实验九、细菌的荚膜染色

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,微生物学实验,实验九、细菌的荚膜染色法,实验的目的要求,学习并掌握荚膜染色法,荚膜染色的基本原理,荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。,由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色，而且可溶于水，易在用水冲洗时被洗去。所以通常用衬托法染色,使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。,实验材料,细菌培养物,胶质芽孢菌,2,天无氮培养基琼脂斜面培养物。,试剂,绘图墨水,1%,甲基紫水溶液,6%,葡萄糖水溶液,20%,硫酸铜水溶液,甲醇,香柏油,二甲苯,仪器和用具,载玻片,盖玻片,滤纸,显微镜,镜头纸,方法,湿,墨水法,干,墨水法,Anthony,氏法,湿墨水法,制备细菌墨水混合液,加盖玻片,镜检,制备细菌墨水混合液,1、滴绘图墨水,2、制备混合液,绘图墨水,滴1滴绘图墨水在载玻,片中央,挑取少量菌苔,与生理盐水混,合均匀涂布,加盖玻片,在盖玻片上放一张滤纸，轻轻按压吸干多余混合液,1、加盖玻片,将盖玻片一端浸泡在细菌墨水混合液中缓缓盖上盖玻片,2、吸去多余液体,镜检,1、镜检,用低倍镜高倍镜观察,制片置显微镜载物台上,2、结果：,背景灰色，菌体较暗，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。,干墨水法,制备细菌墨水混合液,涂片,固定,染色,镜检,制备细菌墨水混合液,1、滴生理盐水,2、涂片,6%葡萄糖,在载玻片一,端,滴一滴6%,葡萄糖水,挑取少量菌苔,混合均匀,涂片,1、先将推片一,端放在混合液上,2、将推片向另,一端平行滑动,3、使混合液,均匀铺成薄层,4、干燥,室温自然晾干,固定,1、滴甲醇,甲醇,滴甲醇浸没涂片1分钟,2、固定,倾去甲醇在酒精灯上方文火固定,染色,1、滴甲基紫染液,2、水洗,不要直接冲菌膜,可从玻片反面冲洗,甲基紫染液,甲基紫染液染色1-2分钟,镜检,1、镜检,用低倍镜高倍镜观察,制片置显微镜载物台上,2、结果：,背景灰色，菌体紫色，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。,Anthony氏法,制,片,固定,染色,镜检,制片、固定,1、滴生理盐水,2、涂片,3、干燥固定,生理盐水,滴半滴生理,盐水在载玻,片中央,挑取少量菌苔,与生理盐,水混合均,匀涂布,室温自然晾干,染色,1、滴孔结晶紫染液,3、脱色,结晶紫染液,滴结晶紫染,色2分钟,20%CuSO,4,滴加20%,CuSO,4,洗片,镜检,1、镜检,用低倍镜高倍镜观察,制片置显微镜载物台上,2、结果：,背景灰色，菌体深紫色，菌体周围荚膜淡紫色。,