药品微生物实验室管理

2021/10/10,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2021/10/10,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2021/10/10,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,2021/10/10,*,药品微生物实验室,-质量管理,2018.06,2021/10/10,1,微生物类别,类,别,细,菌,真,菌,霉,菌,及,酵,母,菌,病,毒,原,生,动,物,藻,类,2021/10/10,2,特点：,体积小、结构简单、,分布广、种类,(1020,万种,),、,繁殖快、易变异。,特,点,体,积,小,结,构,简,单,分,布,广,种,类,多,繁,殖,快,易,变,异,微生物概述,2021/10/10,3,芽孢：,微生物所需的营养物质,水分,PH,值,温度,空气,碳源,氮源,微量元素,营养物质,蛋白质受热,不易变性（耐热）,含水,量少,细菌的,休眠体,芽孢（孢子）,2021/10/10,4,药品中微生物的主要污染途径,1.,水系统,（饮用水、纯化水、注射用水、纯蒸汽）：过滤净化后检测微生物、细菌内毒素。,2.,原辅料,：植物性、动物性（风险最大）；,2020,版药典中药饮片增加耐热菌、沙门菌。,3.,包装材料,：安瓿、,PVC,、,PTP,、塑料瓶。检测微生物,4.,2021/10/10,5,药品中微生物的主要污染途径,4.,生产人员（,最不可控因素）：咳嗽、喷嚏、动作幅度大、皮肤掉屑；测手指、洁净服。,5.,气体,：压缩空气、惰性气体；控制微生物或无菌。,6.,生产环境,：洁净区密封、空气过滤、定期消毒；测沉降菌、浮游菌、悬浮粒子（,A,、,B,、,C,、,D,级）。验证和日常监测,7.,设备及配件,：清洁、消毒、灭菌；清洁验证,2021/10/10,6,影响药品微生物检验结果的因素,1.,样品中的微生物可能分布不均匀。,2.,微生物检验方法误差大。,3.,检验方法未经过验证。,4.,实验室因素：人员、培养基、试剂、菌种、环境、设备、样品。,2021/10/10,7,人员要求,1.,操作人员具备微生物学或相近专业知识的教育背景。,2.,培训：职责培训、岗位操作规程的培训、设备操作培训、检验技术的培训（包括无菌操作、培养基制备、消毒、灭菌、注平板、菌落计数、菌种传代、菌种保藏、微生物检查方法、微生物鉴定基本技术）。,3.,实验室安全方面的培训（保证自身安全、防止实验室被污染）。,4.,对微生物管理人员的培训：实验室安全、实验室结果的评估、数据偏差的调查。,2021/10/10,8,培养基管理,培养基影响微生物试验结果的因素,1.,供应商：,稳定、资质合格、业内口碑好、供货能力强。,2.,培养基的接收,2.1,查看培养基名称、批号、厂家、生产日期、有效期、执行标准是否符合要求。,2.2,在每瓶培养基瓶上贴标签、编号（唯一的标识）、批号、接收日期、接收人、开瓶日期、开瓶后的有效期。,2.3,培养基接收记录。,3.,培养基的储存,按照供应商提供的方法保存，多数是避光，个别厂家要求阴凉干燥（低于,20,）。,2021/10/10,9,培养基管理,4.,培养基的适用性检查（药典要求）,4.1,如果培养基的配制和灭菌程序经过验证，那么同一批脱水培养基适用性检查可只做,1,次。,4.2,如果培养基的配制和灭菌程序未经过验证，那么每一批灭菌培养基均要进行适用性检查。,培养基的配制和灭菌方法的验证（存储期）,包括：灭菌前后,PH,值、外观性状；灭菌后的无菌性检查、灵敏度检查；保存几周后的无菌、灵敏度检查。,2021/10/10,10,培养基管理,4.3,适用性检查,购买对照培养基,购买菌种,枯草、白念、黑曲霉接种于计数用培养基,金葡、铜绿、枯草、生孢、白念、黑曲霉接种于无菌检查用培养基,依据药典附录,1105,试验操作后判断是否合格。,以下是三种培养基适用性检查要求（计数用培养基、无菌检查用培养基、选择性培养基）,2021/10/10,11,计数用培养基适用性检查要求,计数用培养基,非选择性,固体培养基,非选择性,液体培养基,a,被检培养基菌落数，,对照培养基菌落数，,在,0.52,之间,b,菌落形态大小与,对照培养基上的,菌落一致,c,倒,5,块平板，培养,温度与实际操作一致,培养最长时间,应无菌生长,a,被检液体培养基管,与对照培养基管比较,试验菌应,生长良好,b,取最小包装的,2,瓶,放在实际运用中的,温度培养最长时间,2021/10/10,12,无菌检查用培养基适用性检查要求,无菌检查用培养基,无菌性检查,灵敏度检查,每批取不少于,5,瓶培养，,应无菌生长,空白对照管,无菌生长,加菌的培养基管,生长良好,2021/10/10,13,选择性培养基适用性检查要求,选择性培养基,（控制菌检查用）,促生长能力测试,抑制生长能力测试,指示特性,固体：,被检培养基与对照,培养基上生长的菌落,大小、形态一致,接种的试验菌,不得生长,被检培养基上,试验菌生长的菌落,大小、形态特征、,指示剂反应与对照,培养基一致,液体：,规定的温度、最短的,培养时间、与对照培养,基管比较、被检管试验,菌,生长良好,2021/10/10,14,用于环境监控的培养基管理,市售：双层包装和终端灭菌,如果不能采用终端灭菌的培养基，在使用前进行,100,的预培养，防止出现假阳性。,沉降菌碟暴露时间的验证,选择在换气次数大的需要监控的操作间，培养基加菌暴露若干小时,培养后计算菌的回收率大于,70,。,暴露多长时间不干裂、促生长能力良好）。,包装形式：试管、三角瓶（密封）,贮存房间的条件,取样计划：取样时间点、测试项目（,PH,值、无菌、适用性）,加菌液,0.1ml,，不能加,1ml,。,2021/10/10,15,菌种的管理,菌种的来源,CMCC,中国,复活,标准贮备菌株（,0,代）解冻转种 工作菌株,（低温冷冻干燥）（不得重新冷冻）,TACC,美国,1,代：是指将活的培养物接种到微生物生长的新鲜培养基中培养。,工作菌株不可替代标准菌株,2021/10/10,16,菌种的管理,涉及菌种管理的记录,标准菌种的申购记录,。,从标准菌株到工作菌株的操作,SOP,及记录。,菌种的传代记录。,菌种的检查记录（确认记录）。,菌种的灭活、销毁记录。,2021/10/10,17,菌种的管理,菌种的接收,1.,检查外观是否完好。,2.,核对菌种名称、编号。,3.,核对接收时是否在合适的环境中。,4.,核对菌种是否在有效期范围内。,5.,给每株菌一个独立的编号，不能重复。,2021/10/10,18,菌种的管理,菌种的保存,1.,标准菌株：超低温冷冻（低于,-30,）有效期一年；,（,-70,以下冷冻保藏）有效期三年。,2.,斜面菌种：,28,冷藏，有效期,36,个月。,3.,菌液：,室温下，,2,小时内使用。,28,，,24,小时内使用（黑曲霉孢子悬液,28,，贮存期要验证）,2021/10/10,19,菌种的管理,菌种的使用,-,斜面菌种只允许一次使用,菌种的传代,1.,将微生物转接到新的培养基，进行培养获得新鲜菌种的过程。,2.,购买的标准菌株必须经过传代后使用（,在,5,代以内,）。,2021/10/10,20,环境的管理,硬件：,阳性菌实验室、培养室、贮藏室（区）、试验结果观察区、培养基及实验用具准备区、灭菌区、样品接收区、标准菌株贮藏室（区）、污染物处理区。,以上区域要有标识（降低交叉污染）。,无菌检查：,B,级背景下的,A,级单向流洁净区域或隔离系统。,微生物限度检查,：不低于,D,级背景下的,B,级单向流空气区域。,2021/10/10,21,环境监测,1.,空调验证：,高效过滤器完整性、气流组织、空气流速（平均风速）、换气次数、压差、温度和相对湿度（测试应在模拟正常检测条件下进行）,依据药典附录,9205,药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则,2.,日常监测：,异常情况要进行分析，不仅仅是数数而已。,监测项目,2021/10/10,22,洁净区灭菌和消毒,A/B,级洁净区使用无菌的或经无菌处理的消毒剂或清洁剂。,化学消毒剂应验证消毒效果（不止一种）。,清洁剂、消毒剂在规定的效期内使用。,常用灭菌法,干热灭菌法：火焰法（酒精灯）、烘箱,2501h,。,湿热灭菌法：,12130min,。,2021/10/10,23,设备设施管理,1.,设备的确认、检定（校准）每年一次，注意连续性。,2.,设备使用日志（使用即填）,3.,设备定期清洁和消毒（水浴锅、培养箱、冰箱、生物安全柜）。,4.,无菌器具要有明确的标识（已灭菌、未灭菌）。,5.,温度计的校准。（注意量程、精度）,6.,天平、标准砝码的校准；移液管的校准。,7.,悬浮粒子计数器、浮游菌采集器的校准。,8.,紫外灯消毒效果的定期检测。,2021/10/10,24,操作方法注意,1.,操作,SOP,中明确的检验方法要经过方法学验证，而且和验证方案报告、省药检所的方法学复核意见中的描述一致,2.,操作方法应避免损伤供试品中污染的微生物。,3.,对抑菌性较强的供试品，尽可能选用薄膜过滤法。,2021/10/10,25,操作方法注意,2021/10/10,26,共同努力，发现问题，提升管理水平！,谢谢各位！,2021/10/10,27,