第七章芳香胺类药物的分析课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第七章 芳香胺类药物的分析,第七章 芳香胺类药物的分析,1,对氨基苯甲酸酯类:,盐酸普鲁卡因,酰胺类:,对乙酰氨基酚,芳 胺 类,季胺盐类：,磺酰胺类：,芳烃胺类,苯乙胺类:,拟肾上腺素类药物,苯丙胺类,对氨基苯甲酸酯类:盐酸普鲁卡因芳 胺 类季胺盐类：芳烃胺类苯,2,第一节 芳胺类药物的分析,对氨基苯甲酸酯类:,特点：芳伯氨基未被取代，芳环的对位有取代,酰胺类:,特点：芳伯氨基被酰化，且芳环的对位有取代,芳 胺 类,第一节 芳胺类药物的分析对氨基苯甲酸酯类: 芳 胺,3,一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质,（一）基本结构和典型药物,具有对氨基苯甲酸酯的母体,结构中芳伯氨基未被取代，而在芳环对位有取代,一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质具有对氨,4,典型药物的结构,苯佐卡因,H,2,N,C,O,O,C,H,2,C,H,2,N,(,C,2,H,5,),2,H,C,l,盐酸氯普鲁卡因,Cl,典型药物的结构 苯佐卡因H2NCOOCH2CH2N(C2H5,5,盐酸丁卡因,盐酸普鲁卡因胺,酰胺键,酯键,C,O,O,C,H,2,C,H,2,N,(,C,H,3,),2,C,H,3,(,C,H,2,),3,N,H,H,C,l,盐酸丁卡因,盐酸丁卡因盐酸普鲁卡因胺酰胺键酯键COOCH2CH2N(CH,6,（二）主要化学性质,(1) 芳伯氨基特性：,可显重氮化-偶合反应(芳香第一胺类反应),与芳醛缩合,易氧化变色,(2) 酯键易水解特性：,(3)弱碱性：,脂烃胺侧链为叔胺氮原子，具有弱碱性,要采用非水溶液滴定法或亚硝酸钠滴定法测定含量,与生物碱沉淀剂发生沉淀反应,苯佐卡英除外,（二）主要化学性质苯佐卡英除外,7,（4）溶解性：,具芳伯氨基，或同时具脂烃胺侧链，游离碱多为碱性油状物或低熔点固体，难溶于水，可溶于有机溶剂,盐酸盐均为白色结晶或结晶性粉末，具有一定的熔点。在水和乙醇中易溶，难溶于乙醚、氯仿等有机溶剂,普鲁卡因盐酸盐水溶液加氢氧化钠或碳酸钠溶液，有油状的普鲁卡因析出,（4）溶解性：,8,二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质,（一）基本结构和典型药物,芳伯氨基被酰化，并且在芳环对位有取代，,共性为具有芳酰氨基,二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质 芳伯氨基被酰化,9,典型药物的结构：,对乙酰氨基酚（扑热息痛）,醋氨苯砜,盐酸利多卡因,盐酸布比卡因,典型药物的结构： 对乙酰氨基酚（扑热息痛）醋氨苯砜盐酸利多卡,10,（二）主要化学性质,（1）水解产物呈芳伯氨基特性:,药物结构中具有酰氨基，在,酸性,溶液中易水解得具有芳伯氨基的产物,对乙酰氨基酚,水解速度较快，而,盐酸利多卡因、盐酸布比卡因,的盐水溶液较稳定,（2）水解产物易酯化,（二）主要化学性质,11,(3)酚羟基的特性与三氯化铁发生呈色反应,是,对乙酰氨基酚,专属,反应，用于区别同类药物,利多卡因,（4）溶解性：,对乙酰氨基酚在热水中或乙醇中易溶，在丙酮中溶解，在水中略溶,(3)酚羟基的特性与三氯化铁发生呈色反应,12,三、鉴别试验,（一）重氮化-偶合反应,芳香第一胺类鉴别反应,注意：,在鉴别时，首先要使溶液成酸性，然后才能滴加亚硝酸钠试液及碱性,一萘酚试剂。,三、鉴别试验芳香第一胺类鉴别反应 注意：在鉴别时，首先要使溶,13,直接：,盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸氯普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺,间接：,对乙酰氨基酚、醋氨苯砜,鉴别时先用酸水解后，在滴加,亚硝酸钠试液及碱性,一萘酚试剂。,直接：盐酸普鲁卡因、苯佐卡因、盐酸氯普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺,14,（1）,盐酸普鲁卡因的鉴别,（直接）,（1）盐酸普鲁卡因的鉴别（直接）,15,盐酸普鲁卡因 ChP（2005）,鉴别 （1）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录）,取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。,盐酸普鲁卡因 ChP（2005）,16,（2） 对乙酰氨基酚的鉴别（间接）,（2） 对乙酰氨基酚的鉴别（间接）,17,对乙酰氨基酚 ChP（2005）,鉴别 （2）取本品约0.1g，加稀盐酸5m1，置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5m1，滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性-萘酚试液2m1，振摇，即显红色。,对乙酰氨基酚 ChP（2005）,18,特例：盐酸丁卡因,C,O,O,C,H,2,C,H,2,N,(,C,H,3,),2,C,H,3,(,C,H,2,),3,N,H,H,C,l,分子结构中不具芳伯氨基,芳香仲胺,芳香仲胺,酸性,亚硝酸钠试液,乳白色N-亚硝基化合物沉淀,与具有芳伯氨基的同类药物区别,特例：盐酸丁卡因COOCH2CH2N(CH3)2CH3(CH,19,（二）三氯化铁反应,对乙酰氨基酚,（二）三氯化铁反应对乙酰氨基酚,20,（三）与重金属离子反应,1、盐酸利多卡因的鉴别,A、与重金属C,U,2,的反应,盐酸利多卡因,碳酸钠试液,Cu,2+,蓝紫色配位化合物,三氯甲烷提取,提取液显黄色,药典收载方法之一，,相同反应条件下,芳胺类药物（苯佐卡因、盐酸普鲁卡,因、盐酸氯普鲁卡因、盐酸丁卡因等）,无此反应,（三）与重金属离子反应碳酸钠试液Cu2+蓝紫色配位化合物三氯,21,B、与钴盐反应,盐酸利多卡因,酸性,氯化钴试液,亮绿色细小钴盐沉淀,C、与汞盐反应,盐酸利多卡因,硝酸酸化,Hg,+,，,黄色,区别于对氨基苯甲酸酯类（显红色或橙黄色）,B、与钴盐反应盐酸利多卡因酸性氯化钴试液亮绿色细小钴盐沉淀C,22,2、盐酸普鲁卡因胺的鉴别,酰胺键,盐酸普鲁卡因胺,H,2,O,2,，氧化,羟肟酸,FeCl,3,试液,羟肟酸铁,先显紫红色，随即呈暗棕色至棕黑色,药典收载,2、盐酸普鲁卡因胺的鉴别酰胺键盐酸普鲁卡因胺H2O2，氧化羟,23,（四）水解产物的反应,盐酸普鲁卡因 ChP（2005）,鉴别 （2）取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10氢氧化钠溶液1ml，即生成,白色沉淀,；加热，变为油状物；继续加热，产生的,蒸气,，能使湿润的,红色石蕊试纸变为蓝色,；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出,白色沉淀,。,（四）水解产物的反应 盐酸普鲁卡因 ChP（2005）,24,第七章芳香胺类药物的分析课件,25,苯佐卡因的鉴别：,苯佐卡因,NaOH试液,乙醇,碘试液,黄色沉淀,碘仿臭气,苯佐卡因的鉴别：苯佐卡因NaOH试液乙醇碘试液黄色沉淀,26,（五）制备衍生物测定熔点,通常的衍生物为：,三硝基苯酚衍生物,硫氰酸盐衍生物,（五）制备衍生物测定熔点,27,（六）紫外特征吸收光谱,具有的苯环结构，具有紫外吸收光谱,针对不同的药物、不同的溶剂、不同的浓度、它们的吸收波长不同，吸收系数也不同,盐酸布比卡因 ChP（2005）,鉴别 （2）取本品，精密称定，按干燥品计算，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶液，照分光光度法（附录A）测定，在263nm与271nm的波长处有最大吸收；其吸收度分别为0.530.58与0.430.48。,（六）紫外特征吸收光谱 盐酸布比卡因 ChP（20,28,（五）红外吸收光谱 当该类药物采用其他方法难以进行区别时，用红外吸收光谱就比较容易区别。,（五）红外吸收光谱 当该类药物采用其他方法难以进行区别时,29,四、特殊杂质的检查,（一）对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查,用对硝基氯苯、苯酚、硝基苯作原料，但都以,对氨基苯酚,为主要中间体制备对乙酰氨基酚。,四、特殊杂质的检查,30,1、乙醇溶液的澄清度与颜色,合成工艺中，用,铁粉,作还原剂,乙醇溶液的澄清度,如溶液浑浊，可与,1#浊度,标准液比较，不得更浓,乙醇溶液的颜色：检查中间体对氨基酚的有色氧化产物。,如显色，与,棕红色2号或橙红色2号,比较，不得更深,1、乙醇溶液的澄清度与颜色,31,2、有关物质,主要杂质,：中间体、副产物及分解产物。,例如：对氨基酚、对氯乙酰苯胺、O-乙酰基对乙酰氨基酚、偶氮苯、氧化偶氮苯、苯醌和醌亚胺等,检查对象,：对氯苯乙酰胺,方法,：TLC法，杂质对照品法,注意事项,：,尽量在较低温度下进行，减少乙醚的挥发,供试品点样量大，点样直径不宜超过7mm,判断方法,：供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更大，更深,2、有关物质,32,3、对氨基酚,杂质来源,中间体、水解产物,反应原理,药物主成分对乙酰氨基酚无此呈色反应,注意事项：,对氨基酚,对照液,稳定性差,，临用前配置,用于原料药中对氨基酚的检查，制剂用HPLC法,杂质来源 中间体、水解产物 反应原理 药物主成分对乙酰氨基,33,检查方法,对照法,取本品1.0g，加甲醇溶液（12）20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液1m1，摇匀，放置30min；如显色，与对乙酰氨基酚对照品1.0g加对氨基酚50,g用同一方法制成的对照液比较，不得更深（0.005）。,检查方法 对照法 取本品1.0g，加甲醇溶,34,（二）盐酸普鲁卡因注射液中,对氨基苯甲酸,的检查,原理：,TLC 杂质对照品法,对氨基苯甲酸最低检出量为0.01g,苯胺最低检出量0.01g,1.2%,（二）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查 原理：,35,精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1ml中含30,g的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶液各10,l，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇（141 1 4）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较,，,不得更深。,精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中含盐酸普鲁卡因2.,36,（三）盐酸,氯,普卡因注射液中有关物质和光解产物的检查,由于盐酸氯普卡因注射液在生产和贮藏过程中会产生,4-氨基-2-氯苯甲酸,，影响疗效和成品的颜色，故此需要对降解产物进行检查,1、高效液相色谱法（HPLC）,2、液相色谱与质谱联用法（LC-MS）,（三）盐酸氯普卡因注射液中有关物质和光解产物的检查,37,MS LC,LC-MS,LC-MS/MS,LC-ESI-MS/MS,LC-APCI-MS/MS,LC-ESI-TOF-MS/MS,LC-MALDI-TOF-MS/MS,MS LC,38,LC-MS分析：,1、色谱条件 Zobax SB-C,18,(150 mm4.6 mm,i.d., 5,m),Column temperature: 25 ,Mobile phase:0.5%HAc-CH,3,CN (0.5%HAc)=87: 13,flow rate: 1.0 ml/min,Detection wavelength: 254 nm,LC-MS分析：,39,2、质谱条件,Positive Scan mode 80600 mau,喷雾电压：4000V,裂解电压：70V,N,2,-9.5 L/min,干燥气压力：40psi,干燥气温度：350,2、质谱条件,40,4氨基2氯苯甲酸,4氨基2氯苯甲酸,41,第七章芳香胺类药物的分析课件,42,第七章芳香胺类药物的分析课件,43,（四）盐酸罗哌卡因对映体的纯度检查,长效酰胺类局麻药， R-盐酸罗哌卡因心脏毒性大,临床使用S盐酸罗哌卡因,（四）盐酸罗哌卡因对映体的纯度检查长效酰胺类局麻药， R-盐,44,高效毛细管电泳,高效毛细管电泳,45,五、含量的测定,(一)亚硝酸钠滴定法,1、原理,终点指示：永停法（外指示剂法）,五、含量的测定(一)亚硝酸钠滴定法终点指示：永停法（外指示剂,46,例：中国药典（2005年版）收载有,具有芳伯氨基的药物盐酸普鲁卡因及其注射剂、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺及其片剂与注射剂、注射用盐酸普鲁卡因,具有潜在芳伯氨基的药物醋氨苯砜及其注射液,具酰胺,经水解,具硝基,经还原,例：中国药典（2005年版）收载有具有潜在芳伯氨基的药物,47,2、主要测定条件,（1）加入适量KBr加速反应: KBr为催化剂,不同的酸影响反应速度：HBr HCl HNO,3,、H,2,SO,4,NaNO,2,+HClHNO,2,+NaCl,K,1,K,2,K,1,300 K,2,加入,KBr,，可增大被测溶液中NO,+,的浓度,在盐酸存在下重氮化反应,2、主要测定条件NaNO2+HClHNO2+NaClK1K,48,与芳伯氨基的游离程度有关,若芳伯氨基的碱性较弱，则成盐的比例较小，即游离芳伯氨基较多，反应速度就快,若芳伯氨基碱性较强，则成盐比例较大，游离芳伯氨基较少，则反应速度就慢,与芳伯氨基的游离程度有关,49,（2）加过量盐酸的作用：,胺类药物的盐酸盐比硫酸盐的溶解度大,可以加快重氮化反应速度,增加重氮盐在酸性溶液中的稳定性,防止偶氮氨基化合物的生成,结论,：加速反应,注意事项,：酸度不能过大,会阻碍芳伯氨基的游离，影响反应速度,可使亚硝酸分解,芳胺类药物,:,酸的摩尔比= 1:2.56,（2）加过量盐酸的作用： 会阻碍芳伯氨基的游离，影响反应速度,50,（3）控制温度：在1030条件下滴定,温度每升高lO，重氮化反应则加快2.5倍，但重氮盐分解速度亦相应地加速2倍,若温度过低，反应又太慢,（3）控制温度：在1030条件下滴定,51,（4）滴定管尖端插入液面下滴定,滴定速度：,先快后慢,滴定时将滴定管尖端插入液面下约2/3处，一次把大部分亚硝酸钠滴定液在搅拌下迅速加入，使其尽快反应,将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，再缓缓滴定,在近终点时， 剩余的芳伯氨基的浓度极稀，需在最后一滴加入后，搅拌15min，再确定终点是否真正到达,（4）滴定管尖端插入液面下滴定,52,3、终点指示方法,永停滴定法,电位法,外指示剂法,内指示剂法,3、终点指示方法,53,（1）永停滴定法中国药典收载,终点：电极起氧化-还原反应，电流计指针偏转,终点前：电极不起氧化-还原反应，电流计的指针指零,（1）永停滴定法中国药典收载终点：电极起氧化-还原反应，,54,（2）外指示剂法： KI淀粉糊剂或试纸,2NaNO,2,+2KI+4HCl,2NO+I,2,+2KCl+2NaCl+2H,2,O,碘化钾被氧化,遇淀粉，显,蓝色,（2）外指示剂法： KI淀粉糊剂或试纸2NaNO2+2KI,55,操作要点：,显色要立即,原因：,指示剂在酸性条件下置于空气中一段时间后，空气将指示剂中KI氧化为I,2,而使淀粉变蓝色,样品易损失,弥补方法：,通过滴定度计算，得大概的用量,预先做一份求得大概用量，然后再准确测定，,蘸取试验时取量一定要少,操作要点：,56,(二)非水溶液滴定法,盐酸丁卡因、盐酸利多卡因等结构中含有弱碱性氮原子，药典收载方法采用非水溶液滴定法测定含量,滴定方法：大多以冰醋酸为溶剂，高氯酸为滴定液，针对不同药物采用不同的指示剂指示终点,(二)非水溶液滴定法,57,(三)紫外分光光度法分子结构中都有苯环,中国药典（2005年版）：百分吸收系数法,对乙酰氨基酚在,0.4氢氧化钠,溶液中，于,257nm,波长处有最大吸收，其紫外吸收光谱特征，可用于其,对乙酰氨基酚原料、片剂、注射剂、栓剂和胶囊剂,的含量测定,USP30-NF25(2007年亚洲版）：对照品比较法,采用,甲醇水,为溶剂，,244nm,为吸收波长,(三)紫外分光光度法分子结构中都有苯环,58,例：对乙酰氨基酚的测定方法：,取本品约40mg，精密称定，放在250 ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液5Oml溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取5m1，置1OOml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液lOml，加水至刻度，摇匀，在257nm 的波长处测定吸收度，按对乙酰氨基酚（C,8,H,9,NO,2,）的百分吸收系数 为715计算，即得。,本品按干燥品计算，含对乙酰氨基酚（C,8,H,9,NO,2,）应为98.0%102.0%。,例：对乙酰氨基酚的测定方法：,59,原料药的含量计算：,供试品的测量浓度： 单位：g/100 ml,供试品的稀释体积：25020 ml,供试品的称重量：W=0.04 g,所以：含量%=,原料药的含量计算：,60,（四）高效液相色谱法（HPLC）,同时测定盐酸普鲁卡因注射液中的盐酸普鲁卡因和它的降解产物对氨基苯甲酸，,色谱条件：,反相C,18,柱,内 标：,苯甲酸,流 动 相：,甲醇,:,1%醋酸=40,:,60，pH=4.7,流 速：,1.1ml/min,检测波长：,250 nm,（四）高效液相色谱法（HPLC）,61,第七章芳香胺类药物的分析课件,62,第二节 苯乙胺类药物的分析,一、苯乙胺类药物的基本结构与主要化学性质（一）基本结构与典型药物,R,1,C,H,C,H,N,H,R,2,O,H,R,3,*,拟肾上腺素类药物,第二节 苯乙胺类药物的分析 一、苯乙胺类药物的基本结构与主,63,常见的苯乙胺类药物,常见的苯乙胺类药物,64,结构特点：, 苯环上都有酚羟基, 肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素分子结构中苯环的3，4位上都有2个邻位酚羟基,结构特点：,65,（二）主要化学性质,1、弱碱性,烃氨基侧链，氮为仲胺氮，显弱碱性，游离碱溶于有机溶剂，难溶于水；而盐能溶于水,2、酚羟基特性,与重金属离子络合呈色，置空气中或遇光易氧化变色，在碱性溶液中更易变色,发生三氯化铁反应,3、具手性碳原子， 旋光性,4、苯环上的取代基可供分析用,5、有紫外吸收与红外吸收特征,（二）主要化学性质,66,二、鉴别试验,（一）与三氯化铁反应,药物,与三氯化铁反应显色,肾上腺素,翠绿色，加氨试液，显,紫色,紫红色,重酒石酸去甲肾上腺素,翠绿色，加碳酸氢钠试液，显蓝色,红色,盐酸去氧肾上腺素,紫色,盐酸异丙肾上腺素,深绿色，滴加新制的5碳酸氢钠试液，显蓝色,红色,硫酸沙丁胺醇,紫色，,加碳酸氢钠试液，橙黄色混浊,二、鉴别试验药物与三氯化铁反应显色肾上腺素翠绿色，加氨试液，,67,（二）与甲醛-硫酸反应,与甲醛-硫酸试液反应，形成具有醌式结构的有色化合物。,可用于区别同类药物,。,药物,与甲醛硫酸试液反应,肾上腺素,红色,重酒石酸去甲肾上腺素,淡红色,盐酸去氧肾上腺素,玫瑰红,橙红 深棕红,盐酸异丙肾上腺素,棕色至暗紫色,（二）与甲醛-硫酸反应药物与甲醛硫酸试液反应肾上腺素红色重,68,（三）氧化反应,碘、过氧化氢、铁氰化钾,具有酚羟基,（三）氧化反应 碘、过氧化氢、铁氰化钾具有酚羟基,69,例：盐酸异丙肾上腺素,加硫代硫酸钠使过量碘的棕色消失,溶液显淡红色,H,+,例：盐酸异丙肾上腺素加硫代硫酸钠使过量碘的棕色消失 溶液显淡,70,例:肾上腺素,例:重酒石酸去甲肾上腺素,(,与异丙肾上腺素和肾上腺素区别),肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素可被氧化产生明显的,红棕色或紫色,在pH为6.5的条件下，是无法区分,H,2,O,2,肾上腺素红,显血红色,H,+,棕色多聚体,例:肾上腺素 肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素可被氧化产生明显的红,71,（四）紫外特征吸收与红外吸收光谱,中国药典规定利用紫外特征吸收与红外吸收光谱可以用来鉴别苯乙胺类药物。,例：盐酸异丙肾上腺素可采用其,水,溶液 (浓度为0.O5mg/ml)在,280nm,处的吸收度为,0.50,，进行鉴别;盐酸异丙肾上腺素亦采用红外吸收光谱进行鉴别。,（四）紫外特征吸收与红外吸收光谱,72,是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于盐酸麻黄碱（盐酸伪麻黄碱）、盐酸去氧肾上腺素鉴别：,（五）双缩脲反应,盐酸麻黄碱,显,蓝紫色,乙醚,醚层,紫红色,水层,蓝色,CuSO,4,+NaOH,是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于盐酸麻黄碱（盐酸伪麻,73,盐酸去氧肾上腺素溶液,CuSO,4,试液,NaOH试液,显紫色,加乙醚振摇,醚层不显色,与盐酸麻黄碱区别,CuSO4试液NaOH试液显紫色加乙醚振摇醚层不显色与盐酸,74,三、特殊杂质的检查,1、酮体检查,杂质来源：,原料残存（氢化不完全）,检查范围：,肾上腺素、重酒石酸去甲肾上腺素、盐酸去氧肾上腺素和盐酸异丙肾上腺素等药,检查原理：,利用酮体在310nm处有最大吸收，而药物本身在此波长几乎没有吸收。,检查方法,吸收度法,例：以重酒石酸去甲肾上腺素为例,。,三、特殊杂质的检查,75,例：重酒石酸去甲肾上腺素,2.0mg/ml，,310nm处测定， A0.05，酮体的限量0.05%,例：重酒石酸去甲肾上腺素2.0mg/ml，,76,药物,检查杂质,溶剂,样品浓度,测定波长,A,肾上腺素,肾上腺酮,HCL,2.0（mg/ml),310nm,0.05,盐酸去氧肾上腺素,酮体,水,0.2,重酒石酸去甲肾上腺素,去甲肾上腺酮,0.05,盐酸异丙肾上腺素,酮体,0.15,药物检查杂质溶剂样品浓度测定波长A肾上腺素肾上腺酮HCL2.,77,2、 有关物质的检查,盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇TLC,盐酸苯乙双胍-PC,盐酸氨溴索HPLC,采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查,2、 有关物质的检查,78,盐酸氨溴索的检查方法,对照样品制备：本品供试品溶液对照溶液,供试样品制备：本品甲醇溶解加甲醛溶液加热吹干溶剂用水和流动相溶解HPLC分析,色谱条件：RP-HPLC 0.01mol/lNH,4,H,2,PO,4,-CH,3,CN (50:50); 248 nm,分析：对照溶液主成分峰为满量程的2025%，记录至主成分峰保留时间的2倍，注入供试品溶液，如有杂峰，各杂峰的面积之和不得大于对照液主峰面积的三分之一。,盐酸氨溴索的检查方法,79,Main peak,Main peak,80,四、含量测定,原料药,:非水溶液滴定法和溴量法,制剂:,提取容量法、阴离子表面活性剂滴定法、紫外分光光度法、比色法和高效液相色谱法等。,(一)非水溶液滴定法,原料药,脂烃胺基侧链，显弱碱性,测定条件,:用冰醋酸做溶剂，加入醋酸汞试液消除氢卤酸的干扰，并以结晶紫指示液指示终点，0.1mol/L的高氯酸作滴定液。,同时作空白试验。,四、含量测定,81,(二)溴量法,盐酸去氧肾上腺素,采用溴量法测定含量。,例：以去氧肾上腺素为例讨论溴量法,原理：,(二)溴量法,82,操作要点,(1) 操作过程中必须防止逸失,(2)溴液不能太过量:,过量：溴代反应中会引起酚羟基的氧化或溴化,一般加入的,溴液以过量2%,为宜,(3)进行空白试验：校正操作中溴及碘的可能逸失,操作要点,83,盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂,（三）提取酸碱滴定法,依据性质,游离碱不溶于水，易溶于有机溶剂,方法一：,盐类可溶解于水，不溶于有机溶剂 （三）提取酸碱滴定法依据,84,方法二：,方法二：,85,硫酸苯丙胺的含量测定：,BH,2,SO,4,+ NaOH + NaCl,乙醚,提取B,+ H,2,SO,4,蒸去乙醚,NaOH标准液滴定,终点,硫酸苯丙胺的含量测定：BH2SO4 + NaOH + N,86,(四)紫外分光光度法和比色法,利用药物分子结构中的芳伯氨基进行重氮化偶合反应，以及分子结构中的Ar-OH与Fe,3,络合显色，进行比色测定。,分之结构中的,苯乙胺,结构采用紫外法测定,分子结构中的,酚羟基,可与亚铁离子络合显色,分子结构中的,芳伯氨基,进行重氮化反应显色,用于制剂的含量测定,(四)紫外分光光度法和比色法,87,例如：盐酸克伦特罗栓的含量测定,上述偶合剂可与HNO,2,显色，干扰比色测定，可先加氨基,磺酸铵分解过量的HNO,2。,例如：盐酸克伦特罗栓的含量测定上述偶合剂可与HNO2显色，干,88,(五)高效液相色谱法,例：重酒石酸去甲肾上腺素注射液,离子对反相高效液相色谱法,内标法定量,调节溶液pH为3.8，加入,离子对试剂十二烷基磺酸钠,(五)高效液相色谱法,89,其它分析技术与方法,高效毛细管电泳法用于饲料中盐酸克伦特罗与沙丁胺醇含量的测定,毛细管：,75 m(i.d) 50 cm，有效长度39 cm，未涂层石英毛细管柱(河北永年锐沣色谱器件有限公司)；,缓冲液：,60 mmolL的柠檬酸一柠檬酸钠缓冲溶液，pH为6.32；,分离温度,25；,分离电压,12 kV；,检测波长,200 nm；压力进样：3.4 kPa , 20 s实验前，依次用0.1 molL的NaOH溶液、水和缓冲溶液冲洗毛细管5、2、2 min，两次进样间用缓冲溶液冲洗2 min,其它分析技术与方法高效毛细管电泳法用于饲料中盐酸克伦特罗,90,空白饲料,盐酸克伦特罗,沙丁胺醇,空白饲料盐酸克伦特罗沙丁胺醇,91,第三节 苯丙胺类药物的分析,一、苯丙胺类药物的基本结构与主要性质,1、基本结构,血管紧张素转胺酶（ACE）抑制剂,第三节 苯丙胺类药物的分析血管紧张素转胺酶（ACE）抑制剂,92,马来酸依那普利,盐酸贝那普利,2005版中国药典收载的代表药物,马来酸依那普利盐酸贝那普利2005版中国药典收载的代表药物,93,西那普利,赖诺普利,西那普利赖诺普利,94,主要性质,1、酸碱性：,分子中含有-COOH，显酸性；含有烃氨链，显弱碱性,2、氨基酸特性,：结构是脯氨酸的衍生物,3、光学活性：,分子中含有不对称中心，具有旋光性,4、水解特性：,本类药物大多是Pre-drug，在体内转化为活性代谢物,主要性质,95,二、鉴别试验,一、物理与化学鉴别法（,马来酸依那普利）,1、熔点测定法,BP,2、高锰酸钾反应,红色消失（氧化还原反应）,3、溴间苯二酚反应（,BP）,：,先进行溴代反应，使溴颜色消失，再与间苯二酚反应，显棕红色,4、羟胺三氯化铁反应（,BP）,：,先进行羟胺的生成（羟胺甲醇液KOH乙醇液）FeCl,3,显棕红色,二、鉴别试验,96,二、旋光法,二、旋光法,97,三、光谱与色谱法鉴别,三、光谱与色谱法鉴别,98,三、特殊杂质的检查,1、马来酸依那普利有关物质的检查：,马来酸依那普利,采用HPLC法检查,一定酸度、湿度,依那普利拉,依那普利双酮,三、特殊杂质的检查1、马来酸依那普利有关物质的检查：马来酸依,99,2、西那普利中有关物质的检查：,A、B、C、D,四个主要杂质,杂质,A,-TLC法检查（硅胶,G,板，目视比较），不得超过0.1BP,杂质,B、C、D及其它杂质,HPLC法，分别不得超过0.5、0.1、0.2和0.1,BP,2、西那普利中有关物质的检查：A、B、C、D四个主要杂质,100,TLC法检查,A,杂质,制备样品液：供试品溶液（40 mg/ml）、对照品溶液a（40,g/ml)、对照溶液b（0.5 mg/ml）,点样与展开：硅胶G板，HAc-H,2,O-,n,-Hex-MeOH-EtOAc (1: 1: 3: 3: 12),显色：KBiI,4,-HAc (1: 10),比较：,供试品如显杂质A斑点，颜色,对照液a的主斑点。,要求对照液b显示两个清晰分开的斑点时，结果有效。,TLC法检查A杂质,101,HPLC法检查,B、C、D,和其它杂质,样品测定液配制：,供试品溶液（0.5 mg/ml)、对照溶液a (2.5,g/ml）、对照溶液b（杂质D对照品0.5 mg/ml）,色谱条件：,ODS 色谱柱，四氢呋喃三乙胺为流动相，流速1.0ml/min，检测波长：214nm,色谱系统适用性：,分别进样对照溶液a和b，使对照溶液a的主成分峰为满量程的50，在对照溶液b中西那普利与杂质D的分离度不得低于2.5。,HPLC法检查B、C、D和其它杂质,102,测定与评判：,1、色普图记录至峰A被洗脱为止,2、杂质B、C、D与西那普利的相对保留时间分别为0.6、1.6、0.9,3、峰面积,杂质B,0.5（对照液a的主峰面积）,峰面积,杂质C,0.1（对照液a的主峰面积）,峰面积,杂质D,0.2（对照液a的主峰面积）,峰面积,其它,0.1（对照液a的主峰面积）,测定与评判：,103,（三）残留溶剂的测定,1、马赖酸乙那普利中残留溶剂乙腈的检查,capillary GC法,0.041,样品溶液的制备：本品加二甲基甲酰胺溶解,100mg/ml,对照溶液的制备：取乙腈加二甲基甲酰胺溶解40,g/ml,分析方法：PEG-20M为固定液的毛细管柱，FID检测器，程序升温洗脱：,Injection tem.: 200,detector tem.:250,injection volume: 1,l,（三）残留溶剂的测定Injection tem.: 200,104,2、盐酸喹那普利中丙酮、乙腈、二氯甲烷、甲苯的检查-GC法,色谱系统适用性试验,测定,结果计算：,乙腈和丙酮,0.25,二氯甲烷0.1,制备标准溶液所取某溶剂的重量,供试品量,供试品溶液的色谱峰面积,标准溶液色谱峰面积,2、盐酸喹那普利中丙酮、乙腈、二氯甲烷、甲苯的检查-GC法乙,105,四、含量测定,一、酸碱滴定法：利用本类药物结构中的-COOH和氮原子氨基，可进行酸碱滴定法进行含量分析,1、非水滴定法,马来酸依那普利非水碱量法滴定，以冰醋酸和无水二氧六环为溶剂，结晶紫为指示剂，高氯酸为滴定液,四、含量测定,106,2、水溶液中的滴定,马来酸依那普利：供试品新沸过的冷水溶解NaOH滴定电位法指示终点,3、在醇水混合溶液中滴定,供试品甲醇和水溶解后进行碱液滴定（雷米普利和西拉普利）,2、水溶液中的滴定,107,二、HPLC法,举例说明：马来酸依那普利片的含量测定,色谱条件：C,8,柱，乙腈和磷酸盐缓冲液为流动相，检测波长215 nm，柱温50,色谱系统适用性：,n300,，,T2.0,主峰与其它杂质峰的,R4.0,进样与计算：20,l，外标法定量,二、HPLC法,108,盐酸喹那普利的含量测定,色谱条件：CN柱guard column (3 cm 4.6 mm, 5,m)，乙腈水甲磺酸为流动相，流速1.5 ml/min，检测波长214 nm,色谱系统适用性：主峰与A的R,1.75，主峰与B的R3.5，n550，RSD2.0% (n=5),盐酸喹那普利的含量测定,109,