HbA1c基础知识培训

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,糖化血红蛋白的基础知识培训,HbA1c,定义,HbA1c:,葡萄糖与血红蛋白,链氨基酸末端的,6,个氨基酸,结合产生的一种特定的糖化血红蛋白,血红蛋白被糖化后，氨基酸末端所带,负电荷,会增加,Hb,A,0,：,没有结合葡萄糖的血红蛋白,链氨基酸末端的,6,个氨基酸,HbA,1c,以百分比表示，即以,和葡萄糖结合的血红蛋白占全部血红蛋白的比例,正常参考范围：,4%-6%,（,NGSP/DCCT,标化的方法）,糖化血红蛋白,-,血红蛋白的糖基化产物,葡萄糖进入红细胞，在内部与血红蛋白发生反应,血红蛋白,葡萄糖,红细胞,糖化血红蛋白的生物合成过程（两步）,血红蛋白,葡萄糖,中间产物,-LA1c,Schiff,碱,HbA1c,第一部：快速反应，生成不稳定,A1c,（,LA1c,）,第二步：缓慢反应，生成稳定的,A1c,（,HbA1c,）,糖化和非糖化的血红蛋白,Hb,HbA0,HbA1,HbA1a,HbA1b,HbA1c,HbA,(,),HbA2,(,),HbF,(,),95%,2%,1-3.5%,成人血红蛋白分三种,HbA,为主要成人,Hb,非糖化,Hb,糖化,Hb,6-8%,87-89%,血红蛋白,HbA1c,是如何计算的？,A1c%=A1c/A0+HbA1,离子交换色谱所分离的组分解释（非糖尿病样本）,Hb,的组成,% of Hb Hb,与糖类的结合,HbA1a 1%,HbA1,与,1,6-,二磷酸果糖结合而成,HbA1b 1%,丙酮酸与,链氨基末端缬氨酸结合而成,HbF 1%,胎儿血红蛋白,LA1c 1%,血红蛋白形成,HbA1c,之前的中间产物,HbA1c 46% ,链,氨基酸端与葡萄糖结合的产物,HbA0,90%,非糖化血红蛋白,胎儿血红蛋白在胎儿及出生,6,个月以内的新生儿体内为高浓度，,6,个月后基本降为成人水平,妇产科,HbA1c,主要用于糖尿病妊娠的筛查,色谱图举例,HbA1a & HbA1b HbA,的次要组分,LA1c (,希夫碱,),和氨甲基乙酰化的,Hb,HbA1c,A0,总面积为,100,万,-500,万,A1c,结果,小结,什么是,HbA1c,和,HbA0,？,A1c,被糖化后什么电荷增加了？为什么糖化血红蛋白在,A0,峰之前被洗脱下来？,测量糖化血红蛋白为什么要先对样本溶血？,HbA1c,是如何计算的？,成人血红蛋白包括哪几种？,HbF,是什么？浓度高时是否会对,A1c,造成干扰？为什么？,伯乐的糖化试剂能报告,HbF,吗？为什么？,糖化的血红蛋白包括哪几种？,HbA1c,实验室检测方法,常见的,HbA1c,检测方法,主要有三种检测方法,:,1.,离子交换高压液相色谱（,HPLC,）,直接分离,HbA1c,2.,硼酸亲和高压液相色谱,检测产物为总糖化血红蛋白,3.,免疫法,检测产物为,HbA1c,各检测方法的精密度,方法,精密度,电泳,+,免疫法,+,低压液相色谱（,LPLC,）,+,高压液相色谱,（,HPLC,）,+,各检测方法的分析物,HbA,(,a,2,b,2,),HbA,1,HbA,0,HbA,1a,HbA,1b,HbA,1c,非糖化成分,糖化成分,离子交换色谱和免疫法检测物,硼酸亲和色谱检测物,离子交换,HPLC,检测糖化血红蛋白,HbA1c,的金标准方法,DCCT,研究中唯一所采用的,HbA1c,检测方法,NGSP,标准化的参考方法,检测原理：,基于,HbA1c,与其它血红蛋白组分所带,电荷不同,，在,一定的缓冲液离子强度下,可与,分析柱树脂,表面偶联的离子基团有,不同程度,的结合，从而将,HbA1c,与其它组分,(HbA1b, HbA1a,HbF,HbA0),区分开而得到分离。,离子交换,HPLC,检测原理,色谱图的横坐标是时间，纵坐标是信号强度，反映,Hb,各分析峰浓度的高低,被校准的峰被阴影化,被校准的峰被阴影化,离子交换HPLC的特点,采用,离子交换原理,基于,HPLC,的平台,HPLC,方法的试剂组成包括：分析柱、缓冲液、校准品,采用分析柱内填充的离子交换树脂作为固定相，树脂上面偶联了带电荷基团,以可形成,不同离子强度,洗脱梯度的缓冲试剂作为流动相。,溯源性由试剂盒配套的校准品保证,分离效果的影响因素,分析柱内的填充物（颗粒越小，分离效果越好，速度越慢）,分析柱柱长（越长，分离效果越好，速度越慢）,离子交换,HPLC,的优缺点,优点：,1.,全自动,2.,结果准确，可靠,分析物为,HbA1c,。,高分辨率方法可,同时区分常见血红蛋白变异体,，给临床医生已额外的医疗提示,3.,精密度好,CV5%,）,只报,HbA1c,一个数值，不能检测血红蛋白变异体,高血红蛋白,F,样本的,HbA1c,检测结果偏低,严重的黄疸和高脂血影响比色结果,国产糖化试剂的,非标准化问题,小结,糖化血红蛋白的主要检测方法有什么？检测产物分别是什么？,HPLC,的中文全称是什么？,HbA1c,检测的金标准方法是？为什么？,离子交换,HPLC,的检测原理是基于什么的不同？检测试剂应该包括哪些主要的组分？,分析柱中填充的是什么？上面偶联了什么？不同缓冲液的区别是什么？,不同离子交换,HPLC,方法的分辨率一样吗？分辨率的关键影响因素是什么？,糖化血红蛋白检测结果的溯源性由哪种试剂保证？,伯乐糖化产品的色谱图横坐标是什么？纵坐标是什么？,硼酸亲和色谱法的检测原理是基于什么？色谱图有几个峰？分别是什么？,硼酸亲和色谱法是怎么检测,HbA1c,的？,免疫法检测糖化血红蛋白的原理是基于什么反应？,国产免疫法试剂的缺点有哪些？,HbA1c,实验室检测干扰因素,常见检测干扰因素,非方法学特异的干扰因素,改变红细胞寿命,的生理条件可影响,HbA1c,结果,导致检测结果假性偏低,镰刀细胞性贫血,和溶血性贫血,维他命,C,和,E,（抑制糖化作用）,导致检测结果假性偏高,铁缺乏性贫血，脾切除术后,真性红细胞增多症（高原地区）,妊娠期,Hb,浓度偏低，,HbA1c,比正常人偏低,方法学,特异的干扰因素,血红蛋白变异体,(,如,.HbS, HbC,，,HbD, HbE),血红蛋白衍生物,(,乙酰化、甲酰化衍生物等,),长期服用阿斯匹林的病人，体内乙酰化,Hb,高，结果偏高,肾衰病人的氨甲酰基化，导致结果偏高,Schiff,碱（,A1c,中间产物）,某些血糖浓度急剧变化的,1,型糖尿病人，,Schiff,碱升高，,胎儿血红蛋白,HbF,严重的黄疸、高血脂,血红蛋白变异体的发生率,全世界已经发现了超过一千种血红蛋白变异体,全球的血红蛋白变异体发生率的最新数据是,7%*,非洲裔美国人：,HbS,7.8%,；,HbC 2.3%,1988,年,2.5,河南*,2001,年,3.2,丝绸之路*,云南：,4%,云南省的阿昌族,HbE,的发病率为,41.2%,*Kohne E. Hemoglobinopathies: clinical manifestations, diagnosis, and treatment. 1.,Dtsch Arztebl Int.,2011;108(31-32):532-540.,*河南省异常血红蛋白的调查与化学结构的分析研究,新乡医学院学报, 1988, (02) 9-12,*中国丝绸之路地区血红蛋白病的遗传流行病学的特点，人类学学报，,2001,，,V20,变异体对,HbA1c,准确性的影响,Ross J.Molinaro,Targeting HbA1c:standardization and clinical laboratory measurement. MLO Jan,2008,血红蛋白变异体对,HbA1c,结果准确性的影响,对部分方法的检测结果准确性有影响,例：,A0,后有变异体的糖尿病人样本，,HbF,正常,G8,标准模式试剂的检测结果,偏低,1%,G8 Variant,模式试剂（,1.6,分钟,/test,）,G8,标准模式试剂,（,1.0,分钟,/test,）,血红蛋白变异体与血糖监控,血红蛋白变异体会影响红细胞的寿命，红细胞的寿命会影响糖化血红蛋白的生成,这些病人或许应该有不同的糖化血红蛋白的监控时间或者改用其他指标来评估血糖,小结,影响,HbA1c,检测结果的非方法学特异的干扰因素,影响,HbA1c,检测的方法学特异的干扰因素有哪些？,变异体与,A0,没有分离开的情况下会导致检测结果偏高还是偏低？为什么？,变异体与,A1c,没有分离开的情况下会导致检测结果偏高还是偏低？为什么？,血红蛋白变异体会通过两个方面影响糖化血红蛋白，请详述。,临床上对于有血红蛋白变异体的病人有什么建议？实验室应该怎么满足临床的这一需求？,糖化血红蛋白实验室检测指南的要求,2013,年中国糖尿病杂志,8,月刊,分析系统的要求,测定方法要求溯源到,IFCC,参考方法，如,NGSP,认证方法,（,NGSP,认证的有效期是,1,年）,2.,实验室要知晓所选分析系统可能存在的干扰因素,3. POCT,方法的精确性不能满足临床要求，目前不能用于糖尿病的诊断,中国三级医院的实验室检测情况,数据统计于,NCCL,历年室间质评数据,采用,NGSP,标准化方法的实验室占比,81%,HbA1c,Total,GHB,HbA1,在,DCCT,和,UKPD,结果发表之前，美国有,800,个试验室在做,A1c,检测，,CAP,实验调查显示在不同的实验室，用不同的检测方法得出的,A1c,结果存有巨大的差异。,HbA1c,检测的标准化,美国从,1996,年起开展,国家糖化血红蛋白标准化计划,（,NGSP,），在,HbA1c,的检测值一致性方面取得了巨大成功,在,NGSP,的中心实验室所采用的参考方法是,离子交换,HPLC,NGSP,由指导委员会和实验室网络组成。实验室网络包括一级中心参考实验室（,CPRL,）、一级参考实验室（,PRL,）和二级参考实验室（,SRL,）,目的,: 1.,糖化血红蛋白检测项目实现标准化,2.,以使各临床试验室的检测结果与,DCCT,的报告结果具有可比性,(,该,DCCT,试验建立了平均血糖与糖尿病并发症的发病风险之间的关系,),临床实验室,NGSP,网络,厂商,校准品,1,新鲜血,NGSP,程序,(,精密度与偏差,),认证,2,新鲜血,能力比对测试,3,新鲜血,NGSP,标准化对,A1c,检测的贡献,从无序到有序,2008,年调查显示,2000,多家,CAP,实验室间使用不同的检测方法的,CVs,在,1.3-7.1%,之间，基于,A1c,检测结果已经能够有效的标准化,IFCC,标准化,2002,年,IFCC,发表文件，,正式推荐,HbA1c,检测的参考方法为,HPLC-MS(,质谱,),或,HPLC-CE(,毛细管电泳,),校准品为纯化的,HbAo,和,HbA1c,混合物，共,6,个浓度,室内,CV0.47,2.07%,；室间,CV1.35,2.27%,但是，,NGSP,和,IFCC,方法检测,HbA1c,值存在,1%-2%,的差异,IFCC,%HbA1c,2.1,3.2,4.3,5.4,6.4,7.5,8.6,9.7,10.7,NGSP,%HbA1c,4,5,6,7,8,9,10,11,12,偏差,1.9,1.8,1.7,1.6,1.6,1.5,1.4,1.3,1.3,非糖尿病范围,控制目标,需采取治疗措施,各个标准与,IFCC,之间的转换,JDS/JSCC% = 0.927*IFCC% + 1.73,NGSP% = 0.915 * IFCC% + 2.15,Sweden% = 0.989 * IFCC% + 0.88,IFCC,%HbA1c,JDS,%HbA1c,2.0,3.6,4.3,5.6,6.4,7.6,8.6,9.6,10.8,11.6,NGSP,%HbA1c,4,6,8,10,12,HbA1c,的检测必须在世界范围内标准化，包括参考系统和数值报告,IFCC,的参考系统,是唯一的标准化,参考系统,HbA1c,以,IFCC,单位,(mmol/mol),以及转换的,NGSP units (%),报告，使用,IFCC-NGSP,换算公式,需要确保基层糖尿病容易获得,IFCC,和,NGSP,转换公式,杂志编辑和出版物建议采用,SI (IFCC),和,NGSP,双重单位报告,HbA1c,糖化血红蛋白的标准化称谓为,HbA1c,，在指南或教育材料中也可以简写为,A1C,2010,年,HbA1c,标准化第二次全球共识,(ADA,、,EASD,、,IDF,、,IFCC,和,ISPAD),2010 in Annals of Clinical Biochemistry, Clinical Chemistry, Clinical Chemistry and Laboratory Medicine, Diabetes Care, Diabetes Research and Clinical Practice, Diabetologia, Diabetic Medicine and Pediatric Diabetes.,NGSP = 0.09148 * IFCC + 2.152,NGSP,和,IFCC,之间的转换,NGSP = 0.09148 * IFCC + 2.152,糖化血红蛋白,HbA1c,HbA1c,的临床应用,与实验室检测相符相承,实验室,检测标准化,血糖监控指标,糖尿病筛查与诊断,1993,2010,分析系统性能指标要求,报告结果：以,HbA1c,相当于,HbA1c,报告结果，因为只有这一个分析项目才有评估并发症发生的优良数据库。,精密度：,室内,CV3%,以小于,2%,为宜；,测定质量目标：,0.5% HbA1c,准确度：与可接受参考值的差值在,0.5%HbA1c,范围内,准确度验证方法：,1,）,参加室间质评活动,2,）,检测有证参考物质；,3,）,与运行经过认证系统的有资质实验室的测定结果进行比对,注意：没有直接的证据显示其它检查的数据与糖尿病长期并发症风险有关,(,例如：总糖化血红蛋白、果糖胺或糖化血清蛋白,),实验室不精密度对检测结果变异性的影响,6.5%,的,HbA1c,在不同分析不精密度水平下的,95.5%,离散程度,不同室内,CV,对,A1C,分析的影响（,95%,的可信区间）,CV %,6.0% A1C,6.5% A1C,7.0% A1C,2,5.76-6.24,6.24 - 6.76,6.72 - 7.28,3,5.64-6.36,6.11 - 6.89,6.58 - 7.42,5,5.4-6.6,5.85 7.15,6.3 7.7,正常人和病人无法区分,血糖控制好坏无法区分,HbA1c,结果不准确对临床医生判断的影响,正常值与医学决定水平差值小,HbA1c,可诊断,DM,（只有室内,CV3%,才能室间,CV5%,）,为什么,A1c,有严格的精密度要求？,部分仪器的国内外差距巨大,伯乐公司的三款仪器的,CV%,国内外表现一致,而,Primus,、,G7,和,Roche,的仪器国内外精密度差异显著,数据来源：,NCCL,糖化等,7,项室间质评会（,2011,年）,原因？,超柱效,与国际不同试剂型号,日立开放试剂,5.,色谱柱,适用于使用色谱柱方法,实验室应知晓本室所使用色谱柱可检测样品的数量,达到检测数量限应及时更换，不可超量使用,不同方法的色谱柱可检测样品数量不同,异常结果处理,(,需在,NGSP,认证的方法下使用,),HbA1c,检测结果低于,4%,或大于,15%,的样品应进行复查，并与临床医生沟通,如,Bio-Rad D-10,的线性范围是,3.8%-18.5%,对测定结果与临床表现不符的样品应进行进一步检测,结果报告,1.,以,NGSP%,报告，同时报告,IFCC,国际单位制单位（,mmol/mol,）,2.NGSP,与,IFCC,转换公式,(NGSP=0.0915*IFCC+2.152),3.,以,%,为单位的结果后,1,个小数点报告,4.,如临床需要，需提供方法学名称,小结,HbA1c,实验室室内,CV,要求多少？测定质量目标？,为什么,HbA1c,室内精密度要求较高？,HbA1c,实验室检测为何需要标准化？,NGSP,全称、目的,NGSP,认证证书的有效期,HbA1c,标准化共识要求,HbA1c,参考方法？报告的结果？,中国目前要求报告的标准化结果有几个？要求报告单位为哪个？,如何判断,A1c,结果为异常？,谢谢！,