2016细胞毒理学实验细胞遗传毒性检测

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,Shandong Normal University,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,*,细胞遗传毒性检测,1-,小,鼠骨髓细胞染色体制备,及,有丝分裂指数的,测定,2-,微核的显示,目的要求,掌握小鼠骨髓细胞染色体的制备方法,.,了解,有丝分裂指数,的,计算,。,了解微核的显示方法及其意义。,实验原理,骨髓细胞具有高度的分裂活性，经秋水仙素或秋水酰胺处理后，使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理、固定、滴片、染色等步骤，可制作较好的骨髓细胞的染色体标本。,实验用品,1,器材：解剖器具、注射器、离心机、离心管、恒温水浴箱、载玻片、酒精灯等,.,2,试剂,0.1%,秋水仙素溶液、,Carnoy,固定液（甲醇：冰醋酸,3,：,1;,甲醇：冰醋酸,1,：,1,）、,0.075 mol / L KCI,溶液、,Giemsa,染液、,0.9%,生理盐水等。,3,材料：小鼠,实验设计,将小鼠随机,分成两组,实验组,实验前,1-2,小时,大剂量秋水仙素,CHR,显示,微核显示,对照组,实验前,1-2,小时,0.5%,秋水仙素,0.1ml/,只,CHR,显示,微核显示,方法与步骤,注射量随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。,引颈处死或断头处死小鼠。,取出小鼠的前肢骨和后肢骨，注意不要将股骨剪断，否则容易造成骨髓细胞的流失。,滴加适量生理盐水进行冲洗，并仔细地将皮肤、肌肉等组织清除干净。,实验取材,CHR,显示,将四肢骨剪碎,于低渗液中,微核显示,将四肢骨剪碎,于生理盐水中,加入少量低渗液，用剪刀将骨充分剪碎，并用吸管吹打，使骨髓细胞全部释放出来。,用滤网将获得的液体过滤到离心管中，加低渗液至,8ml,左右室温下静置,20-30,分钟，进行低渗。低渗结束后，加入,1mlCarnoy,固定液进行预固定（,5,分钟左右），轻轻混匀后，离心。,1200,转,/,分，离心,5,分钟，弃上清，加入固定液,6ml,，混匀后，室温固定,30,分钟，再次离心去上清，重复固定一次，离心后，根据沉淀的体积向沉淀中加入,0.5-1ml,预冷的固定液（甲醇：冰醋酸,=1,：,1,），将细胞重悬。,预冷的玻片,滴片后，须将片子晾干，再滴加适量,Giemsa,染液染色,10-15,分钟，弃去染液，水洗，镜检。,结果显示,有丝分裂指数（,mitoticindex,）：某一分裂组织或细胞群中，处于有丝分裂,M,期的细胞数占其总细胞数的百分数。,分裂相细胞数,有丝分裂指数,=,细胞总数,实验组,对照组,有丝分裂指数,平均值,取秋水仙素不同剂量组染色体制片，各随机选取,3-5,个视野，统计各视野内的有丝分裂指数，并可对结果进行统计学分析（独立样本,T,检验），比较两组数据有无显著性差异。,小鼠骨髓细胞微核显示,实验注意事项,小鼠解剖残渣不要放入下水道。,实验结束后，请将实验用小鼠及垃圾放入垃圾袋，值日生务必带走。,实验中使用的过滤细胞的尼龙滤网请勿丢弃，实验完毕后放入白瓷盘并用玻璃漏斗或试剂瓶压住。,