液相提高灵敏度的方法

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,液相增加柱效、提高灵敏度的小诀窍,资料收集：,cbjcn1985,生化 多肽-,5988-6316EN,升温对于反相,HPLC,分离强疏水肽的影响 (,B27),Polypeptide,流动相:,A:,含0.05%三氟乙酸的水,B:,含0.05%三氟乙酸的乙腈,2%,B / min,进样量: 100,L (50g,的6,M,脲/5%乙酸),UV: 210 nm,流速:,1,mL,/min,室温,液相色谱柱:,ZORBAX StableBond-C18,色谱柱尺寸: 4.6,x 250 mm 5m,室温,30,0,C,40,0,C,50,0,C,60,0,C,70,0,C,提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度）,环保,样品: 除草剂,流动相: 52/48 0.1,M,乙酸钠/甲醇,pH 6,流速: 0.45,mL,/min,温度: 40, 90,检测:,UV,除草剂: 柱温的影响,Herbicides: Effect of Column Temperature,1. 西玛津,2. 敌草隆,3. 扑灭津,4. 扑灭净,5. 异丙甲草胺,1.,Simazine,2.,Diuron,3.,Propazine,4.,Prometryn,5.,etolachlor,液相色谱柱:,Zorbax,StableBond-C18,色谱柱尺寸: 4.6,x 150 mm, 5m,40,90,提高柱温，可增加柱效（提高灵敏度）,生物制药,液相色谱柱:,Zorbax,300 StableBond-C3,色谱柱尺寸: 4.6,x 150 mm, 5m,肽类/蛋白质: 升温对分离的影响,Peptides/Proteins:,Effect of Elevated Temperature,样品: 多肽,流动相:,A = 5: 95,乙腈 : 水, 0.10%三氟乙酸 (,V/V%),B = 95: 5,乙腈 : 水, 0.085%三氟乙酸 (,V/V%),梯度: 在 20,min,内 15-53%, 后运行时间 12,min,流速:,l.0,mL,/min,温度: 室温 -60,检测:,UV 215 nm,1. 亮氨酸脑啡呔,2. 血管紧张素,II,3.,核糖核酸酶,A,4.,牛胰岛素,5. 细胞色素,C,6.,溶菌酶,7. 肌红蛋白,8. 碳酸酐酶,1.Leucine,Enkephalin,2.,Angiotensin,II,3.,Rnase,A,4.,Insulin(BOV,),5.,Cytochrome,C,6.,Lysozyme,7.,Myoglobin,8. Carbonic,anhydrase,提高柱温，,可增加柱效,（提高灵敏度）,生物制药,液相色谱柱:,Zorbax,StableBond-C8,色谱柱尺寸:,150 mm, 5m,减小毛细管内径来提高,低浓度样品的检测灵敏度,Reducing Capillary ID to Improve Sensitivity,for Concentration-Limited Samples,流动相: 60%乙腈/40%水,流速: 内径 0.3,mm-4,uL,/min,内径 0.5,mm-10,uL,/min,内径 1.0,mm-50,uL,/min,内径 4.6,mm-1.0,uL,/min,温度: 室温,检测器:,UV 254 nm,样品: 200,ng,联二苯 (100,nl,),减小柱径，可增加柱效（提高灵敏度）,色谱柱技术 ,5988-6454EN,使用小体积色谱柱对于检测器响应时间的重要性 (,TE32),液相色谱柱:,ZORBAX StableBond-C18,色谱柱尺寸: 4.6,x 15 mm 3.5m,流动相:,乙腈,: 1%,甲酸=32: 68,UV: 254 nm,流速: 1.0,mL,/ min.,30C,进样量: 5 ,L,响应时间: 4.0秒,响应时间: 2.0秒,响应时间: 1.0秒,响应时间: 0.5秒,响应时间: 0.1秒,1.,尿嘧啶,2.,乙酰水杨酸,3.N-,乙酰苯胺,1.Uracil,2.Acetylsalicylic acid,3.Acetanilide,缩短检测器响应时间，可增加柱效 （提高灵敏度）,色谱柱技术 ：不同硅胶类型比较 (,TE1),流动相:,含0.05%甲醇的二氯甲烷,液相色谱柱,toluene,benzanilide,phenol,benzyl alcohol,Zorbax,Sil,Spherisorb,Zorbax,Rx-,Sil,甲苯,N-,苯甲酰苯胺,苯酚,苯甲醇,使用高纯硅胶，,可增加柱效,（提高灵敏度）,有机化学,5988-6366EN,pH,对苯胺取代物分析的影响 (,ORCH1),流动相,25,mM,磷酸: 甲醇=58: 42,流速:,1,mL,/min,22C,液相色谱柱:,ZORBAX StableBond-C18,色谱柱尺寸: 4.6,x 150 mm 5m,对位甲氧基苯胺,间位苯甲胺,3-氨基-苯甲腈,对位氯苯胺,间位氯苯胺,邻位氯苯胺,pH: 2.5,pH: 7.0,改变流动相,pH，,可增加柱效,（提高灵敏度）,生化 肽,5988-6293EN,三氟乙酸浓度对于反相肽的分离的影响 (,B10),Peptide,流动相:,A:,水和三氟乙酸,B:,乙腈和三氟乙酸,0 - 30%,B （30 min.,内）,流速:,1,mL,/min,UV: 254 nm,进样量: 6,uL,十肽菌素标样,S1-S5（,疏水性有略微差异）,40,C,液相色谱柱:,ZORBAX 300 SB-C8,色谱柱尺寸: 4.6,x 150 mm 5m,1.0%三氟乙酸,0.05%三氟乙酸,0.25%三氟乙酸,改变流动相,pH，,可增加柱效,（提高灵敏度）,食品分析,5988-6360EN,流动相强度对单糖和二糖分离的影响 (,FD4),流动相:,乙腈/水如图,流速: 1,mL,/min,示差折光检测器,液相色谱柱:,ZORBAX NH2,色谱柱尺寸: 4.6,x 250 mm 5m,果糖,葡糖,蔗糖,Palatinose,海藻糖,异麦芽糖,乙腈/水,70/30,乙腈/水,75/25,改变有机相%，,可增加柱效,（提高灵敏度）,色谱柱技术 ,5988-6468EN,有机改性剂和,pH,对于选择性的影响 (,TE5),流动相:,25,mM,磷酸缓冲液,流速:,1,.0,mL,/min.,22C,液相色谱柱:,ZORBAX,StableBond,-CN,色谱柱尺寸: 4.6,x 150 mm 5m,anisidine,m-toluidine,4-cl-aniline,3-aminobenzonitrile,3-cl-aniline,2-cl-aniline,甲氧基苯胺,间位苯甲胺,4-氯-苯胺,3-氨基苯甲腈,3-氯-苯胺,2-氯-苯胺,42%甲醇 ：58%缓冲液 30%甲醇 ：70%缓冲液,pH 2.6,pH 3.0,改变有机相%，,可增加柱效,（提高灵敏度）,色谱柱技术 ,5988-6453EN,ZORBAX Eclipse,系列色谱柱的选择性 (,TE31),液相色谱柱:,ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl,色谱柱尺寸: 4.6,x 150 mm 5m,流动相:,甲醇 : 水=,70: 30,UV: 254 nm,流速: 1.0,mL,/ min.,室温,Zorbax,Eclipse XDB-,苯基,Zorbax,Eclipse XDB-C8,Zorbax,Eclipse XDB-C18,1.,尿嘧啶,2.,苯酚,3.4-,氯-硝基苯,4.,甲苯,5.,萘,1.Uracil,2.Phenol,3.4-Cl-nitrobenzene,4.Toluene,5.Naphthalene,改变键合相，,可增加柱效,（提高灵敏度）,生物制药,液相色谱柱:,Zorbax,Extend-C18,色谱柱尺寸: 2.1,x 150 mm, 5um,三氟乙酸和氢氧化铵用于肽类,RP-HPLCESI-MS,分离的选择性比较,Selectivity Comparison of TFA and,NH,4,OH for Peptide RP-HPLCESI-MS Analysis,流速: 0.25,mL,/min.,温度: 25,梯度: 5-60%,B in 20 min.,LC/MS:,正离子,ESI-,Vf,70V,Vcap,4.5 kV,N2- 35,psi, 12 L/min., 300,样品: 4,L,(,各50,ng,),三氟乙酸条件:,A- 0.1%,三氟乙酸水溶液,B-0.085%,三氟乙酸 80%的乙腈溶液,NH4OH,条件:,A- 20,mM,NH4OH,水溶液,B- 20,mM,NH4OH 80%,的乙腈溶液,改变有机添加剂，,可增加柱效,（提高灵敏度）,生化 ,肽 ,十肽菌素 ,5988-6299EN,酸对于反相肽的分离的影响(,B16),decapeptide,液相色谱柱:,ZORBAX 300 SB-C8,色谱柱尺寸: 4.6,x 150 mm 5m,十肽菌素,S1,十肽菌素,S2,十肽菌素,S3,十肽菌素,S4,十肽菌素,S5,decapeptide,S1,decapeptide,S2,decapeptide,S3,decapeptide,S4,decapeptide,S5,0.1% 三氟乙酸,0.025,M H,3,PO,4,改变有机添加剂,可增加柱效,（提高灵敏度）,流动相:,A:,含相应的酸的水相,B:,含相应的酸的乙腈,0%-30%,B（30 min.,内）,进样量: 6,L,肽标样,UV: 254 nm,流速:,1,mL,/min,40C,色谱柱技术 流动相对色谱的影响(,TE40),液相色谱柱:,ZORBAX Eclipse XDB-C8,色谱柱尺寸: 4.6,x 50 mm 3.5m,UV: 254 nm,流速: 1,mL,/ min.,室温,Uracil,Butylparaben,Naphthalene,Dipropylphthalate,Acenaphthene,尿嘧啶,尼帕尔金丁酯,萘,二丙基邻苯二甲酸酯,苊,刻度混合:,Dial-a-Mix,A:,水,B:,甲醇, 用泵抽取50%,B,体积比混合:,Vol/Vol,250,mL,水 + 250,mL,甲醇, 用泵抽取100%混合液,定容混合:,Mix-to-Mark,250,mL,甲醇, 用水定容至500,mL, 用泵抽取100%混合液,预混合（重量比混合）:,Premixed,(,w/w,),200 g,甲醇 + 200,g,水, 用泵抽取100%混合液,改变流动相配比方式，可增加柱效,（提高灵敏度）,谢谢观看！,资料收集：,cbjcn1985,