实验八 细菌鉴定中常用的生化实验

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验八 细菌鉴定中常用的生化实验,1,一、实验目的,掌握糖发酵试验、淀粉实验、吲哚实验、M.R.及V.P的原理及方法。,掌握以上实验的用途。,2,二、实验原理,淀粉实验,糖发酵实验,发酵后产生的有机酸： 乳酸、醋酸、丙酸等,（,溴甲酚紫,变色范围pH5.26.8, pH6.8紫色）,发酵后产生的气体： 甲烷、氢、二氧化碳等,（杜氏小管内有气泡，产气漂浮）,3,糖发酵试验现象,4,二、实验原理,M.R.及V.P实验,甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、,乳酸等。当细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基,的甲基红指示剂由橘黄色变为红色。,5,二、实验原理,M.R.及V.P实验,VP试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力，如丙酮酸。丙酮酸经缩合、脱羧后生成乙酰甲基甲醇，此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。,6,二、实验原理,吲哚实验,吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。,7,三、实验器材,培养基,1、淀粉培养基 :500ml（分装于四个三角瓶，包扎，121126灭菌30min）,蛋白胨 10g,可溶性淀粉,2g,氯化钠 5g 琼脂 1520g,牛肉膏 5g 水 1000ml,pH 7.2,2、糖发酵培养基：300ml（分装于28只试管，包扎，112115灭菌30min）,蛋白胨 10g 氯化钠 5g,葡萄糖 10g,水 1000ml,pH 7.4 溴甲酚紫溶液（1.6%水溶液）1ml,3、M.R.及V.P实验:600ml（分装于56只试管，包扎，112115灭菌30min）,蛋白胨 5g K,2,HPO,4,5g,葡萄糖 5g,水 1000ml,pH 7.27.4,4、吲哚培养基:300ml（分装于28只试管，包扎，121126灭菌30min）,蛋白胨 10g 氯化钠 5g,水 1000ml pH 7.6,8,三、实验器材,菌种,1、大肠杆菌,2、枯草芽孢杆菌,3、未知菌,其他,1、试管6组 28个/组（每个试管带一个德汉氏小管）,2、平皿2组 16个/组,3、三角瓶2组 8个/组,9,四、实验步骤,（一）准备实验器材，配制培养基,（二）接种培养,10,试验名称,被接菌种1,被接菌种2,被接菌种3,对照,（管数）,1.淀粉水解实验,大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,产气肠杆菌,1支/每组不接种,2.糖发酵,大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,产气肠杆菌,1支/每组不接种,3.MR试验,大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,产气肠杆菌,1支/每组不接种,4.VP试验,大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,产气肠杆菌,1支/每组不接种,5.吲哚试验,大肠杆菌,枯草芽孢杆菌,葡萄球菌,1支/每组不接种,11,（三）结果观察,葡萄糖/乳糖发酵试验，H,2,S产生试验直接观察。,VP试验：去塞，加40KOH 15滴，振荡，再加等量奈酚，振荡，37振荡培养30min，观察。,MR试验：加甲基红试剂23滴，观察。,吲哚试验：加1ml乙醚（作用是萃取出吲哚）。振荡，静止片刻使分层，沿管壁慢慢加入吲哚试剂10滴，观察。,12,五、实验结果及分析,13,六、思考题,1、糖发酵试验中，所安装的杜氏小管起什么作用？,2 、V.P.试验与M.R.试验的最初作用物以及最终产物有什么异同？为什么会出现最终产物的不同。,3、吲哚是细菌分解哪一种氨基酸的产物？,14,