分析化学实验荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验二十八,荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量,S,2,S,1,S,0,T,1,吸,收,发,射,荧,光,发,射,磷,光,系间跨越,3,内转换,振动弛豫,能,量,l,2,l,1,l,3,外转换,l,2,T,2,内转换,振动弛豫,一、实验目的,1,掌握荧光分光光度法的基本原理,2,学会使用,F- 4500,荧光分光光度计,二、方法原理,利用荧光分析方法，测定能产生荧光的物质含量，对不能产生荧光的物质，可以利用某些具有能发生荧光基团的有机试剂，与非荧光物质形成较纯的荧光化合物，然后进行测定，是一种高灵敏度的分析方法。,定性依据：,激发光光谱,荧光光谱,定量依据：,当,l c0.05,时,将括号项近似处理后：,F,= 2.3,I,0,l c,=,Kc,定量方法,标准曲线法：,配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度,.,比较法：,在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较,.,荧光仪器组成：,激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。,特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。,三、实验内容,（一）硫酸奎宁激发光谱的绘制,用,0.05,mol,/L,硫酸溶液为参比溶液，用,10 mg/L,的硫酸奎宁溶液作为测定液。,固定荧光波长为,443,nm,，从,300,nm,到,400,nm,，每间隔,10,nm,测定一次荧光相对强度。以波长为横坐标，荧光相对强度为纵坐标，在坐标纸上绘出激发光谱图，指出最大激发波长,max,为,345,nm,。,（二）硫酸奎宁荧光光谱的绘制,用,10 mg/L,的硫酸奎宁溶液作为测定液。,从,380,nm,到,600,nm,，每隔,20,nm,测定一次荧光相对强度。以波长为横坐标，荧光相对强度为纵坐标，在坐标纸上绘出荧光光谱图，指出最大发射波长,max,为,445,nm,。,（三）直接比较法测定测定硫酸奎宁含量,式中：,C,X,待测液的浓度；,C,S,标准液的浓度；,F,X,待测液的荧光强度,F,S,标准液的荧光强度。,