生化实验二果蔬中总糖及还原糖含量的测定实用教案

综合实验一：果蔬(u sh)成分的生化分析实验一 果蔬中维生素C的定量测定（4学时）实验二 果蔬中总糖及还原糖含量的测定（4学时）实验三 果蔬中蛋白质含量的测定（4学时）实验四 果蔬中过氧化物(u yn hu w)酶分析（12学时）第1页/共21页第一页，共21页。实验材料：冬枣柚子14组梨（2个品种(pnzhng)）58组盘菜萝卜 912组第2页/共21页第二页，共21页。第3页/共21页第三页，共21页。第4页/共21页第四页，共21页。第5页/共21页第五页，共21页。 多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解(shuji)成具有还原性的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。 蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。其原理：糖类在较高温度下可被硫酸脱水成糠醛或糠醛衍生物，再与蒽酮缩合成蓝色化合物，在620nm处有最大吸收。 第6页/共21页第六页，共21页。第7页/共21页第七页，共21页。第8页/共21页第八页，共21页。012345标准葡萄糖溶液标准葡萄糖溶液/ /mL00.10.20.30.40.5蒸馏水蒸馏水1.00.90.80.70.60.5置冰水浴中置冰水浴中5min蒽酮试剂蒽酮试剂4.04.04.04.04.04.0煮沸煮沸10，冷却后室温放置，冷却后室温放置10，在，在620nm处比色处比色A620nm步骤管号第9页/共21页第九页，共21页。 以吸光度为纵坐标，各标准(biozhn)液浓 度 （ m g / m L ） 为 横 坐 标 做 图 得 标 准(biozhn)曲线。第10页/共21页第十页，共21页。2、样品中还原糖的提取和测定 称取1g果蔬，加水约3mL，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30mL蒸馏水冲洗研钵23次，洗出液也转入三角烧瓶中。于50水浴中保温约0.5h（使还原糖浸出），取出，冷却后定容至100mL。过滤后冰箱保存。 冬枣、柚子、梨：取滤液1mL100mL 盘 菜 ( p n c i ) 、 萝 卜 ： 取 滤 液10mL100mL第11页/共21页第十一页，共21页。 吸取1mL滤液置于试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4mL蒽酮试剂，沸水浴中煮沸10min，取出冷却后比色，其他(qt)条件与做标准曲线相同。测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。第12页/共21页第十二页，共21页。3、样品中总糖的提取、水解和测定 称取1g果蔬，加水约3mL，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约12mL蒸馏水冲洗研钵23次，洗出液也转入三角烧瓶中。再向三角烧瓶中加入6mol/L盐酸10mL，搅拌均匀后在沸水浴中水解0.5h，冷却后用20%NaOH溶液中和至pH呈中性。然后(rnhu)用蒸馏水定容至100mL，过滤后冰箱保存。第13页/共21页第十三页，共21页。 冬枣、柚子、梨：取滤液5mL用蒸馏水定容至100mL。 盘菜、萝卜(lu bo)：取滤液10mL用蒸馏水定容至100mL。 取总糖水解液1mL同上法进行还原糖测定。第14页/共21页第十四页，共21页。W（还原糖） 100%C1V1mW（总糖） 0.9100%C2V2m 乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除(kuch)水解时所消耗的水量。第15页/共21页第十五页，共21页。式中： W（还原糖）：还原糖质量分数（%） W（总糖）：总糖质量分数（%） C1：还原糖的质量浓度（mg/mL） C2：水解(shuji)后还原糖的质量浓度（mg/mL） V1：样品中还原糖提取液的体积（mL） V2：样品中总糖提取液的体积（mL） m：样品质量第16页/共21页第十六页，共21页。第17页/共21页第十七页，共21页。第18页/共21页第十八页，共21页。第19页/共21页第十九页，共21页。第20页/共21页第二十页，共21页。感谢您的观看(gunkn)！第21页/共21页第二十一页，共21页。