smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,二级,三级,四级,五级,*,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,*,Smad3在马兜铃酸肾病,中,的,作用机制,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,1,Smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制 smad3在马兜,参考文献：,1.,Diverse Roles of TGF-/Smads,in,Renal Fibrosis and,Inflammation,2.Mechanism of chronic aristolochic acid nephropathy:role of Smad3,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,参考文献：smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,马兜铃酸肾病,马兜铃酸肾病（AAN）,：,为一种全球性疾病，是使用,中草药,严重的并发症,之一,。,然,而,导致,AAN的发病机制尚不,明确,，,继而阻碍了对AAN病人的有效治疗。,AAN的特征是,进行性肾损害,，表现为肾小管坏死、萎缩和肾间质纤维化。,肾小管间质纤维化,是终末期肾病的共同特征，也是决定肾脏疾病进展的主要因素，因此深入研究肾纤维化发生发展的机制尤为重要。,肾脏纤维化是以,胶原蛋白,合成增加、降解受到抑制导致大量,细胞外基质（ECM）,不恰当沉积和分布为特点。,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,马兜铃酸肾病smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,TGF-,的生物特性,各种肾病发展至肾纤维化与多种细胞因子有关，其中转化生长因子（TGF-）/smad信号通路在肾纤维化过程中起重要作用，并且被公认为是最主要的致纤维化通路。,TGF-(transforming growth factor beta,转化生长因子-beta)是一种多向性、多效性的,细胞因子,，以自分泌或旁分泌的方式通过,细胞表面的受体信号转导途径,调节细胞的增殖、分化、凋亡，对,细胞外基质的合成,、,创伤的修复、免疫功能等有重要的调节作用。,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,TGF-的生物特性各种肾病发展至肾纤维化与多种细胞因子有关,Smads 蛋白,Smads蛋白是TGF-,/ Smad信号通路中,细胞内信号转导,的中介分子。,SMAD蛋白家族,受体调节型SMAD蛋白,Receptor regulate smad,共同调节型smad蛋白,Common mediator smad,抑制型smad蛋白,Inhabitory smad,Smad2、smad3,Smad1、smad5,smad8、smad9,smad4,Smad6、,smad7,红色标记者为参与TGF-信号传导的smad蛋白。,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,Smads 蛋白Smads蛋白是TGF-/ Smad信号通,TGF-/smad,3信号通路的传导,信号通路在传导中的3个主要步骤,1、TGF-与细胞表面受体结合，形成异源三聚体,2、异源三聚体通过激活R-smad蛋白，将信号传导至胞浆内,3、R-smad与Co-smad结合后，转移至细胞核，与靶基因结合，调节蛋白合成,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,TGF-/smad3信号通路的传导信号通路在传导中的3个主,TGF-/smad,3信号转导示意图,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,TGF-/smad3信号转导示意图smad3在马兜铃酸肾病,本研究进行了一项,假设,试验，即假设转化生长因子/Smad3是导致慢性AAN的关键途径。,本研究分为体内试验和体外试验两部分。,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,体内试验,技术路线,IHC、RT-PCR,T-IHC,、western,blot 、RT-PCR,IHC、RT-PCR,TGF-I，,P-Smad2/3,-SMA,和,E-cad,Col.I和Col.III,肾功能检测,建立smad3 WT/KO CAAN模型,血清肌酐试剂盒,考马斯,-,尿蛋白,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,体内试验技术路线IHC、RT-PCRT-IHC、weste,结果,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,结果smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,结果,B,：,4,周后，,smad WT,小鼠,Scr,含量升高显著，,smad3 KO,升高减弱。,C,：整体水平上,smad3KO,小鼠蛋白尿量增加不明显。说明smad3KO对肾损,伤有保护作用,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,结果B：4周后，smad WT小鼠Scr含量升高显著，sma,Smad3 WT Col,1和3,大量积聚，,Smad3,KO,未出现积聚现象。,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,Smad3 WT Col1和3smad3在马兜铃酸肾病中的作,结果,E-cad和,-SMA,A,和,B:smad3 WT,腹腔注射,4,周,C:Smad3 KO,腹腔注射,4,周,A.B.D:-SMA,（肌成纤维细胞）大量蓄积,C.D:,蓄积程度减弱。,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,结果E-cad和-SMAA.B.D:-SMA（肌成纤维细,结果,WT,型,-SMA,表达显著增加，,KO,型没有出现增加显著现象。,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,结果WT型-SMA表达显著增加，KO型没有出现增加显著现象,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,体外试验总结,小结（一）,以上实验结果表明,smad3蛋白在CAAN过程中有重要作用，基因敲除Smad3后可明显减少CAAN模型中Scr和蛋白尿的含量，有效降低,Col.I,、,Col.III,、-SMA、TGF-1、P-smad2/3的表达量，从而抑制了细胞外基质大量蓄积造成的纤维化以及其它更严重的肾脏疾病。,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,体外试验总结 小结（一）smad3在马兜铃酸肾病中的作用,体外试验,细胞试验,AA处理RETC,AA处理导入siRNA,后的RETC,TGF-1、,Col.I,、,-SMA、E-cad,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,体外试验细胞试验AA处理RETCAA处理导入siRNATGF,AA处理正常TEC,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,AA处理正常TECsmad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,以上细胞外实验说明AA对肾小管上皮细胞有较严重的损伤作用，,导致,Col.I,、-SMA、TGF-1大量蓄积，E-cad表达量下降。,AA处理正常TEC,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,以上细胞外实验说明AA对肾小管上皮细胞有较严重的损伤作用，A,A表示smad2的siRNA不影响,smad3的表达，smad3的,siRNA不影响smad2的表达,然后进行B实验,B表示添加AA和S3-siRNA的,细胞中，-SMA下降，E-钙,粘蛋白升高；添加AA和S3-,siRNA的细胞中，-SMA和,E-钙粘蛋白都有上升趋势。,AA处理导入干扰RNA的TEC,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,A表示smad2的siRNA不影响B表示添加AA和S3-si,smad3 siRNA：本该升高的降低了，,smad2 siRNA：原来升高的现在还是升高。,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,smad3 siRNA：本该升高的降低了，smad3在马兜铃,结论,小结（二）,AA可引起大鼠肾小管上皮细胞,Col.I,、-SMA、TGF-1上调，引起E-钙粘蛋白下调，且都呈现一定的时间依赖性和浓度依赖性。加入干扰RNA后证明smad3干扰RNA可以有效的抑制,Col.I,、-SMA、TGF-1的上调及E-钙粘蛋白的下调，而smad2没有明显作用。,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,结论 小结（二）AA可引起大鼠肾小管上皮细胞Col.I、,总结,TGF-/Smad3信号通路在CAAN有重要作用，特异性地敲除smad3基因可有效防止AA引起肾功能损伤和严重的肾脏纤维化及其它肾脏疾病，并证明smad3在AAN中可能具有治疗潜力。,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,总结TGF-/Smad3信号通路在CAAN有重要作用，特异,请批评指正,谢 谢!,smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,请批评指正smad3在马兜铃酸肾病中的作用机制,