液相色谱常见问题及其对策

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,液相色谱常见问题及其对策,液相色谱常见问题类型,A. 压力异常（偏高、波动）,B. 漏液,C. 保留时间漂移,D. 基线问题（漂移、噪声）,E. 峰形异常,1,一、 压力异常,现象：无压力，流动相不流动,可能原因,1、保险丝断或电源问题,2、柱塞杆折断,3、泵头内有空气或流动相不足,4、单向阀损坏,5、漏液,6、压力传感器损坏(流动相流动正常，但无压力),2,一、压力异常,现象：压力持续偏高或不断上升,1、流速设定过高,2、保护柱或柱子筛板堵塞,3、流动相使用不当或有缓冲盐出,4、色谱柱选择不当,5、进样阀损坏,3,一、压力异常,现象：压力持续偏低,1、流速设定过低,2、色谱柱选择不当,3、柱温过高,4、系统漏液,4,一、压力异常,现象：压力波动,可能原因,1、泵头中有气泡,2、单向阀损坏,3、柱塞密封圈损坏,4、脱气不充分,5、系统漏液,6、使用了梯度洗脱,5,二、漏液,接头处漏液,1、接头处松动,2、接头磨损,3、接头被污染,6,二、漏液,泵漏液,1、单向阀松动,2、泵密封损坏,3、接头松动（不要拧的太紧）,7,二、漏液,进样阀漏液,可能原因,1、转子密封损坏,2、定量环堵塞,3、进样口密封松动,4、进样针尺寸不合适,5、废液管产生虹吸,6、废液管堵塞,8,二、漏液,检测器漏液,可能原因,1、流通池垫片损坏,2、流通池透镜破碎,3、手紧接头处漏液,4、废液管堵塞,5、流通池堵塞,9,三、保留时间漂移,保留时间漂移,可能原因,1、柱温变化,2、流动相组分变化,3、色谱柱没有平衡,4、流速变化,5、泵中有气泡,6、流动相选择不当,7、缓冲容量不够,10,四、基线问题,基线漂移,可能原因,1、温度波动,2、流动相不均匀(脱气，使用纯度更高的溶剂),3、流通池被污染或有气泡,4、流动相配比不当或流速变化,5、柱子平衡（约3060min）,6、流动相污染，变质或由低品质溶剂配成,7、样品中有强保留的物质以馒头样峰被洗出,8、检测器没有设定在最大吸收波长处,11,四、基线问题,基线噪声（规则的）,可能原因,1、流动相、泵、检测器中有气泡,2、有地方漏液,3、流动相混和不均匀,4、温度影响（检测器和柱温差别太大）,5、其他电子设备的影响,12,四、基线问题,基线噪声（不规则的）,可能原因,1、流动相污染、变质或由低质溶剂配成,2、有地方漏液,3、流动相各溶剂不相溶或混和不均匀,4、检测池能量不足,5、系统内有气泡,13,五、峰形异常,前沿峰、拖尾峰,可能原因,1、柱塞板堵塞,2、色谱柱塌陷,3、干扰峰,4、柱温过低,5、缓冲不足或不合适,6、重金属污染,7、样品溶剂选择不当,8、样品过载,14,五、峰形异常,分叉峰,可能原因,1、保护柱或分析柱污染,2、样品溶剂不溶于流动相,15,五、峰形异常,峰展宽,1. 进样体积过大,2. 流动相粘度过高,3. 检测池体积过大,4. 保留时间过长,5. 样品过载,16,五、峰形异常,鬼峰,1、进样阀残余峰,2、柱未平衡,3、水污染,4、柱未平衡 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 (尤其是离子对色谱),17,液相色谱容易出问题的部件,维护流程图,吸滤头,单向阀,柱塞密封圈,线路过滤器,手动进样器,检测器,18,液相色谱容易出问题的部件,吸滤头,材料：不锈钢烧结，孔径10um,故障：堵塞,表现：管路中不断有气泡生成,措施：用520的稀硝酸，超声波清洗，,再用蒸馏水清洗,注意点：吸滤头拆下时不必将塑料管剪断,19,液相色谱容易出问题的部件,单向阀,故障1：宝石球粘附于垫片,表现：泵无法吸液或排液，流路不通,措施：1）用针筒抽出口单向阀以产生压，,使宝石球与垫片分开,2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，,用超声波清洗,故障2：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好,表现：系统压力波动大,措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超,声波清洗,20,液相色谱容易出问题的部件,故障：密封圈磨损而导致,密封不良,现象：系统压力波动大或漏液,措施：更换密封圈,注意点：,更换密封圈 拆卸泵头前，柱塞杆复位,21,液相色谱容易出问题的部件,手动进样阀,故障：转子密封损坏,现象：漏液,原因：a 拧的太紧,b 样品太脏,c 针头损坏或不使用液相专用针,解决措施：更换转子密封，并在使用时注意保养,22,液相色谱容易出问题的部件,手动进样阀,故障：载样困难,原因：a 定量环堵塞,b 进样器污染,解决措施：清洗或更换定量环、进样器,23,液相色谱容易出问题的部件,柱子,故障,：,系统高压、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、,分叉峰），保留时间的改变,解决措施：清洗,正相柱，正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇,反相柱，甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、0.05M稀,硫酸,24,液相色谱容易出问题的部件,峰产生有肩或分叉的原因,1.,柱子劣化,（进口处产生不均匀的空隙）,2.,样品劣化,（生成氧化物、分解物等）,判断标准,所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化,25,液相色谱容易出问题的部件,延长柱寿命方法：,倒冲柱,换过滤片,修补柱头,26,液相色谱容易出问题的部件,分析柱的维护,1、在使用新柱之前，最好用强溶剂在低流量下(0.2-0.3,ml/min)冲洗30 mins，长时间未用的分析柱也要同样处理,2、定期使用强溶剂冲洗柱子,3、使用缓冲盐时，要先用水冲洗，再用有机溶剂冲洗,4、净化样品,5、分离条件,6、不使用时，要盖上盖子，避免固定相干枯,7、使用预柱,8、避免流动相组成及极性的剧烈变化,9、避免压力脉冲的剧烈变化,27,液相色谱容易出问题的部件,更换氘灯,（紫外检测器）,判断氘灯能量：,设定220nm波长，检查参比池能量，如,能量低于800，需更换氘灯。,操作注意点：不要用手直接接触氘灯表面,28,液相色谱注意几个问题,一、脱气,除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡,气泡对测定的影响：,1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积,2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形,3）检测器中的气泡产生基线波动,29,液相色谱注意几个问题,脱气的目的,1. 防止由气泡的产生引起的故障,2. 防止由溶解（在液体中的）气体量的变动引起的检测不稳定程度,1）示差折射率检测器,*使折射率变化,2）UV检测器（200nm以下）,*溶解氧气有吸收,30,液相色谱注意几个问题,二、缓冲液,选择缓冲液的步骤,1 .确定最佳分离状态时的流动相pH,2 .选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液,（即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液）,3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收,（在波长210nm附近进行检测时，不能用醋酸和柠檬酸的缓冲液）,31,谢谢大家 请批评指正,32,