乙肝病毒DNA试验室检测课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,乙肝病毒的实验室检测,袁立云,乙肝病毒的实验室检测 袁立云,1,、荧光定量技术,2,、乙肝病毒的感染,3,、与临床,1、荧光定量技术 2、乙肝病毒的感染 3、与临床,荧光定量技术,荧光定量技术,荧光定量技术,?,(),，聚合酶链式反应，是一种的快速扩增技术。技术通,过两个短的称为引物的小片段和一种耐热酶（聚合酶）的,作用，经过高温变性、低温退火、适温延伸三个步骤在,3,个小时内反复循环,25-30,次，把特定的片段扩增,1000,万倍,。,?,每个体系含,4,种主要成分：含有待扩增序列的模板、引物,、聚合酶、脱氧核糖核酸三磷酸（）,荧光定量技术 ? ()，聚合酶链式反应，是一种的快速扩增技,实时荧光定量技术，是指在反应体系中加入荧光标记，,利用荧光信号积累实时检测整个过程，通过标准曲线对终,产物的分析，最终实现对未知的起始模版进行定量分析的,一种技术，是迄今对已知基因序列的核酸测定中最灵敏的,方法。,荧光定量技术,实时荧光定量技术，是指在反应体系中加入荧光标记，利,反应过程,5,5,3,3,酶,反应组分,变,性,反应过程 5 5 3 3 酶 反应组分 变,延,伸,5,3,5,3,3,5,3,Taq,Taq,重,复,退,火,延 伸 5 3 5 3 3 5 3,5,3,3,3,3,5,3,3,5,3,3,循环,2,4,个拷贝,循环,3,8,个拷贝,3,3,5,3,3,5,3,3,5,3,3,5,3,3,5,3,3,5,3,3,5,3,3,5 3 3 3 3 5 3 3 5 3,荧光定量原理,插入染料法,I,杂交探针法,(,最常用,),荧光定量原理 插入染料法 I 杂交探针法(最常用,探针,5,5,3,3,酶,反应体系,变,性,Taq,l,5,3,R,Q,Probe,5,3,R,Q,探针 5 5 3 3 酶 反应体系 变 性,5,3,5,3,R,Q,退,火,5,3,1.,链取代,Taq,3,Q,R,5,3,3,Q,Taq,R,5,2.,水,解,3.,聚,合,5,3,Taq,R,3,5,4.,检测荧光,5,3,3,Taq,R,5,l,5 3 5 3 R Q 退 火 5 3 1.,乙肝病毒的感染,乙肝病毒的感染,乙肝病毒的感染,（一）,乙型肝炎病毒结构及特点,：是感染的主要标志,：保护性抗体,：仅存于感染的肝细胞核内，,一般不存在于血循环中,:,非保护性抗体，,提示处于复制状态,：复制及强感染性的指标,：有一定的保护作用，预后良好,乙肝病毒的感染 （一） 乙型肝炎病毒结构,乙肝病毒的感染,（二）,与“两对半”,1. “,两对半,”,：机体的免疫反应状态；,2. “,携带者,”,、,“,大三阳,”,、,“,小三阳,”,等免疫学指标不,能,反应体内病毒复制水平与感染程度。,：检测的是本身的遗传物质,，是,病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。,HBsAg(,),HBV-DNA(,),HBeAg (,),HBV-DNA(,),3.,血清学指标,(,),不能排除感染。,乙肝病毒的感染 （二） 与“两对半” 1. “两对半”,乙肝病毒的感染,5,阳性标本,检出率,90,左右,与,有着良好的相关性,4.,也可能出现,(,),，,(,),。,乙肝病毒的感染 5阳性标本 检出率90左右 与 有着,乙肝病毒的感染,乙肝病毒的感染,乙肝病毒的感染,慢性感染分期及相关实验室检测指标,鲁凤民，庄辉，乙型肝炎实验室诊断研究进展,2009,乙肝病毒的感染 慢性感染分期及相关实验室检测指标 鲁凤民，,与临床,与临床,检测的临床意义,是存在最直接的依据,是复制的标志,是患者具有传染性的标志,对乙肝两对半起补充作用,是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标,可检测出隐匿性慢性乙型肝炎,检测的临床意义 是存在最直接的依据 是复制的标志 是,有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断,提供直接证据缩短“窗口期”,检测的临床意义,有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断 提供直接证据缩短,调查表明并不是所有,“,大三阳,”,的病人都处于复制,期，具有传染性；也不是所有,“,小三阳,”,的病人都无,复制。因此，要准确知道是否处于复制状态，最准,确的方法还是通过检测,来决定。,检测的临床意义,调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于复制期，具有传,乙肝病毒DNA试验室检测课件,乙肝病毒DNA试验室检测课件,检测的临床意义,和均阳性而,阴性？,干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。,所用引物相应的序列发生突变，此引物与突变不能配对结合。,病毒整合于宿主肝细胞染色体而血中游离,很少或缺乏。,检测的临床意义 和均阳性而 阴性？ 干扰素或拉米夫定等治,目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的,药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到,50,左右。,目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗,病毒药物主要有两大类：,干扰素：重组人,-1b,干扰素、,- 2a,、,-2b,干扰素等。,核苷类似物：拉米夫定、阿德福韦。,乙肝的治疗,目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的药物，最好,主,要,包,括,抗,病,毒,、,免,疫,调,节,、,抗,炎,保,肝,、,抗,纤,维,化,等,对,于,1,0,5,的,患,者,应,进,行,抗,病,毒,治,疗,乙肝的治疗,主要包括抗病毒、免疫调节、抗炎保肝、抗纤维化等 对于 1,谢,谢,谢 谢,