选出能分解石油的细菌。为了分离和纯化高效分解石油的细菌，科研人员利用被石油污染过的土壤进行如图A所示的实验。,(1)配制好的培养基通常可以使用_法灭菌。与步骤中培养基成分相比，步骤中培养基成分的最大区别是_。,解析培养基灭菌用高压蒸汽灭菌，为筛选出能分解石油的细菌，所以石油是唯一碳源。,高压蒸汽灭菌,石油是唯一碳源,(2)接种细菌常用的方法有_。若经过过程后获得的结果为图B所示，则所操作方法如图_所示。,解析接种细菌常用的方法有平板划线法和稀释涂布平板法。图B为平板划线法，如图甲所示。,平板划线法和稀释涂布平板法,甲,(3)步骤后取样测定石油含量的目的是_。对步骤某瓶中细菌计数的方法有两种，一种方法是_，其菌落数可代表活菌数；另一种方法是_，该方法需要借助一块特殊的载玻片，其名称为_。解析步骤进一步操作是为筛选出分解石油能力最好的细菌，微生物计数可用稀释涂布平板法和显微镜直接计数法(血细胞计数板计数法)。,筛选出分解石油,能力最好的细菌,稀释,涂布平板法,显,微镜直接计数(血细胞计数板计数法),血细胞计数板(血球计数板),真题重温,知能回归,典题特训,微生物在传统发酵技术中的应用,1.判断下列有关传统发酵技术的叙述(1)在果酒发酵后期拧开瓶盖的间隔时间可延长(2012江苏，21A)()(2)在家庭中用鲜葡萄制作果酒时，让发酵装置接受光照并放在45处(2010北京，1AD)()(3)在果酒和果醋制作过程中，果酒的制作过程是在缺氧条件下，而果醋整个制作过程一直处于有氧条件下(2010江苏，7AC改编)(),真题重温,(4)与果醋、果酒制作相比，腐乳的制作所需要的适宜温度最高，所用菌种为乳酸菌(2011江苏，3AC改编)()(5)在腐乳制作过程中必须有能产生蛋白酶的微生物参与，所用豆腐的含水量为70%左右，水分过多腐乳不易成形(2008江苏，17AB改编)(),2.(2013江苏，14)某研究性学习小组以樱桃番茄为材料进行果酒、果醋发酵实验。下列相关叙述正确的是()A.酵母菌是嗜温菌，所以果酒发酵所需的最适温度较高B.先供氧进行果醋发酵，然后隔绝空气进行果酒发酵C.与人工接种的发酵相比，自然发酵获得的产品品质更好D.适当加大接种量可以提高发酵速率、抑制杂菌生长繁殖,解析醋酸菌是嗜热菌，果醋发酵所需的最适温度较高，A错误；进行果酒、果醋发酵实验，要先隔绝空气进行果酒发酵，再供氧进行果醋发酵，B错误；人工接种的菌种品质更好，且不容易存在杂菌污染，故比自然发酵获得的产品品质更好，C错误；适当加大接种量，让菌体快速形成优势菌群，可以抑制杂菌生长，提高发酵速率，D正确。答案D,微生物在传统发酵技术中的应用,知能回归,1.下列有关传统果酒、果醋发酵和腐乳制作的比较不正确的是(多选)()A.果酒、腐乳发酵的主要微生物属于真核生物，果醋发酵菌种属于原核生物B.果酒制成后只需将装置转移至温度较高的环境中即可制作果醋C.果酒和果醋发酵在无氧环境下进行，腐乳发酵在有氧条件下进行D.果酒、果醋和腐乳制作过程利用的都是微生物胞内酶,典题特训,解析果酒发酵的微生物是酵母菌，为真核生物，腐乳发酵的微生物是毛霉，为真核生物，果醋发酵的微生物为醋酸菌，为原核生物，故A正确；果酒制成后转移至较高温度的环境中，还需要通入氧气，才可以制作果醋，故B错误；果酒发酵在无氧条件下进行，而果醋和腐乳发酵都需要有氧条件，故C错误；制作果酒、果醋利用的是微生物的胞内酶，腐乳利用的是微生物的胞外酶(主要是毛霉分泌的蛋白酶和脂肪酶)，故D错误。答案BCD,2.利用如图装置制作果酒和果醋，下列叙述正确的是(多选)(),A.制作果酒时应关闭阀b，适时打开阀a几秒钟B.制作果酒时如果关闭阀a，打开阀b，会导致爆瓶C.制作果醋时需打开阀a通气，打开阀b排气D.制作果醋时把发酵装置放到3035环境中比较适宜,解析图示装置中，阀a控制排气，阀b控制进气，所以制作果酒时应关闭阀b，适时打开阀a几秒钟以排出产生的气体；如果关闭阀a，打开b，产生的气体不能排出，会使发酵液从右侧导管排出，不会导致爆瓶；制作果醋时，打开阀a是为了排气，打开阀b是为了通气；制作果醋时发酵装置应放到3035环境中比较适宜。答案AD,3.下列关于腐乳制作的叙述中，错误的是()A.毛霉可利用蛋白酶将蛋白质分解成小分子肽和氨基酸B.豆腐胚表面有毛霉、青霉、曲霉等微生物，它们之间存在竞争关系C.腐乳的前期制作温度应控制在1518环境条件下D.加入较多的香辛料既能调味又能缩短腐乳成熟的时间,解析制作腐乳主要是利用毛霉等微生物产生的蛋白酶和脂肪酶将豆腐内的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸，脂肪分解成甘油和脂肪酸，从而改变豆腐的成分和口味；豆腐胚表面长有毛霉、青霉、曲霉等微生物，它们都利用豆腐内的营养来维持生命活动，因而存在竞争关系；毛霉生长的适宜温度是1518；加入较多的香辛料能调味，杀菌防腐，酒精含量越高，对蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延长。答案D,4.用酵母菌使葡萄汁产生葡萄酒，当酒精含量达到12%16%时，发酵就停止了。有关叙述不正确的是()A.酒精对酵母菌有毒害作用，后期细胞生命活动减弱B.产生酒精的同时也有CO2生成，所以发酵过程中需拧松瓶盖放气C.产物积累使pH值下降，同时营养物质减少，种群数量下降D.氧气过少导致其无法呼吸，细胞中即无法合成ATP,解析酒精具有消毒的作用，对酵母菌同样有毒害作用，A正确；产生酒精的同时也有CO2生成，所以发酵过程中需拧松瓶盖放气，B正确；酒精发酵过程中，产物积累使pH值发生改变，营养物质减少，种群数量下降，C正确；酒精发酵是在无氧条件下，不需要氧气，D错误。答案D,5.某生物兴趣小组的同学利用新鲜苹果榨取果汁并制作果酒，简要流程如下：发酵果酒(1)实验过程中，有同学发现榨取的果汁非常浑浊，解决的方法是_。(2)分离酵母菌应使用_培养基，固定化酵母细胞常采用_法。,新鲜苹果清洗干净去掉果核榨汁机榨汁果汁,从成品果酒中分离酵母菌扩大培养固定化酵母细胞,解析(1)果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要组成成分之一，若发现榨取的果汁非常浑浊，用果胶酶处理，可使果汁变得澄清。(2)分离酵母菌应使用选择培养基，因为细胞比酶分子大，故制备固定化细胞时常采用包埋法。答案(1)用果胶酶处理(2)选择包埋,(3)酵母菌的酒精发酵过程一般控制在_温度范围最适合酵母菌繁殖，请简要说明理由_。(4)在酸性条件下，可用_来检测发酵产物中是否有酒精产生。若想进一步检测所得果酒中酵母菌的密度，可采用_法。解析(3)酵母菌进行酒精发酵的适宜温度是1825，(4)果汁发酵后，可以用重铬酸钾来检验是否有酒精生成，在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈灰绿色，稀释涂布平板法能用于酵母菌的计数。,1825,在此温度下，酶的活性最,强，代谢最旺盛,重铬酸钾,稀释涂布平板,(5)果汁为酵母菌的生长和繁殖提供的营养成分是_。(6)发酵完成后，生物兴趣小组同学制作的果酒品质非常好。为了方便后续年级使用，可将菌液_保存。解析(5)微生物的营养物质有碳源、氮源、水、无机盐和生长因子等，故果汁为酵母菌的生长和繁殖提供的营养成分是碳源、氮源、水、无机盐和生长因子等。(6)长期保存菌种应将菌种转移到甘油中，与甘油充分混合后，放在20的冷藏箱中。,碳源、氮源、,水、无机盐和生长因子等,转移到甘油中，与甘油充分,混合后，放在20的冷藏箱中,6.葡萄糖经酒精发酵可以产生葡萄酒，进一步经醋酸发酵可以产生葡萄醋，请利用相关的知识回答问题：(1)从将葡萄汁装入发酵瓶到酒精发酵完毕的过程中，酵母菌进行的细胞呼吸方式是_。解析利用葡萄汁制作葡萄酒，装入发酵瓶后，一开始酵母菌进行有氧呼吸，迅速增加数量，随着氧气消耗，后期进行无氧呼吸，产生酒精。,有氧呼吸、无氧呼吸,(2)甲、乙两位同学将葡萄榨成汁后分别装入相应的发酵瓶中，在温度等适宜的条件下进行发酵，如下图所示。,在排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接，其目的是_。请找出图中实验操作的错误：甲图中的错误是_，乙图中的错误是_。,解析为防止空气中的微生物污染发酵瓶，在排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接。甲图中未夹住发酵瓶的进气管，这样酵母菌会一直进行有氧呼吸，不能产生酒精；乙图中瓶中发酵液过多，淹没了排气管在瓶内的管口，这样不能排出气体，可能会排出发酵液。,答案防止空气中的微生物污染发酵瓶甲：未夹住发酵瓶的进气管乙：瓶中发酵液过多，淹没了排气管在瓶内的管口,(3)为了提高果酒的品质，更好地抑制其他微生物的生长，常常加入人工培养的酵母菌。为了分离纯化酵母菌，最简便的接种方法是_。(4)若果汁中混杂有醋酸菌，在果酒发酵旺盛时，醋酸菌_(能/不能)将果汁中的糖发酵形成醋酸，其原因是_。,解析(3)分离纯化酵母菌，常用的接种方法是平板划线法。(4)醋酸菌进行有氧呼吸，若果汁中混杂有醋酸菌，在果酒发酵旺盛时，果酒发酵时的缺氧环境能抑制醋酸菌生长，同时果酒发酵的最适温度也低于醋酸菌生长的最适温度，所以醋酸菌不能将果汁中的糖发酵形成醋酸。答案(3)平板划线法(4)不能果酒发酵时的缺氧环境能抑制醋酸菌生长，果酒发酵的最适温度也低于醋酸菌生长的最适温度,7.腐乳是我国古代劳动人民创造出的一种经过微生物发酵的大豆食品。下面是腐乳制作的流程示意图：让豆腐上长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制(1)现代科学研究表明，许多种微生物参与了豆腐的发酵，其中起主要作用的是毛霉，毛霉是一种_状真菌。,解析毛霉是一种丝状真菌。,丝,(2)腐乳制作的原理是_。,解析腐乳的制作原理是毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶能将脂肪水解成甘油和脂肪酸。,毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，脂肪酶能将脂肪水解成甘油和脂肪酸,(3)传统的制作过程中，豆腐块上生长的毛霉来自_。而现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优良的毛霉菌种接种在豆腐上，这样可以_。,解析传统的腐乳制作过程中，不接种微生物，只能来自空气中的毛霉孢子；现代的腐乳生产在无菌条件下进行操作，可以防止杂菌污染，保证产品质量。,空气中的毛,避免其他菌种的污,霉孢子,染，保证产品的质量,(4)加盐的作用是_和_。(5)卤汤是由酒及各种香辛料配制而成的，加酒的作用是_和_。解析(4)制作腐乳的过程中，加盐的作用有两方面：析出豆腐中的水分，使豆腐变硬；抑制微生物的生长，避免豆腐腐败变质。(5)卤汤中加酒的作用有两方面：抑制微生物的生长和使腐乳具有独特的风味。,析出豆腐中的水分，使豆腐变硬,抑制微生,物的生长，避免豆腐腐败变质,抑制微,生物的生长,使腐乳具有独特的风味,真题重温,知能回归,典题特训,酶的应用,判断下列关于酶的叙述(1)玉米淀粉经酶解形成的葡萄糖可在葡萄糖异构酶的作用下转化成果糖。利用固定化技术可使葡萄糖异构酶重复利用，从而降低生产成本(2014山东，35改编)()(2)反应产物对固定化酶的活性没有影响(2013江苏，6B)()(3)相同pH时加酶洗衣粉洗涤效果好于普通洗衣粉(2012江苏，16C)(),真题重温,(4)利用固定化酵母细胞进行发酵，糖类的作用只是作为反应底物(2009江苏，3D)()(5)刚溶化的海藻酸钠应迅速与活化的酵母菌混合制备混合液(2010江苏，25A)()(6)在酶的制备和应用中，透析、电泳和酸解等方法常用于酶的分离与纯化(2011江苏，15B)(),1.加酶洗衣粉的洗涤原理,知能回归,2.固定化酶和固定化细胞的比较,1.(2014江苏，18)下列关于加酶洗衣粉的叙述，正确的是()A.高温易使酶失活，因此冷水洗涤去污效果应该比温水好B.洗衣粉中表面活性剂对碱性蛋白酶活性有一定的促进作用C.在pH低于7.0的自来水中，碱性蛋白酶依然能起作用D.洗衣粉中酶主要是通过快速分解溶在水里的污渍发挥作用,典题特训,解析A项，酶有最适温度，加酶洗衣粉的酶在水温为4560C时能充分发挥洗涤效果。B项，如果将酶直接加入到洗衣粉中，洗衣粉中的表面活性剂能影响碱性蛋白酶的活性，甚至使酶失活。C项，加酶洗衣粉中的酶是经过特殊处理的，能耐酸、耐碱，可忍受表面活性剂和较高的温度。D项，加酶洗衣粉中的酶的作用是催化衣物上的污渍分解，使其容易从衣物上脱落下来。答案C,2.下列关于生物技术实践的叙述，正确的是(多选)()A.在固定化酵母实验中，溶解海藻酸钠时，最好采用小火或持续加热的方法B.用加酶洗衣粉洗涤污渍时，浸泡时间不足会造成洗涤效果差C.利用DNA不溶于冷酒精的性质除去溶于酒精的物质，从而进一步提纯DNAD.腐乳制作过程中，添加料酒、香辛料和盐，均可以抑制杂菌的生长,解析在固定化酵母细胞实验中，溶解海藻酸钠时，最好采用小火或间断加热的方法，A错误；酶与底物作用存在时间依赖性，B正确；利用DNA不溶于冷酒精而杂质可溶的性质，提纯DNA，C正确；含盐量高会使微生物细菌细胞不断失水，导致细胞脱水致死，而起到防腐的作用，D正确。答案BCD,3.下面是制备固定化酵母细胞的实验步骤，请回答：酵母细胞的活化配制CaCl2溶液配制海藻酸钠溶液海藻酸钠溶液与酵母细胞混合固定化酵母细胞(1)在_状态下，微生物处于休眠状态。活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复_状态。活化前应选择足够大的容器，因为酵母细胞活化时_。固定化细胞技术一般采用_法，而固定化酶常用_法和_法。,解析在缺水的状态下，微生物处于休眠状态。活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态。活化前应选择足够大的容器，因为酵母细胞活化时体积会增大，以免涨破容器或溢出。固定化细胞技术一般采用包埋法，固定化酶常用化学结合法和物理吸附法。这是因为细胞体积大，而酶分子很小；体积大的细胞难以被吸附或结合，而体积小的酶容易从包埋材料中漏出。答案缺水正常的生活体积会增大包埋化学结合物理吸附,(2)影响实验成败的关键步骤是_。海藻酸钠溶化过程的注意事项是_。如果海藻酸钠浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞数目_。如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，说明_。(3)该实验中CaCl2溶液的作用是_。,解析(2)影响实验成败的关键是配制海藻酸钠溶液，这是因为如果海藻酸钠浓度过高，很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验结果。(3)CaCl2溶液的作用是使胶体聚沉。,配制海藻酸钠溶液,小火加热(或间断加热或小火间断加热)，不断搅拌,较少,(海藻酸钠浓度偏高)制作失败,使胶体聚沉(或形成稳定的结构),4.某同学为探究加酶洗衣粉的洗涤效果，按下表的步骤进行实验操作：,(1)该实验的目的是_。(2)请分析该同学的实验设计中存在的问题，并提出改进措施。_。(3)步骤3和步骤4能否调换？并说明理由。_。(4)、号烧杯中加入的自来水、洗衣粉、含油渍的衣服及保温时间、搅拌速度和时间均相同，这是为了_，以便得出科学结论。,解析根据题干中的实验操作顺序，可以判断出该实验的自变量是温度，即探究不同温度对加酶洗衣粉的洗涤效果的影响。其他条件应保持一致，如水量、水质、洗衣粉的量、衣物的质料、衣物的大小、污渍量、浸泡时间和洗涤时间等。在做实验时，应先让每一个实验组处于所设置的温度且恒温，再加入洗衣粉，以保证酶发挥作用时的温度，故步骤3与步骤4不能调换。,答案(1)探究不同温度对加酶洗衣粉的洗涤效果的影响(2)应选用大小相同的白布，分别滴加4滴同种的植物油，使油渍大小相同；选择的水温不合适，考虑洗涤成本，应根据当地一年中的实际气温变化来确定水温梯度，如选取5、15、25、35的水温(3)不能调换，因为加酶洗衣粉中的酶在常温时会分解部分油渍(4)避免因水量、水质、洗衣粉的量、衣物的质料、衣物的大小、污渍量及浸泡时间和洗涤时间不同给实验结果带来误差,5.在20世纪50年代，酶已经大规模地应用于各个生产领域，到了70年代又发明了固定化酶与固定化细胞技术。(1)在实际生产中，固定化酶技术的优点是_。与固定化酶技术相比，固定化细胞技术固定的是_。,酶既能与反应物接触，又容易与产物分离，且固定在载体上的酶能反复使用,多酶系统(一系列、多种酶),(2)制备固定化酵母细胞，常用的包埋材料是_，使用了下图中方法_(填出号码及名称)。,包埋法,海藻酸钠,(3)制作固定化酵母细胞时，充分混合均匀的酵母细胞溶液可在饱和_溶液中形成凝胶珠。部分同学实验制得的凝胶珠不是圆形或椭圆形，其主要原因是_。,海藻酸钠浓度过高(或针筒离液面过近，高度不够),CaCl2,真题重温,知能回归,典题特训,的粗提取与鉴定,DNA,1.判断下列有关DNA技术的叙述(1)提取细胞中的DNA需用蒸馏水涨破细胞(2009江苏，23A改编)()(2)用菜花替代鸡血作为实验材料进行“DNA的粗提取与鉴定”实验，其实验操作步骤相同(2011江苏，19D改编)(),真题重温,(3)用不同浓度NaCl溶液反复溶解与析出DNA可去除蛋白质(2009江苏，23B)()(4)利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，将丝状物溶解在2mol/LNaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色(2011江苏，19C)(),2.(2013江苏，4)某同学用洋葱进行DNA粗提取和鉴定实验，下列操作错误的是()A.加入洗涤剂后用力进行快速、充分的研磨B.用蛋白酶纯化过滤后的研磨液中的DNAC.加入酒精后用玻璃棒轻缓搅拌D.加二苯胺试剂摇匀后沸水浴加热解析本题可用排除法进行解答。破碎植物细胞时，加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作，A错误。,A,1.实验原理(1)DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，其中在物质的量浓度为0.14mol/L时最低。(2)DNA不溶于酒精，但是细胞中的一些有机物如某些蛋白质则溶于酒精，因此可以用酒精提纯。,知能回归,(3)DNA遇二苯胺(沸水浴)会被染成蓝色，因此，二苯胺可用来鉴定DNA分子。2.实验流程选取材料破碎细胞，获取含DNA的滤液去除滤液中的杂质DNA的析出与鉴定。,1.下面是某同学用动物肝脏做“DNA粗提取与鉴定实验”的操作，正确的是()A.在烧杯中加入肝脏和蒸馏水并进行搅拌，使细胞破裂释放核物质B.调节NaCl溶液浓度至0.14mol/L，过滤后取滤液进行后续步骤的操作C.在含DNA的滤液中加入嫩肉粉，使蛋白质与DNA分开D.向溶有DNA的NaCl溶液中加入适量二苯胺试剂后溶液呈蓝色,典题特训,解析因肝脏细胞没有分散开，在烧杯中加入肝脏和蒸馏水并进行搅拌，不能使细胞破裂，应研磨；DNA在0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度很低，过滤后DNA不在滤液中；嫩肉粉中有蛋白酶可使蛋白质分解；向溶有DNA的NaCl溶液中加入适量二苯胺试剂后需沸水浴加热溶液才能呈蓝色。答案C,2.下列有关“DNA粗提取与鉴定”实验的叙述，正确的是()A.新鲜猪血、菜花等动植物材料均可用于DNA的粗提取B.植物材料需先用洗涤剂破坏细胞壁再吸水涨破C.DNA不溶于95%的冷酒精而溶于2mol/L的NaCl溶液D.溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺试剂后即呈蓝色,解析哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核和细胞器，不含DNA，不能用于提取DNA，因此猪血不能用来作为提取DNA的材料，故A错误；用植物材料提取DNA时，通过研磨法破坏细胞壁，用洗涤剂瓦解细胞膜，故B错误；DNA不溶于95%的冷酒精，但溶于2mol/L的NaCl溶液，故C正确；溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺试剂后需要沸水浴加热才能呈蓝色，故D错误。答案C,
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