实验16酶切与连接课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,实验16酶切与连接,51、山气日夕佳，飞鸟相与还。,52、木欣欣以向荣，泉涓涓而始流。,53、富贵非吾愿，帝乡不可期。,54、雄发指危冠，猛气冲长缨。,55、土地平旷，屋舍俨然，有良田美池桑竹之属，阡陌交通，鸡犬相闻。,实验16酶切与连接实验16酶切与连接51、山气日夕佳，飞鸟相与还。,52、木欣欣以向荣，泉涓涓而始流。,53、富贵非吾愿，帝乡不可期。,54、雄发指危冠，猛气冲长缨。,55、土地平旷，屋舍俨然，有良田美池桑竹之属，阡陌交通，鸡犬相闻。成都医学院-生化与分子生物实验,实验十,限制性酶切与连接,成都医学院-生化与分子生物实验,载体( Vectors),种能够结合外源DNA片段形成重组DNA,并能进行自我,复制的DNA分子称为 Vectors.主要载体:质粒、噬菌体、病毒,按功能分类:克隆载体(构建基因组文库或cDNA文库),测序载体、表达载体以及能在两个不同物种中存在的穿梭质粒,随着生物技术的发展和科学研究的深入,不断出现具有不同功,能的新载体,如可以容纳几百万碱基的酵母人工染色体。,党校 主体班 创新,党校是培训轮训党政领导干部的重要阵地，在研究和宣传重大战略思想，加强干部党性锻炼方面，具有不可替代的作用。党校主体班教学则是完成这一职能的主要形式，认识并探讨党校主体班教育的规律，不断提高教学质量，是党校教育工作者面临的一项重要课题。,一、努力创新教学方式,长期以来，党校主体班的教学方式限于教员讲学员记，同时专题内容多，授课时间紧，和学员进行探讨、互动就很少。形成了“一言堂”、“满堂灌”的教学方式，影响教学质量和效果。中国共产党党校工作条例规定“党校要努力创新教学方式，大力推行研究式教学，综合运用讲授式、案例式、模拟式、体验式等教学方法，充分调动教员和学员两个方面的积极性，做到教学相长、学学相长”。,全面开展研讨式教学 在讲授式教学的基础上，全面开展研讨式教学。完善2小时讲授式教学方式，提倡1.5+0.5的研讨式教学。课堂上1.5小时教员讲授， 学员0.5小时课堂研讨，课后研讨以学员论坛为主，深化拓展学员论坛，增加小组讨论与大会交流的次数，研讨中各小组发表自己的观点、展示研讨效果。通过这种形式发挥“教”和“学”两方面积极性。,加快实行案例式教学 案例教学是教学方式创新一个重点，案例要精心筛选，恰到好处，问题设计要科学、切合实际。所选案例应具有典型性，能与学员的工作经验和现实处境相联系，能涵盖三到四个问题，能让学员分析准确，认识到分析的意义。案例分析的方法要先由学员自己判断，使课堂上产生意见分歧，开拓学员思路，让学员充分探讨各种可能性，鼓励学员讲出支持自己观点的分析。,积极开展体验式教学 广泛深入地开展体验式教学是教学方式改革的趋势。一方面，要坚持“走出去”，开发和建立体验式教学培训参观基地。在开展体验式教学过程中，教师从实际入手，提出相关问题，让学员动脑筋思考，然后因势利导，有意识地与理论挂钩，透彻地分析问题，找到理论依据。使体验式教学真正起到补充完善教学内容的作用，使学员进一步提高学员理论联系实际的能力，把学习科学理论与解决实际问题结合起来。另一方面，要坚持 “请进来”， 建立每周学术报告和市情讲座制度。邀请省内外高校专家学者围绕时事或理论现实问题作学术报告；邀请市领导和部门领导结合本地区本部门实际作市情报告。,探索开展模拟式教学 积极引入新的培训理念和方法，探索开展模拟式教学方法，将“课堂”作为“现场”，让学员增强身临其境的真实感、角色感。采用“模拟现场”“模拟会议”“模拟采访”等模拟式教学法，以应对城市地震、洪水、爆炸、卫生和群体事件等突发公共事件作为主要培训项目，在主体班教学中开展专题教学，让学员在课堂上真实地体验到实际工作现场的氛围，有针对性地提出解决问题的办法，切实增强课堂的感染力、吸引力，最终达到指导工作实践的目的。,二、努力创新教学内容,给主体班上课， 应当根据各教学班次培训要求和学员岗位需求的特点，在教学内容上体现共同性，突出差异性，增强教学的针对性。,注重成人的特点，讲授系统性的知识 党校主体班教育的对象是成年人，并且是有了相当知识积淀、人生经历和生活阅历的成年人。应当按照教学总体布局和学科建设发展要求，组织教研人员开发优化教学专题，形成教学课题库。课题要抓住学员的求知心理，注重系统的多方面的知识。着意向学员讲授经济基本理论和基本知识；着意向学员讲授法律的基本知识和基本理论；着意向学员讲授现代科技知识。,注重干部的特点，深入学习前沿知识 参加党校主体班学习的学员，是具有不同级别、层次的干部，有着相当的工作经历和经验积累。教员要随时吸取身边的新鲜、超前、科学而又可以借鉴的思想与说法，对于一些司空见惯的东西要勇于剖析，在经过深入思考后，提出新见解，让学员有耳目一新之感。不同干部有着各自不同的经历和经验积累，有着对知识的不同需求。要根据这些不同情况，精选中央党校远程教学专题，精心选购光盘教学专题，形成主体班远程教学专题库供学员自主选学。,三、努力创新教学艺术,教学是一门艺术，党校教学也是如此。要真正做到“传道有术、授业有方、解惑有法”，不但要重视教学方式和教学内容，而且也要重视课堂教学艺术。,充满自信 自信，犹如催化剂，能将人的潜能调动起来，使人的智力、体力等各方面的主动性、积极性得到充分发挥，因此有人说：“自信是成功的一半”。教员在课堂上应当具有一定的自信心，这样才能以饱满的热情、良好状态去传授知识。但自信也有一个“度”的把握问题，过于自信，以至于自负，给人以卖弄的感觉，就会容易引起接受者的逆反心理，令人反感，会使教学效果大打折扣。,充满激情 讲课切忌平铺直叙，缺乏激情。教师和学员之间不完全是知识的交流，其中必然带着很强的情感交流。对课题既要准确、全面、真实、严谨，还要渗透自己对课题的理解、感受和联想等思维活动变化，情感饱满激昂，语言充满激情，这样的教学会使学员受到强烈的感染，同时也能充分调动学员的积极性、主动性。如果从始至终语速平均、平直单调、缺乏变化的教学，会使学员听觉疲倦、情绪降低、打不起精神，从而影响教学效果。,充分发挥 教学中语言的重要性不言而喻，除此之外还应充分发挥其他的交流方式。教员在运用口头语言传递信息的同时，还需要通过眼睛把自己的想法、学识等传达给学员。教员的目光最主要的是强调眼神的应用，要用眼神影响和感染着每个学员，向学员透露不同的信息。无论使用何种眼神，都是为了教学内容的表达，都是为了与学员进行交流，都要与有声语言和其他体态动作密切结合，协调一致，体现自己独特的教学艺术，切忌炫耀和做作。,教员在运用语言和眼睛的表达方式的时候，还要善于运用手势来帮助表达自己的想法和情感。手势在教学过程中使用频率频繁，动作明显，表现力和感染力很强。教员的手势要精练，不能泛滥，必须根据教学内容需要而做出，和教学内容融为一体，这样才会相得益彰。教员的手势要自然流露，根据教学内容的不同而变化，切忌死板。教员的手势要协调得体，帮助学员理解教学内容，营造良好的课堂气氛，避免粗俗。,第一步。确定科学的作文训练目标 作文教学的目标确定尤为重要。每次作文都必须有具体的目标要求。可从文章的布局谋篇方面提出，也可从选材立意方面提出，还可从遣词造句方面提出。其次要有序，使前后目标要求符合循序渐进的原则，对各年级的要求要有明显的梯度，同时对于程度不同的学生要有一定的区别。最后，目标的确定要符合学生的实际，贴近学生生活，可诱发学生写作动机。,第二步。平时综合训练与课堂限时作文相结合。学生自评献疑,日常的作划训练有多种方式，有了这些行之有效的训练之后，教师还应该适当地控制学生作文时间，要求学生当堂作文，以帮助学生提高写作速度。学生作文完毕，可以将课堂上未解决的涉及本次作文或平时写作方面的问题附在文后，请老师回答。这些问题，大都真实地反映了学生在写作过程中的困惑，这些疑惑无疑为下一步作文教学哇提供了重要的线索和方向。,第三步。变革作文评改方式，提升学生参与度,传统的评改方式会使学生迷失了作文的方向，无形中把学生的自主权给剥夺了。在这一点上，有很多教师正作着有益的尝试，如“多层级交互式的作文评改”、“交流式作文评改”、“互动式作文评改”等等。我根据学生的实际情况，在具体操作上作了新的尝试。,1.学生自评,要求：反复朗读。在修改时，让学生朗读习作，自我监听，用笔画出不顺口的词句，并加以修改。默读分析。学生采用默读的方法，思考是否围绕中心选材，段落层次的安排是否合理，详略是否得当等，然后写出自我评语。,2.家长评,一次作文写作后，由家长阅读学生作文进行评判。让家长成为孩子作文的读者，一方面可以让每个学生的作文得到重视，提升学生写作的热情，另一方面也让家长参与到作文评改上来，不仅对孩子作文有一定的督促作用，也能让孩子与家长在思想上得以沟通。,3.教师导评,作文讲评时，教师要精于“授人以渔”，向学生推荐优秀作文，引导大家剖析、评议、学习。导评是整个训练过程的基础。教师该如何引导指点学生，使他们养成这种能力，是很值得共同研究的项目。如果说选题为作文的道路作好了铺垫，那评改则是提升学生作文水平和作文实效的真正谋略。,学生的习作交上来查阅后，教师选择带有普遍性问题的学生习作制成投影片，在教师的指导下，共同讨论，集体修改。我在作文教学中曾这样尝试过：首先明确本次习作的要求是什么，再出示学生习作中的片段，在修改中，发挥指导作用，让学生充分发表意见，调动其积极性。通过修改，孩子们明白了什么是改，怎样改，以及这样改的理由，学会了迁移。,4.小组互评,把班里学生按前后左右座位组成四人一组的互改小组，以这样的小组为单位。每个学生逐一介绍自己这次习作的有关内容，包括审题、谋篇、创新思路等。这种自述的过程，对于作文来说，既是重复思维的过程，也是完善思维、创新思维的过程。对于同学之间，也是交流思维、取长补短的过程，同时又是锻炼学生口头表达能力的过程。,每位同学拿着其他同学的作文，按照老师讲授的方法认真批改，圈点出文章疏漏，如错别字、语句不顺、用词不当等部分，再用符号勾画出美词佳句，最后认真写上自己的评语并郑重签名。这样，学生各抒己见，在学习借鉴别人的成功之处外，还学会通过旁批的方式评点其他同学作文的优劣，积极参与，真正成为作文评改的主人。,第四步，讲评再练,有的学者把这种作文称之为“二次作文”，讲评也集中在本专题训练的问题上。讲评绝不是一次作文的结束，除一部分确实已掌握该专题的基本知识基本技能者外，余下的学生将再次认真审视自己的作文并进行修改，也可以另起炉灶重新创作。这大大有别于传统的作文训练写完改完讲完一扔了事的简单重复。,在限定的时间内让学生结合评语，针对讨论重新修改，使教师评语、讲评、学生评论落到实处，在实践中提高学生作文能力。只有这样，学生对评语才能达到理性的认识。通过“改”环节学生作文质量有很大提高，正如鲁迅先生所说：“好的作文是改出来的”。,大量实践证明，学生理解、接受、领悟之后，必将有利于其写作心理结构的优化，必将有利于其写作能力的更快提升。教师通过引路，明确教学目标，设计教学过程，调动全体学生的主观能动性，共同完成作文任务，实现教学目的。从而突破了传统的作文方式，真正实现了在及时反馈的基础上实行教学相长的原则。通过兴趣的激发，各层次学生的能力得到提高，教师也不再觉得作文教学是个沉重包袱。,成都医学院-生化与分子生物实验,实验十,限制性酶切与连接,成都医学院-生化与分子生物实验,载体( Vectors),种能够结合外源DNA片段形成重组DNA,并能进行自我,复制的DNA分子称为 Vectors.主要载体:质粒、噬菌体、病毒,按功能分类:克隆载体(构建基因组文库或cDNA文库),测序载体、表达载体以及能在两个不同物种中存在的穿梭质粒,随着生物技术的发展和科学研究的深入,不断出现具有不同功,能的新载体,如可以容纳几百万碱基的酵母人工染色体。,EcoRI Sall Kpnl BamHI Pst,结构的三大要素:,Hindlll Xhol Pvull ECoRV Bgll,+,多克隆位点,选择标记(耐药性,Lac乙),独立的复制单位,Multiple,Cloning,Site,Drug Resistance gene,(for example, ampicillin resistance),Origin of DNA,Replication,SspI,MCS,M139n,M13。vi,ndIII,3162bp,atep,p,3.162kb,I,Barri,pMB,Sacl,ECORI,由pUC18改造而来,大小为3162bp。相当于在pUC18中增如了帶有M3,噬菌体DNA合成的起始与终止以及包装进入噬菌体顒粒所必需的顺式序列。,(二)材料,模板DNA,引物:APOA1GST2(载体:pGEX-6P-1),PrimerGST6p1-APOA1-Up,5 GGAATTCATGGATGAACCCCCCCAGAGCC -3,ECORI,PrimerGsT6p1-APOA1-down,5 CGCGTCGACTCA CTG GGT GTT GAG CTT CT-3,Sall,粘性來端:是交错切割,结果形成两条单链末端,这,种末端的核苷酸顺序是互补的,可形成氪键,所以称为粘,性末端。,如 ECORI的识别顺序为:,5| AATTO3,CTTAAIG,在双链上交错切割的位置切割后生成,G,AATTC.3,CTTAA,各有一个单链末端,二条单链是互补的,其新裂的磷,酸二酯键以及氫键可通过DNA连接酶的作用而“粘合”。,成都医学院-生化与分子生物实验,1.制性内切酶的类型,第二类(型)限制性内切酶就是通常指的DNA限制性内,切酶,它们能识别双链DNA的特异顺序,并在这个顺序内进行,切割,产生特异的DNA片段,型酶分子量较小,仅需Mg2作为催化反应的辅助因子,识,别顺序一般为46个碱基对的反转重复顺序;,工型内切酶切割双链DNA产生3种不同的切口-5端,突出、3端突出和平末端。,限制性的内切酶的发现和应用,才使得人们能在体外有目,的地对遗传物质DNA进行改造,从而极大地推动了分子生,物学的兴旺和发展。,51,、天下之事常成于困约，而败于奢靡。,陆游,52,、生命不等于是呼吸，生命是活动。,卢梭,53,、伟大的事业，需要决心，能力，组织和责任感。,易卜生,54,、唯书籍不朽。,乔特,55,、为中华之崛起而读书。,周恩来,谢谢！,