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临床标本微生物检验概述考点临床标本微生物学检验(血液、脑脊液、痰、尿液、粪便、性传播疾病、创伤)(1)(1)常见病原菌(2)(2)标本采集及运送(3)(3)检验方法(4)(4)临床意义、临床标本细菌检验的基本程序百眼观察产片染色镜检T 标本直接检查-域原检查二、血液感染正常人的血液是无菌的。菌血症是指在血液中可检测到细菌，包括一过性和持续性在血中存在。败血症是指病原菌侵入血流后，在其中大量繁殖并产生毒性产物，引起全身中毒症状。脓毒血症是指化脓性细菌败血症时，细菌通过血流扩散至全身其他组织或器官，产生新的化脓性病(一)常见病原菌革兰阳性菌革兰阴性菌球菌金葡、CNSA/BCNSA/B 链球菌、肺炎链球菌、肠球菌、草绿色链球菌脑腺炎球国、卡他布二汉国杆菌产单核李斯特菌、 炭疽杆菌、 结核分枝杆菌、产气荚膜梭菌大肠杆菌、(副)伤寒沙门菌、克雷伯菌、沙雷菌、绿脓杆菌、不动杆菌、气单胞菌、流感嗜血杆菌、布鲁菌、嗜肺军团的、类杆菌真菌假丝酵母菌、曲霉菌、隐球菌、球抱子菌(二)标本采集1,1,采血时间和频率病人发热初期或高峰期采集，或在未用抗生素前采集。但怀疑细菌性心内膜炎时，血培养不少于三次。2 2 . .采血量一般为静脉采血，成人采血量 101020ml,20ml,儿童 3 35ml,5ml,婴儿 1 12ml2ml。第1页共7页3 3 . .床边直接注入血液培养基，否则用 SPSSPS 抗凝剂送检，不得用 EDTAEDTA 枸檬酸钠抗凝。4 4 . .检查血管内导管有无细菌污染，可无菌操作，剪下导管 5cm5cm 远侧段，置无菌容器内送检。标本采集保存运送TS菌培养b核酸检测产需氧培养离培养务厌氧培养T 动物试脸“二氧化碳培养，鉴定试胎*检魄报告+药敢试验（三）微生物分离培养和鉴定1 1 .培养基的选择用自动血培养分析仪时选用相应的血培养瓶，如需氧+厌氧，需氧+高渗等。2 2 .分离和鉴定当观察有细菌生长时或血培养仪阳性报警时，应及时作如下检验：（1 1）涂片染色镜检，结果及时与临床联系；（2 2）转种血平板、巧克力平板、厌氧血平板或其他特殊培养基等分离培养纯菌再进行鉴定；（3 3）同时做药敏试验，结果及时报告临床作治疗参考。（四）报告方式阴性结果：7d7d 报告无细菌生长。疑为亚急性细菌性心内膜炎、布鲁菌病、厌氧菌血症、真菌血症时，血培养至少连续培养 2 23 3 周,仍无细菌生长者可报告为阴性。阳性结果一一三级报告方式：第一级报告告知标本已出现阳性并报告直接细菌涂片结果，同时做初步药敏试验；第二级是报告初步药敏结果，同时做正式鉴定和药敏试验；第三级报告正式鉴定和药敏试验结果。（五）临床意义葡萄球菌菌血症常由疳、痈、脓肿及烧伤创面等原发感染灶继发，也可由呼吸道感染引起。G G-菌主要侵犯危及机体免疫功能低下的病人，耐药菌株不断增加。厌氧菌的菌血症常合并需氧菌感染，临床症状较重而复杂。L L 型菌的菌血症主要由于使用抑制细菌细胞壁合成的抗生素后，由缺损细胞壁的细菌感染所致。免疫低下者常出现真菌菌血症。院内感染菌血症不断上升。三、中枢神经系统感染（一）常见病原微生物革兰阳性菌革兰阴性菌病母=真菌及具他_J葡萄球菌脑膜炎余瑟窗和炎链球菌乙型脑炎病毒“绿色链球菌下佃吴也困思咸睹向木工苗柯/奇病是新生隐球困A A、B B 群链球菌加愁暗个十国肠杆菌科细菌非发酵菌脊髓灰质炎病毒假丝酵母菌“核分枝杆菌新肠道病毒 68-7168-71 型钩端螺旋体E 核李斯特菌消化链球菌类杆菌狂犬病病是（二）标本采集用药前，无菌操作腰穿方法采集 2 23ml,3ml,盛于无菌试管常温下立即送检。天冷时保温，不可冰箱保存。用于病毒检测时应冷藏送检。（三）检验方法1 1 .涂片镜检离心 3000rpm,3000rpm,1515 分钟。革兰染色（一般细菌）、抗酸染色（分支杆菌）、墨汁染色（隐球菌）、电镜检查（病毒颗粒）。2 2 .分离培养 5g/L5g/L 葡萄糖增菌肉汤、血平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板、巧克力平板。结核菌接种罗-琴培养基或米氏 7H7H1010 培养基。真菌培养接种沙氏培养基。病毒培养常用动物接种、鸡胚接种、细胞培养。3 3 . .血清学检测可直接检测抗原。（四）临床意义细菌性脑膜炎是中枢神经系统感染的常见类型。真菌性脑膜炎最常见于隐球菌脑膜炎，其他的真菌性脑膜炎如白假丝酵母、球抱子性脑膜炎日渐增多，特别是免疫功能低下和恶性疾病患者易发。流行性乙型脑炎可获得持久免疫力，再次发病者极少见。肠道病毒对中枢神经系统的危害性逐渐引起人们的关注和重视。四、呼吸道感染呼吸道按解剖结构分为上呼吸道和下呼吸道。上呼吸道感染主要指喉及喉以上的呼吸道感染。下呼吸道感染主要指气管、支气管和肺的感染。（一）上呼吸道的正常菌群1 1 .球菌凝固酶阴性葡萄球菌，链球菌，微球菌，奈瑟菌，厌氧球菌。2 2 .杆菌棒状杆菌，嗜血杆菌，类杆菌，梭杆菌。（二）常见病原微生物革兰阳性菌.革兰阴性菌 求 菌 干菌菌葡萄球菌，肺炎链球菌，化脓性链球菌，肠球菌白喉棒状杆菌，结核分枝杆菌，炭疽芽胞杆菌白假丝酵母菌，隐球菌，曲霉，毛霉（副）流感病毒，呼吸道合胞病毒，腺病是，麻疹病是，巨细胞病是脑膜炎奈芯困，K K 他吴拉国流感嗜血杆菌， 大肠埃希菌， 克雷伯菌， 铜绿假单胞菌，肺炎支原体，军团菌，百日咳杆菌（三）标本米集1 1 . .采集方法（1 1）上呼吸道：常采用鼻咽拭子；在扁桃体部位、咽后壁及口腔内炎症、溃疡或渗出部位采样时，应先用清水漱口，再采集标本。（2 2）下呼吸道：常采用自然咳痰法、支气管镜采集、胃内采集、咽拭子。清晨第一口痰为宜，最好在用抗菌药物前采集，必须先用清水漱口，避免唾液混入。2 2 . .立即送检。（四）检验方法1 1 . .涂片：检查细菌常用革兰染色、抗酸染色；检查隐球菌采用墨汁染色；军团菌、支原体、病毒等可用免疫荧光抗体染色。合格的痰标本：白细胞2525 个/低倍视野，鳞状上皮细胞 V1010 个/低倍视野。2 2 . .分离培养（1 1）痰标本的前处理一般是用无菌生理盐水将痰洗净，再加入胰酶溶液使痰均质化。（2 2）普通细菌培养采用血平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板、巧克力平板。（五）临床意义注意采集合格的下呼吸道标本，以提高检出率和阳性的正确率。一些条件致病菌和耐药菌成为医院内肺炎的主要致病菌。真菌性肺炎多为条件致病性真菌感染，常见的以白假丝酵母菌为主。五、尿路感染上尿路感染：主要有肾盂肾炎下尿路感染：主要有膀胱炎和尿道炎（一）常见病原微生物革兰阳性菌革兰阴性菌卜菌，他葡萄球菌，化脓性链球菌，肠球菌结核分枝杆菌真菌，厌氧菌淋病余瑟茵大肠埃希菌，肠杆菌，非发酵菌，变形杆菌，沙门菌，沙雷菌，阴道加特纳菌,，布鲁菌，克雷伯菌（二）标本采集1 1 .采集时间一般为晨起第 1 1 次尿送检。2 2 . .采集方法清洁中段尿：常采用，采集标本前要用肥皂水或碘附清洗外阴（女性）或阴茎头（男性）。肾盂尿采集法；膀胱穿刺法；导尿法：最好，防止逆行性感染。3.3.注意事项严格进行无菌操作，尽量避免污染菌，立即送检，不超过 1h,1h,尿中不得加任何防腐剂和消毒剂。（三）分离培养1 1 .培养基的选择普通细菌选用血平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板。特殊细菌使用特殊、选择培养基。2 2 . .尿细菌定量培养。（四）结果报告1 1 . .阴性一般 48h48h 无细菌生长。2 2 . .阳性菌落计数、鉴定及药敏结果。G-G-杆菌10105 5cfu/mlcfu/ml; ;G G+ +球菌10104 4cfu/mlcfu/ml,有诊断意义。6 6+ +球菌10104 4cfu/mlcfu/ml,多为污染；G G+球菌 10104 410105 5cfu/mlcfu/ml,可疑阳性。3.3.尿路感染的细菌数少于 10105 5CFUTmlCFUTml 时多见于以下几种情况：应用抗菌药物，尿中细菌发育受到抑制；使用低敏感性药物，大多数细菌停留在 10104 4CFITml;CFITml;尿浓度变化大时及 pHpH 在 5.05.0 以下 8.58.5 以上，则发育受阻；尿频时；病原菌发育要求条件高时；采尿时外阴部消毒剂混入尿中。六、消化道感染（一）常见病原菌肠毒素为主的病原菌：金葡，霍乱弧菌，志贺菌，ETEC/EHEC/EAggECETEC/EHEC/EAggEC 产气荚膜梭菌，艰难梭菌侵袭性为主的病原菌：沙门菌，志贺菌，EPEC/EIEGEPEC/EIEG 小肠结肠炎耶尔森菌，副溶血弧菌，结核分枝杆菌，白假丝酵母菌病毒：轮状病毒，埃克病毒，NorwalkNorwalk 病毒，腺病毒（二）标本采集与运送1 1 .采集时间急性期、尽量在用药前采集。2 2 . .采集方法自然排便采集法、直肠拭子。标本不能及时接种时，应在标本中加保护剂或用相应的运输培养基。（三）分离培养培养基的选择：普通致病菌如沙门菌、志贺菌等可选用 SSSS 琼脂平板、中国蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板。特殊细菌如弯曲菌、弧菌、厌氧菌等选择相应的选择性培养基。病毒可用细胞培养。（四）临床意义感染性腹泻由多种病原体感染所致。消化性溃疡由幽门螺杆菌感染引起。轮状病毒常引起幼儿腹泻，腺病毒是引起儿童腹泻的主要病原，还可引起成人腹泻，埃可病毒常引起婴幼儿腹泻，NorwalkNorwalk 病毒常感染成人和大龄儿童。七、性传播疾病性传播疾病（STDSTD: :以性行为为主要传播途径的-组传染病。（一）常见性传播疾病及其病原体性传播疾病病原体梅毒梅毒螺旋体淋病淋病余瑟窗软下疳杜克嗜血杆菌性病淋巴肉芽肿沙眼衣原体性病淋巴肉芽肿生物亚种细菌性阴道病阴道加德纳菌和类杆菌等厌氧菌非淋菌性尿道炎沙眼衣原体沙眼生物亚种、支原体尖锐湿疣人乳头瘤病毒生殖器疱疹人类单纯疱疹病毒 2 2 型（二）标本采集拭子取尿道脓性分泌物（男性）或宫颈分泌物（女性），供培养及镜检;梅毒病人取皮肤渗出液和淋巴穿刺液涂片；疱疹抽取疱内液体，或刺破小疱后，用无菌拭子采样。八、创伤和外科感染（一）常见病原菌革兰阳性菌革兰阴性菌球菌杆菌其他金葡，CNSCNS 化脓性链球菌，肺炎链球菌，肠球菌，消化链球菌炭疽杆菌，结核分枝杆菌，产气荚膜杆菌，非结核分枝杆菌，破伤风梭菌放线菌（衣氏放线菌，诺卡菌）脑腺炎奈瑟困，卜他布二汉国大肠埃希菌，克雷伯菌，变形杆菌，铜绿假单胞菌，流感嗜血杆菌，类杆菌，梭杆菌（二）标本采集组织创伤用拭子采集标本；施行清创术时，可选择合适部位采集标本送检；骨髓炎病人应取骨髓活检标本，如损害部位已形成窦道，可采取窦道引流液；脓肿时取内部脓汁及脓肿壁标本。（三）临床意义由创伤、手术、侵入性器械操作等外科治疗引起的感染最为常见。感染以化脓性炎症改变为主。外伤性创伤感染以葡萄球菌和链球菌多见。深部创伤易引起破伤风和气性坏疽。烧伤创面以革兰阴性杆菌最常见，次为革兰阳性球菌感染。急性化脓性骨关节炎常由金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、肺炎链球菌、淋病奈瑟菌感染所致。慢性化脓性骨关节炎、慢性骨髓炎常由结核分枝杆菌引起，葡萄球菌、链球菌也常见。【例题】【例题】引起肺部感染的病原菌中，能从痰标本检出的有A.A.金黄色葡萄球菌B.B.肺炎链球菌C.C.肺炎克雷伯菌D.D.结核分枝杆菌E.E.肺炎支原体答疑编号502383290101【正确答案】ABCDEABCDE【例题】【例题】标本采集和处理的基本要求包括A.A.抗菌药物治疗前采集标本B.B.据病原微生物感染特点，采集不同部位标本送检C.C.无菌操作，采集标本时需先消毒D.D.应用无菌容器收集标本，立即送检E.E.检材容器贴上患者姓名、标本名称等项目的标签答疑编号502383290102【正确答案】ABCDEABCDE【例题】【例题】性传播疾病应采集的标本是A.A.脑脊液B.B.胸水、腹水C.C.心包液、滑囊液D.D.尿道脓性分泌物（男性）E.E.宫颈分泌物（女性）答疑编号502383290103【正确答案】DEDE【例题】根据目的不同临床采集的标本包括A.A.尿液B.B.粪便C.C.血液D.D.鼻咽拭子E.E.脑脊液及其他体液答疑编号502383290104【正确答案】ABCDEABCDE本章小结：临床标本微生物学检验包括：血液、脑脊液、痰、尿液、粪便、性传播疾病、创伤
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