实验四地中海贫血与红细胞渗透脆性试验

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,实验四地中海贫血与红细胞渗透脆性试验,Thalassemia,地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一,全球有亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的,2%,）,中国南方不同高发地,区人群携带率,3,24%,地贫的发病率、地域分布及危害,地中海沿岸国家、东南亚及中国南方多见；,广西发病率为,20%,；,重型地贫给家庭社会带来沉重的经济负担和难以估量的精神负担；,中国南方人群地贫基因携带率,地区,携带率,(%),地贫,地贫,合计,广西,17.6,6.4,24.0,广东,8.5,2.5,11.0,海南,12.7,2.7,15.4,云南,9.8,7.3,17.1,贵州,4.2,5.1,9.3,重庆,5.2,2.0,7.2,高发区人群遗传负荷评估,定义,地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血）：,由于,遗传性珠蛋白基因缺陷,（突变、缺失等）引起的,一种或多种珠蛋白肽链生物合成减少或完全不能合成,，导致,珠蛋白肽链间的正常平衡不能维持,，同时,成人型,Hb,（,HbA,：,2,2,）合成降低,的一种,遗传性血红蛋白病,。,其特点是,由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或几种合成减少或不能合成，导致,血红蛋白,的,组成成分,改变。本组疾病的临床症状轻重不一，大多表现为,慢性进行性,溶血性贫血,。,地中海贫血的病理生理,-,地中海贫血,重型,地贫,（,HbBarts,胎儿水肿综合征,）,4,个,基因都缺失了,(,-,/,-,),，在孕后期或出生后即死亡。,重度,-,地中海贫血,重度,-,地中海贫血,骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等,重度,-,地中海贫血,重度,-,地中海贫血,重度,-,地中海贫血,重度,-,地中海贫血,重度,-,地中海贫血,结 论,1.,广西人群地贫基因携带率很高。,一方为基因携带者，推荐配偶行基因检测,。,2.,父母双方同类型地贫者需行遗传咨询和产前诊断,。,3.,产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。,4.,绒毛活检和羊膜腔穿刺均可行地贫产前诊断,，但,推荐羊膜腔穿刺,。,5.,无创性产前诊断,是未来发展的方向。,羊膜腔穿刺术,羊膜腔穿刺术,实验室检查,-,靶型,RBC,红细胞脆性实验,Erythrocyte fragility test,地贫患者,正常人,血红蛋白电泳,Hemoglobin electrophoresis,chain,disappear,(,0,-thal major),chain disappear,(HbBarts hydrop fetalis),1,2,3,4,1,2,3,4,肽链分析,Peptide chain,analyses,单管多重,PCR,PCR,-,ASO,诊断,(Diagnosis),临床特点实验室检查父母调查阳性（基因分析）,地中海贫血初筛检查,MCV 80fl,和,/,或,MCH 27pg ,则高度怀疑为地贫,;,红细胞渗透脆性试验阳性,(Red cell os motic fragility test ,ROFT ; 0.60 ):,即可怀疑为地贫,;,HbA2 ,3. 5 % ,则为,地贫基因携带者,地中海贫血确诊试验,地贫,诊断基因芯片,(Thalachip);,地贫,基因诊断条膜,(,反向点杂交,)/,一管法多重,PCR,ASO,寡核苷酸探针点杂交,DNA,测序,鉴别诊断,(Differential diagnosis),缺铁性贫血,遗传性球形红细胞增多症,传染性肝炎或肝硬化,实验：红细胞渗透脆性检验,(,试剂盒一管法,),【检验原理】,贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是,溶血率降低引起的贫血,（如地贫症、严重缺铁性贫血症）,【主要组成成分】,组成,：,由,SG-A,母液（红细胞渗透脆性检测液）；,SG-B,母液（终止红细胞溶血液）,；,SG-C,母液（红细胞溶血液）组成；,成分,：,SG-A,母液采用氯化钠（,NaCl,）、磷酸氢二钠（,Na,2,HPO,4,）、磷酸二氢钠（,NaH,2,PO,4,）制成；,SG-B,母液采用氯化钠制成；,SG-C,母液采用皂素（,saponin,）制成。,【样品要求】,新鲜抗凝全血,（,肝素,、,EDTA-Na,、,ACD,），置,2,8,保存。已发生溶血或有血凝块的标本为不合格样品。标本采集后，测试应在三日内完成。,【实验操作】,1,、,取试管一只，加入,A,试验液,1ml,，放,37,，预热,1-2,分钟,。,2,、,加入,待测抗凝全血,10,l,，立刻混匀，继续放在,37,保温,5,分钟,。,3,、,5,分钟后,，加入,B,试验液,1ml,。混匀，,3000,转,/,分钟，离心,5,分钟,。,4,、,将,上清液轻轻倒入,1.0cm,的比色杯中,（,切勿搅动试管底的红细胞,）,，于,530nm,波长读取光密度,D1,（以纯化水作空白对照）。,（勿倒掉比色杯中的溶液）,5,、,向试管中加入,C,试验液,，混匀，,待血液全部溶血,（透明红色）后，,将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀,。,6,、,将混匀后的溶液，倒入比色杯中，再于,530nm,波长比色，读取光密度,D2,。,7,、,按下列公式计算出溶血率百分比。,溶血,=,D1,100,【参考值（参考范围）】,溶血率,65,为正常溶血率；,55,为溶血率降低；（注,56-64,为溶血率轻度降低）。,【检验结果的解释】,正常溶血率：指红细胞渗透脆性在正常范围。,溶血率降低：指红细胞渗透脆性降低；常见于地贫或低频基因携带者、严重缺铁性贫血者，小性红细胞增多症贫血者等。,溶血率轻度降低：指红细胞溶血率不明显减低，在正常与可疑贫血症之间。,谢谢大家！,