DNA的粗提取与鉴定1

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,复习巩固:,(1)如何观察DNA和RNA在真核细胞中的分布情况?,(2)真核细胞DNA的主要存在场所?,(3)证明DNA是遗传物质的三个经典实验?,(4)DNA分子双螺旋结构模型的提出者是谁?,(5)DNA分子双螺旋结构模型的主要特点?,1、DNA分子由两条链组成,这两条链按反向平行的方式盘旋成双螺旋结构.,2、DNA分子中的磷酸和脱氧核糖交替连接.排列在外侧,构成基本骨架,碱基排列在内侧.,3、DNA分子两条链上的碱基通过氢键连接成碱基对.,1,专题,5,DNA,和蛋白质技术,课题,1,DNA,的粗提取和鉴定,2,1、你所知道的生物大分子有哪些?,2、如何来提取生物大分子?,3、提取DNA的基本思路是什么?,4、可以将DNA溶解于水和其他物质分离开来的方法吗?,学生活动1:,一、基础知识,3,根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的,？,DNA在,NaCl溶液中的溶解度曲线图,在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。,如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？,当氯化钠的物质的量浓度为 2 molL时，DNA的溶解度最大，浓度为 014 molL时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。,4,1、DNA能溶于酒精溶液吗？,2、,细胞中的其它物质呢？,3、由此你想到了什么?,4、,DNA对酶、高温和洗,涤剂的耐受性,?,学生活动2:,5,二、实验方法及注意事项,（一）实验材料的选取,1,、材料：,鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取,2,3,种实验材料）,2,、原则：,凡是含有,DNA,的生物材料都可以考虑，但选用,DNA,含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大,6,（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液,学生活动3:,1、怎样使鸡血细胞破裂？原理是什么？,2、如果实验材料是植物细胞又该如何处理？,3、加洗涤剂和食盐的作用是什么？,4、提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加,入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的,搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。,如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？,7,（三）去除滤液中的杂质,探究活动4:,1、,此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？,2、,为了纯化提取的DNA需要将滤液作怎样的进一步处理,？,3、,为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质,？,4、,方案二和方案三的原理有什么不同,？,8,（四） DNA的析出与鉴定,学生活动4:,3、如何鉴定DNA分子？应注意什么？,2、纯的DNA应该是什么颜色？,1、怎样使鸡血细胞破裂？原理是什么？,9,1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得）,0.1,g/mL柠檬酸钠100,mL,活鸡鲜血,180mL,500mL烧杯中，玻棒,搅拌,，离心、分离或静置沉淀。,2.,提取DNA。,取血细胞5-10mL20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向,快速搅拌,。,纱布,过滤,：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。,.提取,血,细胞核物质：,.溶解核内的DNA：,滤液2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向,轻缓搅拌,。,三、实验步骤,10,.,析出,含DNA的粘稠物：,.滤取含DNA的粘稠物：,. DNA粘稠物的再溶解：,在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向,轻轻搅拌,，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。,用多层纱布,过滤,，含DNA的粘稠物留在纱布上。,20mL2mol/L的NaCl溶液,步骤含DNA的粘稠物,在,20mL烧杯中,轻缓搅拌,3,min，使尽可能多的DNA溶解在,NaCl溶液。,.过滤含有DNA的NaCl溶液：,用放有两层纱布的漏斗,过滤,步骤所得的溶液，滤液中含有DNA。,11,.提取含有杂质较少的DNA：,步骤所得的滤液体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向,轻缓搅拌,，溶液中（,析出,）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。,3.DNA的鉴定：,加入二苯胺试剂4mL，用玻棒,搅拌,使DNA溶解，沸水浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。,1.共有“,三次过滤，两次析出，七次搅拌,”,2.加入“,两次蒸馏水，,三次NaCl,溶液,，一次酒精,”,三、实验小结,12,四、实验原理拓展介绍。,1.DNA的释放。,DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅拌的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但,释放出来的大量DNA与RNA、蛋白质结合在一起，即释放的不是纯净的DNA，常称为DNA核蛋白,。,2.DNA与蛋白质分离。,在高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解，析出DNA并溶解在高浓度的氯化钠溶液中,3.DNA的析出与获取。,因为,DNA在低浓度（ 0.14mol/L,）的氯化钠溶液中溶解度小，而蛋白质的在其中的溶解度大,。所以在向含DNA的高浓度的氯化钠溶液中加入大量蒸馏水稀释氯化钠溶液，从而使DNA溶解度下降，蛋白质溶解度增高。,13,4.DNA的再溶解。,用高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液再溶解DNA粘稠物。,5.DNA的沉淀和浓缩。,对于除去了蛋白质的DNA的氯化钠溶液，必须再进一步沉淀和浓缩，常用,酒精沉淀法,。即往,含有Na,的DNA溶液，加入体积分数为95%的冷却酒精，混匀后可以使DNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNA丝状物,，悬浮于溶液中。若丝状物较少，可将混合液再放入冰箱中冷却几分钟即可。浓缩后的DNA丝状物可以用玻棒（玻棒有吸附DNA的作用）缓缓旋转的方法卷起。,6.DNA的鉴定。,100,DNA二苯胺 蓝色物,鉴定时蓝色的深浅与溶液中DNA的含量多少有关。,14,方法步骤,加入物质,目的,1,.,制备鸡血细胞液,柠檬酸钠溶液,2,.,提取鸡血细胞细胞核物质,20 m1,蒸馏水,3,.,溶解细胞核内的,DNA,2 m1,L,的,NaCI,溶液,40,mL,4,.,析出含,DNA,的黏稠物,蒸馏水,5,.,滤取含,DNA,的黏稠物,6,.,将,DNA,的黏稠物再溶解,2 mol,L,的,NaCl,溶液,20 mL,7,.,过滤含,DNA,的,NaC,l,溶液,8,.,提取含有杂质较少的,DNA,冷却的,95,的酒精,50 mL,A,:,(1),向试管中加入,0,.,015 mol,L,的,NaCl,溶液,5,mL,(2),加入,DNA,(3)4 mL,二苯胺试剂,9,.,DNA,的鉴定,B,:,(1),向试管中加入,0,.,015mol,L,的,NaCl,溶液,5,mL,(2)4 m,L,二苯胺试剂,15,加入柠檬酸钠溶液的目的是防止血凝固,加速血细胞破裂,溶解,DNA,使,2mol/L的NaCl溶液稀释至0.14mol/L使得DNA最大限度地释出,使含,DNA的黏稠物被留在纱布上,使含,DNA的黏稠物尽可能多的溶解于溶液中,除去含,DNA的滤液中的杂质,提取,DNA,A出现蓝色 B无变化,16,2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 molL和0.14 molL对DNA有何影响?,1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是( )。,A.稀释血液、冲洗样品,B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出,C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量,D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA,答：B,答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出,17,3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成( ),A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色,4.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液,中的上清液?,答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以要除去上清液(含有蛋白质)。,答：D,18,