液相色谱气相色谱质谱仪的维护与常见故障

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,液相色谱仪的日常维护与常见故障排除,1,一 液相色谱仪的 日常维护,2,储液器,使用HPLC试剂/溶剂，含缓冲盐的流动相过0.45m膜除去微粒物质;更换流动相时,应彻底清洗，防止交叉污染。,定期清洁储液器及附件，防止长微生物。,3,输液泵,密封垫易损坏引起故障，每天实验结束一定要认真冲洗泵,注意防止堵塞,使用缓冲盐流动相时,更要小心。,使用HPLC级试剂,注意泵压力不要太高,要适当调整压力,一般压力上限在10-20MPa，下限为0.5MPa，注意防止因泵堵塞造成压力过高损坏柱塞杆或烧坏电机 。,4,进样器,停机前一定冲洗干净进样器内残留的样品或缓冲盐，防止样品和无机盐沉积造成进样阀转子面磨损或堵塞。,注射器最好使用仪器自配尖头、平头针，不要用其它仪器的。,5,柱,防止柱性能下降,1 溶剂的化学腐蚀性不能太强；,2 避免颗粒物在柱头沉降；,3 柱压不能太高，防止冲击太大；,4 流动相pH值小于7时，最好用大粒度同种填料的予,柱；,5 柱头加滤片（烧结不锈钢), 需要时加保护柱；,6 经常清洗柱；,7 长时间不用时要保存好,一定要洗去缓冲盐,加入大,于10%有机溶剂，将柱两端拧紧,保持柱填料湿润。,6,检测器,保持清洁，每天用后与色谱柱一起清洗；,不定期用强溶剂反向冲洗检测器；,使用脱过气的流动相，防止气泡滞留池内；,检测器灯有一定寿命，不用时不开灯。,7,记录器数据处理系统,记录仪:,热敏式打印头要注意记录纸的质量,开机前注意检查走纸部件,不要卡纸.,色谱工作站:,防止网上病毒损坏软件.,8,二 常见故障的排除,9,1、储液器,脱气不充分(噪声大，出毛刺),用He脱气,真空,脱气,超声,脱气,加热回馏,脱气,(混合流动相不宜),10,1、储液器,流动相供给不畅，泵压力不稳,流动相接近用完,过滤器堵塞（有颗粒，长霉）,流速过高,阻力大,造成空化现象.解决的办法是:降低流速;换大孔过滤器;加大管路内径;抬高储液器.,11,1、储液器,储液器或流动相被污染,产生有规则的噪声；,基线上升，梯度洗脱出鬼峰；,原因:,溶剂质量差（含杂质多）；,配流动相的玻璃器皿不合格,微生物影响；,配制流动相的操作不当（过滤、脱 气、搅拌).,12,2、输液泵,单向阀,a.球和阀座粘在一起，堵死，打不出溶剂，(缓冲盐流动相),用高质量的溶剂冲洗，不同极性溶剂冲洗,如水、甲醇、异丙醇、二氯甲烷，更换新单向阀。,13,2、输液泵,b. 球和阀座密封不严，压力不稳，气泡进入阀中，紧贴在阀体内，使球难以返回阀座，引起倒流，压力和流速变化大，可能有小晶体颗粒。,清除气泡的办法：打开排液阀，大流量冲洗，用脱过气的甲醇冲洗，一般可解决问题。,14,2、输液泵,泵垫圈磨损或破碎：高压下压力不稳，从泵头往外渗漏流动相，色谱峰的保留时间会改变。,解决办法：更换新垫圈。更换方法按维修说明书上的方法一步步操作。,15,2、输液泵,注意：,输液泵的垫圈要和流动相匹配协调。多数垫圈和流动相是协调的,但有的垫圈适用于甲醇、水、乙腈，在四氢呋喃中溶解、变粘、变软。,需换垫圈时,应向厂商咨询垫圈的规格型号。,色谱工作者一般应学会换密封垫圈。,16,2、输液泵,柱塞杆故障,磨损、漏液,使用不当被折断,柱塞杆被卡住，不能运动。,更换新柱塞杆,请维修工程师帮助解决，或参照专门的操作手册自己动手更换。,17,3、进样系统,a. 渗漏,转子密封垫圈松紧不合适；,垫圈不配套；,组装不对。,手动进样系统器,18,3、进样系统,b. 堵塞,样品打不进去。,样品管堵塞：环管用反冲法或超,声清洗排除（或换新管).,手动进样系统,19,3、进样系统,c. 注样孔,a) 装样时针头周围渗漏：孔道堵塞，或者放空管和样品管太细，阻力太大；针头密封管规格不对，针头太细。,手动进样系统,20,3、进样系统,c. 注样孔：,b)注射孔渗漏：放空管有虹吸现象，转子密封面上孔之间有磨损。为防止虹吸,放空管末端应在放空,瓶液面以上,更换磨损的转子.,手动进样系统,21,3、进样系统,c)样品滞留,阀在进样位置停留时间不够。,要求停留时间至少应让流动相流过的体积是环体积的10-20倍。,(一般是在下一针进样前才将阀扳到装样位置),手动进样系统,22,3、进样系统,c)样品滞留,残留样品留在样品环中或注射器中，或从放空管中虹吸回来,污染下一个样品.此时可用5-10倍的流动相或新样品冲洗注射孔和注射器,若是虹吸,应加限制管。,手动进样系统,23,3、进样系统,c)样品滞留,管路接头有死体积滞留样品，很难冲洗干净,此时应检查装配情况，确定是否需换新配件。,手动进样系统,24,3、进样系统,a. 样品瓶不配套,瓶小针弯、折断,瓶大样品少，抽不上样,瓶破碎,更换合适的样品瓶。,自动进样系统,25,3、进样系统,b. 注意样品瓶隔垫，防止污染。,c. 进样器针头堵塞,（样品、缓冲,盐、隔垫碎片、针头本身),，,可用溶剂清洗，金属丝疏通，,或换新针头。,自动进样系统,26,3、进样系统,d. 样品滞留：空白溶剂出色谱峰.,加倍清洗，或调整样品瓶顺序，（从低浓度开始，高浓度放后,面）或在样品瓶前放清洗液瓶.,自动进样系统,27,4、色谱柱,1)塔板数下降,a. 样品处理不合适，选择适当的样品净化,方法，选择合适流动相。,b. 柱头塌陷，填装修补。,2)峰形变坏,出现拖尾峰，分叉峰，非高斯峰。,与塔板数下降有关，峰形坏保留时间不变，,可能是柱堵塞(不锈钢烧结片)，或柱头有空,穴。,28,4、色谱柱,3)柱压突然增大,样品沉积在柱内,用能溶解样品的,溶剂冲洗（断开柱和检测器）可正,向冲，反向冲。,柱内硬件有问题：,滤片堵塞，换新片;,塌陷：用相同填料填充、修补。,29,4、色谱柱,4)保留时间改变,不同柱保留时间的变化,主要是填料差异造成的,不同牌号柱出峰顺序不变，保留时间有小的变化。,若峰顺序变化，保留时间变化较大，应考虑换柱或优化分离条件。,对专门的分析最好用同一批号的柱子,。,30,由色谱柱引起的故障,故 障,现 象,解决办法,过滤片堵塞,压力增高、N下 降、峰形差,倒柱冲洗或换过滤片,柱头塌陷,峰分叉、N下降,修补柱头,健合相流失,保留值改变、峰形差、N下降,换柱,样品堵塞,压力高,用能溶解样品的溶剂冲洗,强吸收样品,N下降、保留值小,强溶剂反冲,31,5、检测器,a.,灯故障:基线噪声大,灵敏度低,氘灯寿命:1000h,汞灯和钨灯寿命:2000h,一般使用6个月以上可能接近寿命期限,可以考虑更换新灯.,紫外可见光检测器,32,5、检测器,b. 流动池,流动池内有气泡：用脱气甲醇，不同流,量冲洗。,池堵塞（入口、出口、池内）：,用可溶堵塞物的溶剂冲洗 （缓冲盐用,水冲洗）,池污染：异丙醇、二氯甲烷、 6mol/L HNO,3,冲洗.,紫外可见光检测器,33,5、检测器,b. 流动池,测量池和参比池失配,UV以空气为参比，一般不扣流动,相本底，若用有紫外吸收的流动相，,参比信号不为零，会出现倒峰和伪,峰。此时，选择合适的流动相。,紫外可见光检测器,34,5、检测器,c. 时间常数选择：,（过滤噪声）,有的仪器有固定的时间常数，有的需设置,时间常数。时间常数太小, 噪声增大;时间常数,太大,出现宽峰、拖尾或矮峰。,时间常数的设置一般根据经验估计，小颗粒,柱常数小，可选最窄峰宽的1/10作为时间常数,对4.6(150-250)mm，5um柱，可选0.5s or1s,紫外可见光检测器,35,5,检测器,非线性响应,超出线性范围:样品量太大;,检测器的衰减超出了其线性动,力学范围;,流动相的紫外吸收比较强.,36,5 检测器,温度影响,环境温度变化引起基线漂移。,流动相温度变化引起折射率改,变，紫外光传导变化。,柱温变化引起基线漂移。,37,5 检测器,信号线故障,记录仪和数据处理系统信号线插接不紧,接触不良，信号很弱，出现不需要的噪音,此时按说明书检查线路连接。,地线对仪器很重要, 仪器外壳和信号线的接地很严格，接地不良会出现较大的基线噪声，接错线会造成短路，烧毁仪器。,38,5 检测器,波长问题,次级发射效应：用氘灯作可见光范围的光源时会发生次级发射效应，用钨灯没有此影响.,正确选择波长:既照顾到灵敏度,有考虑到稳定性,波长校准：机械转动光栅选择波长,因磨损造成所选波长与刻度盘上的不一致，而且重复性也差。可用波长溶液校准：235、257、315、350nm 。,39,谢谢,40,