强直性脊柱炎的实验室检测及其意义课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,强直性脊柱炎的实验室检测及其意义,四川金域 魏徵霄,2021-02-08,内容提要：,强直性脊柱炎 特点及其与,B27,关系,什么是,HLA,及,HLA-B27,MHC,、,HLA,、亚型、关联、,RR,HLA-B27,与哪些疾病相关,HLA-B27,怎么检测,MLCT,、,ELISA,、,IMS-ELISA,、,FCM,、,PCR-SSP,2,2024/9/2,强直性脊柱炎(AS) 是一种慢性、进行性，中轴关节受累 的关节病变，其中以骶髂关节和脊柱关节受累为主要临床表现。该病早期进展较慢，但后期开展较快，很短时间内形成 驼背畸形，髋、膝等关节强直，故早期诊断显得尤为重要。,2024/9/2,强直性脊柱炎的流行病学,患病率 我国0.3% 高！,RA 0.36%,发病年龄 40岁以前发病,顶峰20-30 岁,男女比例 10:1,强直性脊柱炎相关检测：HLA-B27,Ankylosing Spondylitis，AS,患病率：0.3%，20-30岁，男女比例 10:1，有家族倾向；,主要侵犯：中轴关节骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织,可伴发外周关节及关节外表现，严重者发生脊柱畸形和关节强直,B27检测可作为有相关病症或高危人群AS早期的筛选方法！,AS不是RA的一种特殊类型！,5,强直性脊柱炎,类风湿性关节炎,地区分布,种族差异大,世界性,性别分布,男女,女男,年龄,20-30,30-50,家族史,明显,不明显,类风湿因子,（）,（,）,AS与HLA-B27,6,健康人群,HLA-B27,阳性率及,AS,患病率各地区、种族有显著的差异,HLAB27,与强直性脊柱炎的发病有很强的相关性,两种错误认识：,HLA-B27,阳性,AS,！,HLA-B27,阳性不会转阴！,HLA-B27,阳性率,AS,患病率,AS,患者,B27,阳性率,中国人,2-7%,0.3%,90,95%,欧洲白种人,4,13,1,80,100%,南非黑人,1,很低,22%,美国黑人,2,4,57%,印地安人,9,50,6,12,80,100%,AS与HLA-B27的关联机制,连锁不平衡学说,分子模拟学说,关节源性肽假说,其他：,T,细胞受体库假说,超抗原假说,B27,修饰因子假说,Cys67,模型,7,HLA相关概念,主要组织相容性抗原,主要组织相容性复合体 MHC 类)：H-2 SLA HLA,MHC、HLA复合体基因,MHC分子、HLA分子抗原,HLA：人类白细胞抗原 Human Leukocyte Antigen,8,HLA相关概念,9,不同地区,HLA-B27,亚型的流行病学分布,欧洲、非洲,2705,、,2702,、,2707,东南亚（印尼、马来西亚、泰国）,2706,、,2704,、,2705,中国,、新加坡、日本,2704,、,2705,、,2707,HLA-B27相关疾病,10,疾病,HLA-B27,阳性率,(%),强直性脊椎炎,90,银屑病性关节炎,55,Reiters,综合症,37,反应性关节炎,沙门氏菌感染,29.7,志贺氏菌感染,20.7,耶尔森氏菌感染,17.6,淋病双球菌感染,14.0,正常人群,2,7,HLA-B27检测方法及评价,抗原水平,微量细胞毒法,84%,ELISA,85%,IMS-ELISA 88%,流式细胞术法,93%,基因水平,PCR-SSP 96%,11,微量细胞毒法microlymphocytotoxic test，MLCT,原理：如果受试者淋巴细胞外表表达有相应的HLA-B27抗原，就可以与B27抗体结合，形成Ag-Ab复合物激活补体，发生对细胞膜的破坏及细胞杀伤作用，通过染色法观察，死细胞的细胞膜通透性改变，染料能够进入使之着色，而活细胞细胞膜完整不被染色。根据死细胞占全部细胞的百分比，可以判断受试者淋巴细胞外表是否存在HLA-B27抗原及其与抗体的反响强度。,优点：不需特殊仪器设备，易于操作，一般的实验室都可开展。,缺点：标本存放不能超过8小时；感染可以使细胞膜外表的B27分子的数量或结构改变，影响MLCT的结果，易出现假阴性。,12,J.Kirveskari, et al. British Journal of Rheumatology, 1997,36:185-189,ELISA,原理：应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中HLA-B27水平。用纯化的B27抗体包被微孔板，依次参加HLA-B27抗原待检标本、生物素化的抗HLA-B27抗体、HRP标记的亲和素，形成双抗体夹心反响，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的HLA-B27呈正相关。,其结果与MLCT法符合率为99，且不受感染因素的影响，重复性好。,13,瞿良等实用医学杂志，,2005,19(21):2190-2191,磁珠酶联免疫分析IMS-ELISA,磁珠别离与ELISA结合B27单抗标记磁珠HRP标记CD45单抗通过磁场别离游离相,优点：,反响时间短1小时完成,对标本新鲜度要求不高,28静置4 d之内可用,14,杨雅琼等现代检验医学杂志，,2002,17(2):60-62,流式细胞术法,利用荧光标记的HLA-B27单克隆抗体，与细胞外表的B27抗原结合，使结合后的淋巴细胞具有一定的荧光强度，这种荧光强度可由流式细胞仪测得的通道值来反映，以其值的上下判断HLA-B27抗原表达百分比，从而判断HLA-B27是否阳性。,优点：全自动仪器检测，减少了人为因素的影响，重复性高，操作简单，自动化程度高；灵敏度可达100%，特异性达97.4%；结果稳定，样本之间，不同仪器之间，不同实验室之间可重复性高。结果判断准确，为目前较为理想的方法，国外已将FCM法检测HLA-B27作为AS 诊断的常规检测方法。,缺点：仪器昂贵，目前只在较大医院应用，且荧光易淬灭。,15,PCR-SSP,通过设计基因序列特异的引物SSP，特异性的扩增出标本中的HLA-B27基因片段，以琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增产物，假设出现目的条带那么表示HLA-B27为阳性。,优点：基因水平的检测 直接对HLA-B27原基因进行扩增分型，灵敏度高，特异性强。,缺点：耗时长，需要跑电泳，需要特定的实验仪器及严格的实验条件，在临床上普遍开展此项检查有一定的难处。,16,2024/9/2,Thank You,