HIV抗体初筛试验讲述

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,HIV,抗体筛查试验,山西医科大学第二医院检验科 郭先锋,HIV,抗体检测的目的和要点,目的,诊断 血液筛查 监测,要点,根据目的选择检测方法及检测策略,!,严格遵守实验室,SOP,筛查试验阳性,需做确证试验,筛查试验阴性,不应做确认试验,筛查及确证试验均应做好咨询工作,HIV,抗体筛查试验,试剂,储存温度 效期,样品,血清 血浆 全血,方法,酶联免疫吸附试验（,ELISA,化学发光或免疫荧光实验,快速检测,(RT),及其它检测试验,明胶颗粒凝集试验 （,PA,）,免疫渗滤试验,免疫层析试验,免疫胶体金法（硒）,免疫胶体金法,阴性,质控区（,C,）出现红色反应线,阳性,质控区（,C,）出现红色反应线,检测区（,T,）出现红色反应线,无效,质控区 （,C,）未出现红色反应线,HIV,抗体,筛查,试验,HIV,抗体,筛查,试验,酶联免疫吸附试验（,ELISA,）,方法类型,双抗原夹心法测抗体,双抗体夹心法测抗原,捕获法测抗体,间接法测抗体,竞争法测抗原,抗体,用于检测,HIV,抗体的,ELISA,法,第一代：使用,HIV,全病毒裂解物为抗原，应用,间接法,原理检测,HIV,抗体。如日本富士公司生产的,HIV-PA,试剂。,第二代：使用在细菌或真菌中表达的人工重组或化学合成多肽,HIV,抗原，应用,间接法,原理检测,HIV,抗体。基因重组通常易于在培养基中生产大量同源性抗原，产品为单一目的基因而非多样性抗原混合，,特异性,高于第一代试剂。,用于检测,HIV,抗体的,ELISA,法,第三代：使用合成多肽,HIV,抗原（少数用重组抗原），应用,双抗原夹心法,原理检测,HIV,抗体。由于标记,HIV,抗原可同时检测血清中,HIV-1 IgG,、,IgM,、,IgA,抗体，此类试剂的,敏感性和特异性,均优于标记抗人免疫球蛋白的间接法。,高纯度的HIV-1/-2型抗原,待检抗体,酶标记的HIV-1/-2型抗原,用于检测,HIV,抗体的,ELISA,法,第四代,此类试剂在第三代试剂盒基础上，将针对,P24,抗原的抗体与,HIV-1,抗原一起包被固相载体，可同时检测,HIV-1 IgG,、,IgM,、,IgA,抗体和,P24,抗原。增加了敏感性和特异性,检测,HIV,抗体的,ELISA,试剂,试剂种类,必须使用经国家食品药品监督管理局注册批准，批批检合格的,HIV,抗体检测试剂,使用在有效期内且保存条件符合要求的试剂,存放试剂的冰箱温度,2-8,，使用前要放置室温平衡,检测,HIV,抗体的,ELISA,试剂,完整的,ELISA,试剂盒包含以下各组分,已包被抗原或抗体的固相载体,酶标记的抗原或抗体 酶的底物 阴性对照品和阳性对照品,定性测定,标本（和结合物）的稀释液 洗涤液 酶反应终止液,ELISA,检测试剂,固相载体,固相载体材质,聚苯乙烯,固相载体形状,微量滴定板,检测,HIV,抗体的,ELISA,试剂,结合物（酶标记的抗体或抗原）,辣根过氧化物酶,(horseradish peroxidase, HRP),底物,四甲基联苯胺,(TMB),反应后显蓝色，终止后呈黄色，最适吸收波长为,450nm,检测,HIV,抗体的,ELISA,试剂,洗涤液,常用含,0.05%,吐温,20,磷酸缓冲盐水,终止液,HRP,常用强酸，最常见,2mol/L,硫酸,ELISA,试验,标本的采取和保存,加样,孵育,洗涤,显色与终止,酶标仪测定,标本的采取和保存,避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，以,HRP,为标记 的,ELISA,测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色,避免污染,血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性,HRP,，也会产生假阳性反应,保存,一周内,2,8,一周以上,- 20,标本送检,信息,姓 名,外螺旋盖（带胶垫）血清管,接收样本时，必须填写样本接收记录单,建立,样本的唯一性编码,登记有关信息,受检者姓名、性别、年龄、职业、,送检单位、人群类别、检验结果、,送检日期、报告日期,样本的接收,样本的接收,认真核对样本与送检单提供的信息是否相符、样本有无破损和渗漏。如发现渗漏的，立即将尚存的样本移出，对样本管及包装进行消毒，同时报告主管领导和有关专家,检查样本的物理性状。并做好记录。如果样本不符合试验的要求，应将样本安全废弃，同时立即通知送样人,样本的接收,实验室工作人员在打开样本容器时，须小心，防止内容物崩溅。样本处理时，须,穿戴防护衣，,在生物安全柜中操作，同时应戴一次性口罩、防护眼镜，防止皮肤、粘膜污染。,用后的包装要进行消毒,检测方法,必须按照试剂盒说明书（,sop,）中规定的要求进行操作,包括进行检测的实验条件如阳性对照和阴性对照的设置、试剂、标本加样量、孵育时间、反应温度、洗涤程序和次数等,标本质量,冷冻样品实验前需解冻并混匀，血清或血浆样品如溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况，可能会对试验产生影响,加样,移液器,(,包括单头和多头移液器,),是实验室中重要的基本器具，一年至少校准一次,准确加到微孔板底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡，加入后及时放入孵箱,检测方法,检测方法,孵育,孵育的温度要控制好，时间要掌握好，严格按照说明书操作,注意封板，避免蒸发,反应板不宜叠放，反应板至水面下的,1/3,处，以保证各板的温度都能迅速平衡，保证温度的均一性,检测方法,洗涤,各种试剂盒的洗液不要混用。按要求稀释，洗液如果结晶应待其融解后配制,检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象,按孔的大小调节好洗液的量,孔内液体被洗板机吸收得越干净洗涤效果更好，手工洗板防止洗液在孔内形成气泡,检测方法,显色与终止,显色剂不用过期显色剂,加终止液时应避免产生气泡。如产生较多气泡，则会导致假阳性,酶标仪测定,每天（每次）,核对酶标仪滤光片波长,查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象,每周,清洁仪器表面，保护光学零件，不沾灰尘,每月,洗涤时检查各孔是否与相应的冲洗头对位良好，负压是否符合规定要求，这是保证各孔洗涤均衡一致的前提,ELISA,洗板机与酶标仪,(,推荐方法,),结果报告,分析结果及发出检测报告前，应在,试剂盒和外部质控品结果满足要求的前提下,，对样品进行分析，试剂盒及外部质控品不合格，样品需要重新检测，复核人对检测结果进行仔细复核并对结果提出结论，签发人对试验结论进行审核、分析、总结、签字,结果报告,筛查阴性样本，出具具有法律效用的正式报告,血清建议保存,1-2,个月,筛查阳性样本，及时送确证实验室。必要时可出具,HIV,抗体待复查报告,筛查实验室不得保存阳性样本，需转运至确认实验室,筛查实验室不可以出具,HIV,抗体阳性报告,结束语,严谨的设计，优质的试剂，正确的操作和良好的仪器是保证,ELISA,必要条件,严格遵照规定操作，必能得出准确的结果,谢谢！,人有了知识，就会具备各种分析能力，,明辨是非的能力。,所以我们要勤恳读书，广泛阅读，,古人说“书中自有黄金屋。,”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，,培养逻辑思维能力；,通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平，,培养文学情趣；,通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。,有许多书籍还能培养我们的道德情操，,给我们巨大的精神力量，,鼓舞我们前进,。,