Elecsys检测HBV血清学指标在疾病诊断和管理中的应用

,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,Elecsys,检测乙型肝炎血清学指标,在疾病诊断和管理中的应用,机会：,在中国：,HBsAg,携带者超过,1.2,亿！慢性乙肝患者约,3000,万！每年报告乙肝新发病例数约,50,万！,超过,80,的乙肝,2,对半检测是通过,ELISA,方法完成！,两对半检测的化学发光市场的,NO.1,是雅培！,乙型肝炎现状,什么是乙肝病毒,不同形态的,每一种病毒颗粒都是由一个核酸芯子和一个蛋白质衣壳所组成,病毒包含的核酸要么是,DNA,分子，要么是,RNA,分子。根据核酸的不同，病毒可以分为,DNA,类病毒（例如乙肝,HBV,）和,RNA,类病毒（例如丙肝,HCV,，艾滋病病毒,HIV,）,乙肝病毒结构,电化学发光（,ECL,）检测乙肝标志物,检测项目,检测原理,HBsAg,双抗体夹心法,HbsAg,Confirmatory Te,st,表面抗原确认实验,Anti-,HBs,双抗体夹心法,HBeAg,双抗体夹心法,Anti-,HBe,竞争法,Anti-,HBc,竞争法,Anti-,HBc,IgM,U,链捕获,Elecsys,Anti-HBs,- Test,principle,-,夹心法,Cutoff Formula = Cal 1 x 0.47 + Cal 2 (E170),= Cal 1 x 0.7 + Cal 2 (E2010),COI = Sample / Cutoff,Elecsys,Anti-HBc,-,Assay,principle,-,竞争法,Cutoff Formula = Cal 1 + 0.65 x Cal 2,COI = Sample / Cutoff,Elecsys,Anti-HBc,IgM,-,Assay,principle,-,捕获法,expand testing market,易患者,早期检测,监测,治疗,诊断,预防,detection,test / drug,test,test,test,test,test,提供健康信息,:,患病风险,健康状况,药物选择,治疗效果,应用一：罗氏集团 罗氏诊断与罗氏制药 提供诊断治疗监控的一体化解决方案,罗氏制药,中枢神经系统,传染性疾病,肿瘤学，,病毒学,心血管疾病,骨质疏松药物,发炎性和自体免疫疾病,皮肤病学,代谢紊乱,移植,Roche,肝病检测相关产品,PCR,免疫,分子诊断,临床生化,Roche,乙肝检测,/,治疗相关产品,血清标志物诊断,Immunoassays (Elecsys),PCR (Amplicor/TaqMan),治疗,Pegasys,Roferon-A,检测,PCR (Amplicor/TaqMan),基因分型检测,(Lightcycler,科研项目,),应用二：溯源至国际标准,HBsAg II,1st WHO Reference Standard 1977,1000,800,600,400,200,0,0,200,400,600,800,1000,Elecsys,Anti-HBsbased on WHO reference standard IU/L,Elecsys,Anti-HBsbased on Master calibrators IU/L,Passing/Bablok:y = 0.19 + 0.997xr = 1.00,Linear regression:y = 0.57 + 0.99x,应用二：溯源至国际标准,Elecsys, Anti-HBs,Standarduzation against WHO reference material,应用三：,Elecsys HBsAg,先进的原理、高灵敏度与高特异性的完美结合,如何实现：使用两种不同的抗体分别进行捕获和标记,钌标记的寡聚,HBs,抗体，多价结合，可放大信号，提高灵敏度。,生物素标记的单克隆捕捉抗体，排除了干扰，保证卓越的特异性。,临床特异性即阴性样本符合率；,临床特异性越高，假阳性率越低。,在欧洲多个评估中心对,5892,个标本的检测中，,Elecsys HBsAg,显示出优异的,99.94%,的临床特异性,应用三：,Elecsys HBsAg,高灵敏度与高特异性的完美结合,Weber et al. Improved detection of hepatitis B virus surface antigen by a new rapid automated assay. J Clin Microbiol. 1999,37,:2639-47.,和雅培的测试相比，,Elecsys HBsAg,具有更优异的特异性和灵敏度。,(published data),“,Elecsys HBsAg,完美结合了高灵敏度（,100,）与高特异性（,100,），尽管这两者的判断标准是相互对立的。”,NPV,：阴性预测值,PPV,：阳性预测值,应用三：,Elecsys HBsAg,高灵敏度与高特异性的完美结合,临床灵敏度即阳性检出率；,临床灵敏度越高，假阴性率越低,Elecsys HBsAg,相比于,DPC Immulite,和,Abbott Axsym, IMx, Auszyme,具有更优异的灵敏度,Assay I1: DPC Immulite 2000,Assay I2: DPC Immulite,Assay A1: Abbott Axsym,Assay A2: Abbott IMx,Assay A3: Abbott,Auszyme,应用三：,Elecsys HBsAg,高灵敏度与高特异性的完美结合,高灵敏度可用于感染的早期检测,Cut-off,COI: Cut Off Index,Assay A1: Abbott Axsym,Elecsys HBsAg,相对,Abbott Axsym,显示出更优异的,血清转化,灵敏度，能更早地检测出被感染的病人。,罗氏诊断内部实验结果。,应用三：,Elecsys HBsAg,高灵敏度与高特异性的完美结合,高灵敏度可用于感染的早期检测,Elecsys HBsAg,与其他品牌的检测相比，其差异是显著的,（,p 0.05,COI (preliminary),COI,COI,IU/mL,1,113A114,1398.0,1303.6,206.8,106.2,pos,2,P120L,10.7,7.8,239.3,122.9,pos,3,R122I,130.1,128.8,86.6,24.9,pos,4,R122T,658.5,617.0,171.7,108.3,pos,5,E122I,164.7,130.4,76.6,12.9,pos,6,T123N,2595,2088.1,1.8,33.7,pos,7,122RA123,127.0,141.5,2,5.36,pos,8,122RGA124,7.9,10,1.92,10.6,pos,9,T131I,1450.5,1337.2,220.5,111.3,pos,10,T131P,1221.6,1140.5,208.1,88.5,pos,11,Y134S,1109.2,1052.4,208.1,96.7,pos,12,K141E,9.3,6.6,159.0,30.9,pos,13,P142L,929.9,292.1,238.2,156.6,pos,14,D144G,157.3,152.4,60.3,6.3,pos,15,P142L / G145R,28.5,0.7,111.2,17.0,nd,16,C147S,28.7,5.5,289.1,45.9,pos,17,C147T, C149T,4.3,1.2,70.4,5.0,pos,18,E164D,1664.9,1551.7,192.4,117.5,pos,19,S174N,2669.0,2105.3,288.9,246.9,pos,Abbott Axsym,在,123,位点突变的检测能力很差,al. J,Clin,Microbiol,2004, 42: 2861-65,Levicnik-Stezinar S: Clin. Lab. 2004, 50:49-51,.,Elecsys HBsAg,能检测出所有的,7,个突变标本，而,Assay E, O,和,V,都有部分样本漏检,A1 : Abbott Axsym,E: Behring Enzygnost;,V: Ortho Vitros,O: Microtiterplate assay,应用五：,Elecsys HBsAg,检测突变的能力,Elecsys HBsAg,检测天然,HBsAg,突变样本,应用五：,Elecsys HBsAg,检测突变的能力,Elecsys HBsAg,的检测突变的能力综述,Elecsys HBsAg,能检测重组及,天然,的各种突变样品，然而有些厂家的试剂则不能检测,123,（,Abbott,）、,143,（,DPC,）位点的突变。,不同的,HBsAg,免疫检测方法对检测不同,HBsAg,突变的能力及灵敏度不同。,Elecsys,具有最全面的检测能力,灵敏地识别病毒变异,病毒出现新的变异株时，也能准确的检测出来,。,应用六：,Elecsys Anti-HBs,定量检测、精密度高,从低浓度高浓度均具有极高的精密度,提供准确可靠的疫苗接种前和接种后的保护性抗体量化指标,指示免疫应答,Anti,HBS(IU/l),接种的要求,100007,年后,第一,第二,第三次接种后,Elecsys,Anti-,HBs,与其他,Anti-,HBs,试剂检测后的结果,Elecsys,Anti-,HBs,用于监测免疫应答的疗效,Correlation to comparison assay (2),10000,1000,100,10,1,0,0,1,10,100,1000,10000,Vaccinated persons (n = 113),Elecsys,Anti-HBs IU/L,Test B IU/L,n = 0,n = 109,n = 4,n = 0,具有非常好的相关性,Elecsys Anti-HBs,疫苗接种后检测结果同,AxSym,比较,表面抗原存在不同的亚型， 所以抗体具备多样性。使用不同的厂家的,试剂检测,Anti,Hbs,的结果会有一定的差异。,各家试剂中采用的表面抗原的材料（来源于血浆或者基因工程），抗原,的亚型以及处理程序等都很大程度的影响着,Anti-HBs,的结果,血清中抗体的复杂性： 感染的患者的体内会存在着抗,a,d or y,等抗原,决定簇的特异抗体，接种的个体产生的抗体的构成依赖于疫苗的成份,罗氏,Anti-HBs,试剂中使用的,HBsAg,是来源于人类血清的纯化的含有各种,亚型的,HBsAg,国际标准 阳性,10U/l,； 通常认为,100,U/l,才具备保护能力。,Elecsys Anti-HBs,校准品：,PEI-U,(Paul-Erlich Institute Unit),精密度：,CV% 4%,测定范围：,COI,PEI-U/ml,线性范围,1.5 400 0.3 100,最高点,2000 1000,Hook 300 150000,应用七：,Elecsys,HBeAg,可定量检测,提供临床监控最重要的量化指标,可用于急性乙型肝炎早期指标；乙型肝炎病毒感染的病人随访；高度传染性的标志；治疗监控,400 COI,100 U/mL,2000 COI,1000 U/mL,300 COI,150000 U/mL,检出灵敏度及特异性都极佳,Elecsys HBeAg,测定结果的计算,COI,样本, 400,用稀释液作,1,：,100,稀释后再测,按公式计算,U/ml,X100,报告结果,HBeAg (U/mL) = (,样本,COI HBeAg,质控,1COI) x 0.227,通过样本的稀释和,COI,与,PEI-U/mL,的换算,Elecsys HBeAg,测定可报告定量的结果,HBeAg,的值对于慢性乙肝抗病毒治疗的应用价值,HBeAg,的血清学转换是被认为是慢性乙肝治疗的最重要的短期目标,在治疗中和治疗前,HBeAg,的浓度对于抗病毒治疗的预示价值要超过,HBV DNA,对于治疗后的,0,4,周，,HBeAg,水平的下降（,50,),的预示意义是独立的,预示意义要远超,HBV DNA,HBV DNA,快速下降,(90%),也有可能最终不能,发生,HBeAg,转阴,在治疗中,HBV,DNA,的下降与,HBeAg,血清转换不一定一致,HBeAg,检测提供治疗监控的丰富信息,在治疗后,72,周时的血清转换率与,HBeAg,的基线值呈独立相关,基线值越低，血清转换几率越高,HBeAg,100PEIU,/ml, 72,周时只有,5%,的转阴率,高临床特异性和出色的辨别能力降低复测率。,在,1354,例献血者样本中，临床特异性达到,99.8%,。,应用特殊的,DTT,还原剂进行预处理，消除了由于,IgA,或,IgM,相关分子引起的非特异反应。,应用八：,Elecsys Anti-HBc,高特异性降低复测率,Elecsys,检测不受类风湿因子干扰，优于其他竞争对手,更少的假阳性，降低复测率,应用九：,Elecsys Anti-HBc IgM,高特异性降低复测率,应用十：,核酸检测技术在,HBV,中的应用,检测,HBVDNA,是判断乙肝病毒,有无复制的,“,金标准,”,乙肝,“,二对半,”,或,“,乙肝六项,”,已能反映乙肝病毒有无复制、有无传染性，,为何还要检测,HBVDNA,呢,?,1,、,“,小三阳,”,，乙肝病毒进入非复制状态，传染性消失或很低，病情趋于稳定。但实际情况是有时病人的转氨酶仍 然反复波动，甚至出现黄疽，经检测,HBVDNA,阳性，可以肯 定，病毒仍复制活跃、病情不稳定与乙肝病毒活跃有关。,“,小三阳,”,乙肝因其,HBe,Ag,阴性，被医生称为,“,HBeAg,阴性肝炎,”,，也称,“,异型乙肝炎,”,。对此型乙肝不能掉以轻心，病情可能更重。,2,、在检测病人,“,二对半,”,时，仅发现其中,1,项阳性，如,HBsAg,阳性或单一的抗,HBc,阳性,，这并不能说明病人体内的病毒有无复制，必,需检测,HBVDNA,，一旦阳性 、就可肯定仍有病毒复制、也有传染性。,应用十：,核酸检测技术在,HBV,中的应用,应用十：,核酸检测技术在,HBV,中的应用,3,、有一些肝炎病人的,“,二对半,”,5,项全部阴性，甚至甲、丙、丁、戊型,肝炎病毒标志物,也是,阴性,，但病人的转氨酶却很高，有黄疽，肝功能损伤明显，通过测,HBVDNA,后，可能发现为阳性，就此可断定这种肝炎叫,“,慢性隐匿性 乙肝,”,，在不明原因的肝炎中，此类型肝炎约占,30,一,60,。,4,、有的乙肝病人竟被检测到抗一,HBs,，这是保护性抗体，它的阳性说明感染结 束，但为什么病人的病情依旧，并无好转迹象,?,如,HBVDNA,阳性，问题又解决了，这 叫,“,抗,HBs,阳性乙肝,”,，也是病毒变异的结果。,敏感性高,特异性强,指示病毒复制,可用于窗口期的检查,核酸定量动态检测可用于疗效观察,应用十：,核酸检测技术在,HBV,中的应用,核酸检测的优越性,准,确,快,速,全,能,灵敏,通量,自,动,LightCycler, 480,LightCycler,2.,0,罗氏肝炎检测令诊断及监测结果具有高度安全性,Back Up,HBsAg,/ Anti-,HBs,同时出现的探讨,这个发现从上个世纪,70,年代就有相关研究在不停的探讨。,最早检测肝炎血清学标记物使用,RIA,技术， 这种技术较,ELISA,要敏感些。,进入,80,年代，更多的客户使用,ELISA,方法,检出几率少些。,90,年代后， 随着新的技术的出现，研究和探讨产生机制和意义一直在进行。,病人处于,HBV,感染的恢复期，病,人体内存在,HBsAg-Anti-HBs,的免,疫复合物,两种,HBV,亚型感染，一种亚型已,经产生抗体，另外一种还没有,（,HBsAg,Ad/ Anti-,HBs,Ay),存在,HBV,的突变,常见于：,1,、 新生儿母婴感染,2,、 肝移植的患者,IFN,治疗出现,HBsAb,血清转,换,因,S,基因变异,而未能清除,HBsAg,；,疫苗接种，有正常的,HBsAb,应答,感染,决定族变异的免疫,逃避变异株,HBsAg,/ Anti-,HBs,同时出现的探讨,RIA,ELISA,Now,Gastroenterology 1987,；,93,：,675,80,（,RIA,）,Concurrence : 73 / 228 (32%),主要结论：,在慢性活动性肝炎的患者中出现的比例要高于急性肝炎和稳定期以及携带者；,研究了,30,例具体情况。其中,25,例属于不同亚型感染；,1,例是存在免疫复合物；,分析和病毒复制和炎症有关,HBsAg,/ Anti-,HBs,同时出现的探讨,HBsAg/Anti-HBs,同时出现的发生几率和意义探讨,1,Singore Medical J 1996;Vol 37; 150-52,Concurrent :234/1132 20.6%,主要结论：,同时发生的患者和非组在,HBeAg,的状态和,DNA,的水平方面没有明显差异；,认为是一种常见的血清学模式；,以不同亚型感染者为主。,HBsAg,/ Anti-,HBs,同时出现的探讨,HBsAg/Anti-HBs,同时出现的发生几率和意义探讨,2,Clinical infectious disease 2007;44;1161-9,（,China,）,Concurrence : 5%,主要结论：,分析了,411,例慢性肝炎患者， 发现,20,例同时阳性的结果（该状态稳定,12,月以上）；,411,例患者发现了,13,例发生了基因变异；,对于是否同时存在,Anti-,HBs,的两组，对于突变没有明显差异,标本中纯化的,anti-,HBs,可以和,HBsAg,有反应，但是相比较于自然产生的抗体，其活性很弱,由于亚型不同，并不能中和体内同时存在的抗原,没有发现免疫复合物,HBsAg,/ Anti-,HBs,同时出现的探讨,HBsAg/Anti-HBs,同时出现的发生几率和意义探讨,3,共识：,产生原因：,不同亚型,HBV,感染,基因突变,免疫复合物,产生的抗体是没有保护作用的,抗体的亲和力比较差,不似接种后产生的抗体可以中和各种,HBsAg,在慢性患者中发生的几率要高于携带者,HBsAg,/ Anti-,HBs,同时出现的探讨,结论,分歧,:,Concurrence,的患者中出现,Pre-s,和,s,基因,突变的几率要高于对照组。,不同亚型的感染是同次感染还是顺序感,染和,DNA,水平的关系,与药物治疗的应答的关系,We Innovate Healthcare,