结核分枝杆菌培养基制备、保存、质量控制

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,培养基制备、保存、质量控制,结核病国家参比室,1,内容,培养基制备需要的仪器,培养基制备需要的试剂,培养基制备步骤和方法,培养基制备注意事项,2,培养基制备需要的仪器、耗材,l,天平,(,灵敏度为,0.01,g),、,称量匙或勺、称量纸,l,高压灭菌器或电炉,l,蒸汽凝固器,l,PH,计,l,简易分装装置,l,培养管（螺旋盖）,l,打蛋器,l,广口瓶、锥形瓶,l,镊子,l,消毒纱布、漏斗（过滤混匀的鸡蛋）,l,水浴,3,酸性罗氏,（,Lowenstein-Jensen）,培养基,天门冬素 3.6,g,或谷氨酸钠（纯度99%以上）7.2,g,KH,2,PO,4,14.0g,MgSO4.7H,2,O 0.24g,枸橼酸镁 0.6,g,丙三醇 12,ml,蒸馏水 600,ml,新鲜鸡卵液 1000,ml,2%,孔雀绿 20,ml,培 养 基 组 份,4,培养基制备需要的试剂,2%,孔雀绿溶液，单独配制,n,孔雀绿染料,2,g,灭菌去离子水,100,ml,使用无菌技术溶解染料于灭菌去离子水中（放置于,37,C,温箱中小时）或者在水浴中加热。配制好的溶液储存于深色瓶中。此溶液长时间放置并不稳定，如果发生沉淀，应丢弃并重新配制。,5,培养基制备需要的试剂,l,鸡蛋应该新鲜（不超过天），母鸡喂养时饲料不应使用抗生,素。选择中等大小的鸡蛋，蛋白、蛋黄均衡的，即平均每升鸡蛋大约个。,6,培养基使用的注意事项：,保存：,4,、密闭、直立。,1,个月内使用。,使用前恢复至室温，并检查污染状况。,在斜面的背面标注痰标本号、病人姓名、接种日期。,每份痰标本接种,2,支培养基。,7,培养基制备步骤和方法,清洁、消毒桌面。,用肥皂水清洁鸡蛋，并用,70%,乙醇擦洗，晾干。,鸡蛋打入灭菌的容器内，控制新鲜度。,将整个鸡蛋转入容器内进行匀化,通过无菌的棉纱布过滤。,加入盐溶液。,加入孔雀绿。,缓慢混合所有的成分，避免气泡、混匀。,在培养管中分装,6-8,ml,液体。,8,培养基制备步骤和方法,将试管放在架子上，并保持足够的倾斜度，放在蒸汽凝固器中,85,C 50,分钟。,将管子从蒸汽凝固器，并作标记。,管子到达室温时旋紧螺旋盖（否则冷凝将会产生更多的水）。,将培养管直立放置于冰箱中，最好放在塑料袋或者容器内。,记录批号的信息（看下边信息）。,9,培养基制备注意事项,培养基制备最好在专用“培养基制备间”内进行，制备培养基时应有相应制作过程的记录。,培养基,制备前“培养基制备间”的空气、台面等应进行消毒。,制备,培养基的所有物品用具应高压灭菌。,10,培养基制备注意事项,无菌试验后，虽然没有发现有可见菌落出现，但培养基已经变蓝色或变黄色，与蓝绿色或黄绿色有明显区别时，应视为污染弃去。,每批培养基应作无菌试验。,11,质量控制内容,颜色,质地,湿度,匀质性,无菌性,敏感性,12,颜色,同一批制作的培养基如果呈现不同的颜色可能是由于混匀得不好或者培养管中出现金属沉渣。若颜色为非常深的绿色可能是由于孔雀绿过多或者,PH,值太低（呈酸性）。黄色的培养基表明孔雀绿质量不好或者,PH,值太高（呈碱性）。凝固的培养基颜色变浅还可能是由于过高的温度所致。,13,质地,如果培养基液化或者很容易碎裂，可能是凝固温度太低了。可以随机抽取一批培养基中的,1-2,支培养管向手上敲打检测。质地较差的培养基不适合于培养接种。,14,湿度,培养管的底部应该有一些凝固水。然而，过多的水表明在凝固后过早的将螺旋盖旋紧或者培养基的成分不标准。当培养管移动时培养基应该不能够转动。,15,匀质性,如果凝固过程中培养基中有小泡，可能是由于培养基凝固温度过高，质量受到了影响。培养基中出现了块状表明匀质性较差。,16,无菌性,每批新制作的培养基要进行无菌试验。,36,C,孵育,2,天后应该没有细菌生长。,17,培养基保存,为了避免剩余过多过期的培养基，培养基应该储存在非常洁净的、有一定湿度的地方，最好是在,4,C,冰箱内，,保存期限不超过,2,个月。,标记应该显示：,l,培养基的名称,l,制作者的名称（实验室标示）,l,批号或者制作日期,l,效期（可以用于接种的最后期限）,储存条件（避光、,2-8,C,）,18,培养基运输,培养管可以在环境温度中运输，但要确保不受阳光的照射，不要过热或者过于干燥。,19,