酶联免疫分析法基本原理和应用课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,酶联免疫分析法、,基本原理和应用,y,酶联免疫分析法、,1,基本要求:,了解免疫分析发展史,掌握抗原、抗体和免疫反应的,原理,了解免疫分析法的分类,熟悉酶标记免疫分析,法中使用的酶,熟悉 ELISA的原理,掌握 ELISA的固,相载体、包被与封闭、稀释液、洗涤液、酶反应终止,液及 ELISA法常用酶的底物系统,掌握 ELISA的酶联,方法和试验方法,熟悉 ELISA反应条件的选择,掌握,ELISA的定量计算,了解 ELISA的灵敏度提高途径,熟悉 ELISA放大系统。了解化学发光分折的原理熟,悉化学发光剂的种类,熟悉化学发光酶联免分析常,用的标记酶和发光增强剂,熟恶生物发光酶联疫分,析常用的生物发光反应体系,基本要求:,2,第七章酶联免疫分析法,第一节酶联免疫分析概述,第二节光度酶联免疫分析,第三节发光酶联免疫分析,第七章酶联免疫分析法,3,第一节酶联免疫分析概述,兔疫分析,1、免疫分析发展史,免疫分析( Immunoassay,IA)是利用待测物质(,抗原或抗体)与其相对应物质(抗体或抗原)之间专,一特异性反应而建立起来的一种高选择性分析方法。,免疫分析主要基于用抗体(或抗原)作为选择性化学,试剂以分析测定抗原(或抗体)及半抗原。,宋代人工痘苗预防烈性传染病天花,1971年第一届国际免疫学会议将免爱学与微生物,分开发展成一门独立的学科。,第一节酶联免疫分析概述,4,第一节酶联免疫分析概述,兔疫( Immunity)”一词源于 immunitas,原意是免除税赋和差役。,研究早期免疫学多集中在抗体抗感染能力研究。,20世纪中期以后,人们逐渐开始对各种抗原、微生物,的作用进行研究,发展出基础免疫学、临床免疫学、,免疫学检测、医学免疫学等多个分支。,现代免疫学将“免疫”定义为:机体对“自己”和,异己”识别、应答过程中所产生的生物学效应的总和,正常情况下是维持内环境稳定的y种生理性功,y,第一节酶联免疫分析概述,5,第一节酶联免疫分析概述,2、抗原、抗体与免疫反应,抗原是能够引起免疫反应的分子,免疫原性( ImmunogenicIty)指诱导刺激兔疫系统,产生抗体或致敏淋巴细胞的能力。,具有免疫原性的物质称为兔疫原( Immunogen)。,免疫反应原性( Immunoreactivity)或抗原性(,antigenIcity),指能与相应抗体或致敏淋巴细胞发,生特异性结合,引起免疫反应的性能。,具备上述两种特性的物质为完全抗凉级具有免疫反,应性的物质被称为半抗原( hapten,第一节酶联免疫分析概述,6,第一节酶联免疫分析概述,抗体是能与抗原发生特异性结合的兔疫球蛋白。,所有的抗体都是免疫球蛋白,但并非所有的免疫球蛋,白都是抗体。,例如无免疫活性的免疫球蛋白(如骨髓瘤蛋白)就不,是抗体,尽管其结构与抗体相似。,抗体主要存在于血清内,但在其他体液及外分泌液中,也有存在,抗原抗体分子之间存在着结构互补性和亲和性,使得,抗原与相应抗体之间极易发生结合反应)种取应具,有高特异性(即专一性)和可逆性。y,第一节酶联免疫分析概述,7,第一节酶联免疫分析概述,抗原、抗体发生如下免疫反应,Ag+Ab Ag-Ab,该兔疫反应遵循可逆生物大分子相互作用的热动力学,基本原理,其反应式为,AbAgI Ki二K,AbelAg,式中:Ab为游离的抗体结合位点的浓度;Ag为游,离的抗原结合位点的浓度;AbAg为抗原体复,合物的浓度;k为正反应速率常数为负反趣速塞,常数;K为反应平衡常数(亲和常数yBy,第一节酶联免疫分析概述,8,第一节酶联免疫分析概述,这种抗原-抗体反应既可发生于体内(iWvo),也,可发生于体外( in vitro)。,抗体主要存在于血清中,在抗原、抗体的检测中多采,用血清做试验,所以体外抗原-抗体反应也称为血清,学反应( serologic reaction),基于抗原-抗体反应的检测技术主要应用于以下几个,方面:用已知抗原检测未知抗体,用已知抗体检测未知抗原,定性或定量检测体内各种大分子物9,用已知抗体检测某些药物、激素等告种抗意物威,第一节酶联免疫分析概述,9,第一节酶联免疫分析概述,酶标记免疫分析法及常用标记酶,1、免疫分析法分类,y,第一节酶联免疫分析概述,10,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,11,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,12,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,13,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,14,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,15,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,16,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,17,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,18,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,19,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,20,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,21,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,22,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,23,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,24,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,25,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,26,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,27,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,28,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,29,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,30,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,31,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,32,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,33,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,34,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,35,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,36,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,37,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,38,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,39,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,40,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,41,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,42,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,43,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,44,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,45,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,46,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,47,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,48,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,49,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,50,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,51,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,52,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,53,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,54,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,55,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,56,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,57,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,58,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,59,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,60,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,61,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,62,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,63,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,64,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,65,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,66,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,67,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,68,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,69,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,70,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,71,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,72,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,73,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,74,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,75,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,76,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,77,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,78,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,79,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,80,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,81,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,82,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,83,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,84,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,85,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,86,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,87,酶联免疫分析法基本原理和应用课件,88,