实验室仪器设备器皿及用具001

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,实验室仪器设备器皿及用具001,一、实验室设置,二、实验室仪器,三、实验室器皿及用具,四、,洗涤技术,五、灭菌技术,六、无菌操作技术,组织培养实验室布局的总体要求,便于隔离 便于操作 便于灭菌 便于观察,一、实验室设置,基本布局规律,根据实验操作程序排列实验室；,接种室和培养室设在与外界环境隔离性好的区域；,灭菌室与接种室相邻；,其他实验室的布局可根据条件，以方便使用为宜,。,基本实验室,辅助实验室,实验室组成,准备室,缓冲室,无菌操作室,培养室,细胞生物学实验室,温 室,生化分析实验室,基本实验室布局平面图,实验台,搁架,培养架,培养架,培养架,培养架,药品及仪器柜,无菌台,无菌台,搁,架,拉窗,冰箱,搁 架,水槽,电炉,门,准备室,缓冲室,无菌室,培养室,植物组织培养实验室布局示意图,培 养 室,准 备 室,灭菌室,储藏室,接种室,缓冲室,组织培养准备实验室,1.,准备室,1.1,洗涤间,根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制在,30-50m,2,。在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置,2,个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。准备,1-2,个洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外还应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等。地面应耐湿并排水良好。,超声波清洗器,面积,60,平方米左右，配备的主要仪器设备有 ：冰箱、天平、微波炉、,pH,计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。冰箱以体积,180-200L,为宜，用于储存培养基母液、激素维生素等贵重药品、彩色胶卷、及保存植物材料。天平应有不同感量。,培养基配制间,1.,准备室,配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可选用立式自动控制压力和温度的灭菌锅。 生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。 如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成一个准备间，要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。,1.3,消毒间,1.,准备室,2.,缓冲室,无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫,接种室,。通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。 室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。,3.,无菌操作室,无菌室,无菌室,为了控制培养室的温度和光照时间及其强度，培养室的房间不要窗户，但应当留一个通气窗，并安上排气扇。室内温度由空调控制，光照由日光灯控制。天花板和内墙最好用塑料钢板装修，地面用水磨石或瓷砖铺设，一般要分两间，一为光照培养室，一为暗培养。培养室外应有一预备间或走廊。 培养室应配有培养架、转床、摇床、光照培养箱、生化培养箱、自动控时器等。日光灯一般用,40W,，固定在培养架的侧面或搁板的下面，每层有两支日光灯，距离在,20cm,，光照强度为,2000-3000lx,。,4.,培养室,设计组培实验室时的注意事项,为了减少污染，实验室最好设一走廊且走廊上方最好安装紫外灯；,培养室最好设在南面，设大玻璃窗，以双层玻璃窗为最好。如果培养室是设在房屋的边侧，其东边或西边的墙上也可设置大玻璃窗；,培养室房间及门要小，而且密闭性要好，最好装移门；,无菌操作室要小，要设缓冲间，也最好装移门，且门要稍大一些。,二、仪器与设备,1,、基本设备,冰箱、电炉、酸度计、纯水器、天平、培养基分装器、搅拌器等。,酸度计,电热套,天平,培养基分装器,搅拌器,2,、灭菌设备,蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。,蒸汽压力灭菌锅,干热消毒柜,利用高温干热对微生物有氧化、蛋白质变性、电介质浓缩引起中毒等作用。其中主要是通过氧化作用破坏细胞原生质，使微生物死亡，所以在一定的加热时间内可杀死一切微生物。,无菌瓶顶过滤装置,喷雾消毒器,（参考图）,（参考图）,接种器具消毒器,3,、无菌操作设备,超净工作台,无菌接种箱,4,、细胞培养设备,摇 床,培养架,恒温振荡培养箱,光照培养箱,5,、细胞学鉴定设备,光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜,倒置显微镜,光学显微镜,1,、玻璃器皿,三、培养器皿及实验用具,培养皿,三角瓶,培养瓶,2,、金属材质用具,镊子,解剖刀,接种针,1,、玻璃器皿洗涤,新购置玻璃器皿,1%,稀,HCl,浸渍,12h,洗衣粉洗涤,清水冲洗,晾干备用,已用过的玻璃器皿,四、洗涤技术,清洗后器皿内外不可挂有水珠，否则重洗，若重洗后仍挂有水珠，则需用洗液浸泡数小时后（或用去污粉擦洗），重新清洗。,2,、塑料用品洗涤,新的塑料器皿打开即用,已用过的塑料器皿,2%NaOH,浸泡,12h,清水冲洗,2%5%,盐酸浸泡,30min,清水冲洗,蒸馏水冲洗,晾干备用,金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤（新的可以用热洗衣粉水洗净），需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后火焰干燥。,3,、金属用品洗涤,（一）、灭菌工作是极其重要的。,首先应建立有菌和无菌的概念有菌的范畴：有菌：,凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都是有菌的。如植物的表面、超净工作台的台面，未处理的工具和手等。,无菌,：高压高温处理（工具、器皿、培养基等）,物理或化学处理；,火烤后的物体；,健康的动植物不与内外部表面接触的组织,内部可能是无菌的（有时也有内生菌，但,不会影响培养，也不会污染）,五,.,灭菌技术,1,、,物理方法,：干热、湿热、过滤（微米）紫外灯、超声波等。,2,、,化学方法,：使用灭菌剂或抗菌素，如酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等。,五,.,灭菌技术,干热灭菌,玻璃器皿、器械,湿热灭菌,培养基、蒸馏水、器械、棉塞等,熏蒸灭菌,接种室、培养室,过滤灭菌,液体培养基、蒸馏水,药剂灭菌,培养材料,烧灼灭菌,器械、瓶口、棉塞、包头纸,辐射灭菌,接种室、培养间,（一）各种灭菌方法及其使用范围,适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。操作方法：,150,、,40min,或,120,、,120min,，如果发现芽孢杆菌，,160,、,90,120min,（,1,）干热灭菌,适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。,121,维持,20,30min,注意点：加足水、排尽气、气压降到,0,时，才能开盖。,（,2,）湿热灭菌,培养基的灭菌一般用高压高温处理，但如果培养基中某些成分遇到高温分解（如某些生长调节剂,GA3,、玉米素等），就需要过滤灭菌。另外酶、血清等也需要过滤灭菌。 灭菌方法：将生长调节剂或酶配成一定浓度，用注射器注入微孔滤膜虑，滤膜孔径微米。制培养基时，现将培养基高压灭菌，待降至,50,左右时，加入适量的激素，然后分装。,（,3,）过滤灭菌,主要是利用紫外灯进行照射，适合实验室空气、操作台等，灭菌时间,20,30min,。注意：关灯后,5min,后再进入。超净工作台关灯后要打开风机。,（,4,）射线灭菌,用火焰灼烧达到灭菌目的，适用于接种器皿的灭菌。,（,5,）火焰灼烧灭菌,适用外植体、实验器皿、操作表面、皮肤等。,几种常用消毒剂的效果比较,消 毒 剂,使用浓度,(%),消毒时间,(min.),效 果,残液去除难易,乙醇,70-75,0.1-3,好,易,新洁尔灭,10,20,5,30,好,易,氯化汞,0.1,1,2,15,最好,最难,过氧化氢,10,12,5,15,较好,最易,抗菌素,4,50mgl,-1,30,60,较好,较难,次氯酸钙,/,纳,9,10,5,30,好,易,（,6,）消毒剂,长期不用的培养室或接种室要进行熏蒸。方法：,甲醛、高锰酸钾熏蒸,。 甲醛的用量通常按每立方米空间,2-6,毫升计算，高锰酸钾的用量是甲醛的一半。室内准备妥当后，把称好的高锰酸钾放在瓷碗或烧杯内,(,最好在碗或杯下面铺一张报纸，以利清洗,),，然后将甲醛也倒入碗或杯内，立即出屋关门。几秒钟后，甲醛溶液即沸腾挥发。高锰酸钾是一种氧化剂，当它与一部分甲醛作用时，由氧化反应产生的热可使其余的甲醛挥发为气体。,（,7,）熏蒸灭菌,甲醛熏蒸接种室应至少在使用前,24,小时进行，熏蒸后密闭保持,4,小时以上再进入室内工作。甲醛对人的眼、鼻有强烈刺激作用。因此，可在使用前用氨进行中和。取与甲醛等量的氨水，倒在另一个烧杯里，迅速放入熏蒸室内，使甲醛和氨水发生中和反应，以消除甲醛味，减少对人体的刺激作用。使用氨水应在工作前,2,小时进行。 对有材料的培养室，也可以采用乙二醇加热熏蒸。,（二）接种室灭菌,空气消毒灭菌,接种室,超净工作台,紫外灯照射,70%75%,的酒精擦洗,培养材料的接种,紫外灯照射,（三）外植体灭菌,流水冲洗,1020min,或更长时间,70%75%,酒精中浸泡,30s,0.1%0.2%,氯化汞液中浸泡,10min,左右,蒸馏水冲洗,45,次,在,10%,的次氯酸钠、饱和漂白粉浸泡,30min,左右,备用,常用消毒剂消毒灭菌比较表,消毒剂,使用浓度（,%,）,去除难易,消毒时间（,min,）,效果,次氯酸钙,次氯酸钠,漂白粉,溴水,过氧化氢,升汞,酒精,抗生素,硝酸银,910,2,饱和溶液,12,1012,0.11,7075,45,（,mg/L,1,易,易,易,易,最易,较难,易,中,较难,530,530,530,210,515,210,0.22,3060,530,很好,很好,很好,很好,好,最好,好,较好,好,污染来源,人为因素（工作人员本身）：工作服、帽、口罩、酒精擦手。,物品因素,器皿和用具,培养皿：洗热压,玻璃器皿：洗干热（干热箱）或晾干,接种用具：用,CCL,4,布擦湿布擦,泡,75%95%,酒精烧,培养基：湿热,培养材料,外部细菌：用水冲洗化学药剂处理,内部细菌,茎尖培养,加抗生素：青霉素、利福平,操作的空气：洗刷地板,95%,酒精擦超净工作台,用化学试剂薰蒸,六、无菌操作技术,1,、实验器具和材料的准备,2,、用,75%,的酒精擦拭超净工作台，然后室内及超净工作台用紫外灯杀菌,20min-30min,。注意：台面上的用品不要放置太多或重叠放置，以免降低灭菌效果。,3,、关紫外灯、打开风机，过,5-10min,进入缓冲间，以,75%,洗手和手臂，更换无菌服、帽子和口罩。进入接种室。（注：没有特别情况，尽量不要下工作台）,六、无菌操作技术,4,、用,70,75,的酒精拭擦台面并消毒双手。试验用具也应该用酒精消毒。点燃酒精灯，将金属器械在其火焰上灼烧，冷却待用。,注意：所有操作应在火焰近处并经过灼烧进行。金属器械不能过度灼烧，以防退火。移液管不能灼烧，培养瓶口、塑料材料、橡胶材料过火焰不能时间太长。,5,、取流水冲洗（至少,30min,）过的外植体，用一定的消毒剂浸泡消毒，用无菌水冲洗,34,次，放入无菌培养皿中，置于酒精灯火焰下方，用无菌的接种器械进行分离、切割或其他处理。,6,、打开培养瓶，瓶口在灯焰处旋转灼烧，用镊子将培养材料置于培养基上，灼烧镊子放回，灼烧瓶口，盖上瓶塞。,7,、用酒精擦洗工作台和手。进行下一轮操作。,注意（,1,）进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。（,2,）不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消毒或取备品更换。 （,3,）为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中央。（,4,）工作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用前，不要过早开瓶；用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口直立可增加落菌机会。,（,5,）吸取营养液、细胞悬液及其它各种用液时，均应分别使用吸管，不能混用，以防扩大污染或导致细胞交叉污染。（,6,）工作中不能面向操作区讲话或咳嗽，以免唾沫把细菌或支原体带入工作台面发生污染。（,7,）手或相对较脏的物品不能经过开放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液时如吸管尖碰到瓶口，则应将吸管丢掉。,接种时在近火焰处打开瓶口，使瓶倾斜，以免空气中微生物落入瓶中。,正,确,错 误,整个接种操作应在近火焰处进行，且动作要迅速。,正,确,错,误,接种过程中尽可能达到悬空要求,防止操作带来的污染,正,确,错,误,接种时不得用手接触瓶盖内壁或瓶口,正,确,错,误,瓶盖朝上放，接种完毕后立即盖好瓶口,正,确,错,误,接种完一瓶用火烧用具以防止交叉污染产生,配方成分,弱液,次强液,强液,常用配方,重铬酸钾（,g,）,浓硫酸（,ml,）,蒸馏水（,ml,）,50,100,1000,100,200,1000,60,800,200,100,200,800,清洁液配方,实验员消毒,实验室、无菌台灭菌,实验器材的灭菌,无菌接种,消 毒,实验台卫生,培养室培养,谢谢,