植物生理学大实验 实验一 植物激素对植物形态建成的作用

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,生物学综合实验模块二,植物生理学大实验,1,实验一 植物激素对植物形态建成的作用,目的与要求,了解不同比例的生长素和激动素对烟草髓愈伤组织形成和分化的影响，并学习植物组织培养的技术。,原理,植物各器官的分化，首先是细胞的极化过程。植物体的每一个细胞都由受精卵分裂而来，即使高度分化的细胞，也保留着遗传上的全能性，即在每一个细胞中，包含着产生一个完整有机体的全部基因。,在烟草髓组织培养中，激动素和生长素在愈伤组织的形成和分化中，有相互作用。产生大量的愈伤组织，需要有生长素和激动素。在一定浓度范围内，生长素,/,激动素的比例高时，产生根；生长素,/,激动素比例低时，产生芽；在二者的比例子居间时，愈伤组织占优势。,2,材料与设备,一、材料,40-60,厘米高、生长健壮的烟草植株二株。,二、设备,高压灭菌锅 培养室,超净工作台 三角瓶（,100,毫升）,培养皿 手术刀,封口膜 长柄镊子,手术剪 消毒棉,3,试 剂,各种母液,（,1,）,1,毫克,/,毫升的生长素溶液,（,2,）,1,毫克,/,毫升的激动素溶液,（,3,）,1,毫克,/,毫升维生素,B1,（盐酸硫胺素）水溶液,（,4,）,20,毫克,/,毫升的肌醇溶液,（,5,）称取下列试剂，溶于水后定容到,250,毫升。,H,3,BO,3,0.31,克,KH,2,PO,4,8.5,克,KI 0.0415,克,Na,2,MoO,4,2H,2,O 0.0125,克,CoCl,2,6H2O 0.00125,克,（,6,）称取下列试剂，溶于水后定容到,250,毫升。,MgSO,4,7H,2,O18.5,克,MnSO,4,H,2,O0.845,克,ZnSO,4,7H,2,O0.43,克,CuSO,4,5H,2,O 0.00125,克,（,7,）称取下列试剂，溶于水后定容到,500,毫升。,Na,2,EDTA 1.86,克,FeSO,4,7H,2,O1.39,克,4,愈伤组织诱导培养基,（,RM-1965,培养基）,每一升培养基含有：,母液（,5,）,5,毫升 盐酸硫胺素,0.4,毫升,母液（,6,）,5,毫升 生长素,2,毫升,母液（,7,）,10,毫升 激动素,0.30,毫升,NH,4,NO,3,1.65,克 肌醇,5,毫升,KNO,3,1.9,克 蔗糖,30,克,CaCl,2,0.33,克 琼脂,10,克,用,1M,的氢氧化钠调,pH,至,5.6,5.8,。每瓶装,50,毫升，于高压灭菌,锅中灭菌,121,15-20,分钟，冷却后备用。,5,愈伤组织分化培养基,除生长素和激动素按下面的浓度加入外，培养基的其他成分和浓,度，同,RM-1965,培养基。培养基分成六个处理，每个处理有五个重复。,生长素浓度（毫克,/,升） 激动素浓度（毫克,/,升）,（,1,）,0 0,（,2,）,0 0.2,（,3,）,2 0,（,4,）,2 0.2,（,5,）,2 0.02,（,6,）,0.02 2,调整,pH,、分装及灭菌的步骤同诱导培养基。,6,操作程序,一、愈伤组织的诱导,1,烟草茎段的灭菌,取约,2,尺高的烟草植株地上部分，去叶，去顶，刷洗干净。切成,7,厘米长的小段，分别用,70%,的乙醇和,5%,次氯酸钠溶液浸泡消毒，置于无菌培养皿中备用。,2,烟草髓的制备,在无菌超净工作台中，用镊子夹住烟草茎切段的顶端，另取无菌手术刀将切段四周的皮层组织切掉，直至露出烟草髓组织，然后用手术刀将髓的两端各切出,0.5,厘米去掉，再将中间一段切成,2,毫米左右厚的小圆片，切割时要注意烟草形态学的上下方向。,3,接种,用长柄镊子向装有诱导培养基的三角瓶中，接入三个髓片，使其形态学的上端朝下紧贴在培养基上，封好封口膜。,4,培养,将接种完毕的材料置于培养室中，,28,下培养。一周后，可明显地看到圆片的周围和上表面渐渐地形成愈伤组织。,7,操作程序,二、器官的再分化,在无菌条件下，用长柄镊子将诱导出的愈伤组织取出，用手术刀小心地切成约,222,毫米,3,的小块，并分别转入,RM,分化培养基中，置于,28,培养室中自然光照下培养。每周观察培养物，记录其生长及变化情况。五周后总结观察结果。,8,结果记录,1,愈伤组织出现的时间。,2,根和芽出现的时间。,3,统计根、芽及全苗数。,处理号根数芽数全苗数,（,1,）,（,2,）,（,3,）,（,4,）,（,5,）,（,6,）,9,思考题,1,愈伤组织诱导培养基和分化培养基有何区别？,2,本实验中根和芽分化的情况如何？试解释不同,激素所起的作用。,3,烟草髓定植时，为什么要把形态学的上端朝下？,10,