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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,动物细胞融合与,单克隆抗体,1、定义：,指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。,一、动物细胞融合,细胞杂交：,不同基因型的细胞之间的融合就是,细胞杂交,。,杂交细胞：,融合后形成的具有原来,两个或多个细胞遗传信息,的,单核细胞,成为杂交细胞,。,细胞融合是正常的生命活动,两个细胞正在融合,受精作用,二.动物细胞融合,2、,诱导融合的因素,生物法：,灭活的病毒,诱导融合.(,利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。,),化学法：,聚乙二醇PEG,诱导融合.,物理法：,电激,融合,病毒颗粒黏 附细胞表面,细胞膜连接,细胞膜被 病毒颗粒穿通,细胞融合、形成杂种细胞,3、动物细胞融合技术的应用,细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。,利用杂交瘤技术，制备单克隆抗体。,思考讨论：,为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？,因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂,质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭,活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。,总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合,比较项目,植物体细胞杂交,动物细胞融合,原 理,融合前处理,诱 导 方 法,用 途,细胞膜的流动性、,植物细胞的全能性,细胞膜的流动性,用纤维素酶、,果胶酶去壁,用胰蛋白酶,使细胞分散,物理、化学方法,物理、化学、,生物方法,获得部分,或完整植株,主要用于制备,单克隆抗体,人们获得抗体的传统方法是?,将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体,这种方法的缺点是什么?,效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过敏反应。,运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？,能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？,B淋巴细胞在体外不能无限增殖。,二：动物细胞融合的成功应用 单克隆抗体的制备,思考,单克隆抗体的制备,极富创造性的方案,将能够产生特定抗体的,B淋巴细胞,和具有无限增殖能力的,骨髓瘤细胞,融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种,单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。,米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。,杂交,细胞,灭活的病毒等手段,小鼠骨髓瘤细胞,B淋巴细胞,经免疫,的小鼠,提取,杂交瘤,细胞,第一次筛选,用特定的,选,择性培养基,第二次筛选,能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞,体外培养,注射到小鼠腹腔,提取单克隆抗体,动物特异性免疫,分离,B,淋巴细胞（,B,）；找到骨髓瘤细胞（,G,）。注意,B,淋巴细胞是一个系列。（,B,1,B,2,B,3,-B,n,）,细胞融合,三种融合方式,:,（,BB;BG;GG,）,第一次筛选,：在“,选择培养基培养,”上培养筛选,杂交瘤细胞,（只有,BG,杂交瘤细胞存活。但,BG,杂交瘤细胞也是一个系列：如,B,1,G,B,2,G-B,n,G,。而,BB,GG,在此培养基上不能存活。）,第二次筛选,：在“,多孔培养板上,”培养,杂交瘤细胞系列,，,每孔只放一个杂交瘤细胞。,“克隆化培养”,每个杂交瘤细胞，并进行,“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。,选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，,体外培养,或注射到,小鼠腹腔内增殖,。,提取单克隆抗体。,1、单抗的制备过程要点：,3）、为何要进行两次筛选？,4）、如何进行第2次筛选？,培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。,第1次筛选得到杂交瘤细胞（多种）。第2次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。,问题强化：,1）、本过程利用了哪些原理？,免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理,2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？,这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体,1、,作为诊断试剂,：,在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有,准确、高效、简易、快速,特点,.,2、,用于治疗疾病和运载药物,：,主要用于癌症治疗。,生物导弹：,抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素,。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。）,2、单克隆抗体的优点：,特异性强，灵敏度高，可大量制备。,3、单克隆抗体的应用,B,体外培养,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,足够数量的细胞群,注射到,小鼠腹腔,A,C,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌单克隆抗体的实验方案,2、该方案能达到预期效果吗？为什么？,4、图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能_。,1、该实验方案的目的是_,3、A是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生_,5、C过程指细胞培养，该过程包括_培养和_培养两个阶段，其中_代以内的的细胞属于细胞株。,制备单克隆抗体,B细胞,抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌抗体,无限增殖,原代,传代,50,
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