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,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,教学安排：,1. 员工培训,由老师讲解白细胞介素-2生产的理论基础。,分配实操任务：白细胞介素发酵生产。,教学安排：,1,2. 学生模拟组建运营一个白细胞介素-2生产企业，撰写计划书(在理论教学期间完成)。,市场部：白细胞介素-2的结构、功能、用途，白细胞介素-2市场状况与销售预测，竞争对手状况与分析。,技术部：确定白细胞介素-2生产的工艺流程及工艺参数，编制生产操作规程，确定生产车间的布局。,2. 学生模拟组建运营一个白细胞介素-2生产,2,品控部：制定白细胞介素-2的质量标准，生产取样分析操作规程，质量检测标准和操作规程。,总经理：协调监督各部工作，最后拿出完整的计划书。,品控部：制定白细胞介素-2的质量标准，生产,3,3. 计划书实施。,计划书要先经过老师的审核，然后实施。,实施过程中考核操作技能。,实施后及时进行实训报告的撰写也总结。,3. 计划书实施。,4,一蛋白质类药物,1蛋白质类激素,垂体蛋白激素和促性腺激素。,2血浆白蛋白,3蛋白质类细胞生长调节因子,一蛋白质类药物,5,4黏蛋白。,5胶原蛋白。,6碱性蛋白质。,7蛋白酶抑制剂。,4黏蛋白。,6,二、生产用微生物的来源及发酵特性,1 大肠杆菌宿主菌特点,优点： 遗传背景清晰，容易培养；,缺点：形成包涵体；不能修饰蛋白。,表达形式,温度敏感型,乳糖诱导型,二、生产用微生物的来源及发酵特性温度敏感型乳糖诱导型,7,2,酵母宿主菌特性,优点：可对蛋白修饰；蛋白折叠正确；,缺点：生产较慢。,常用甲醇诱导型。,2 酵母宿主菌特性常用甲醇诱导型。,8,3 基因工程菌发酵控制要点,(1) 培养基,兼顾生长与外源基因表达。,(2)接种量,接种量适中，影响生长速度和迟滞期的长短。,3 基因工程菌发酵控制要点,9,(3) 温度,影响酶活性。,(4)溶解氧,维持较高DO值。,(3) 温度,10,(5),诱导时机,微生物生长旺盛后。,(6) pH,根据生长期与生产期的需求控制。,(5) 诱导时机,11,三、白细胞介素的结构与功能,Interleukin，简称IL。,目前批准上市的有IL-2、IL-6、IL-12等。,三、白细胞介素的结构与功能,12,IL-2,分子量为的糖蛋白，它刺激已被特异性抗原或致丝裂因数启动的细胞增殖。重组白介素可用于临床研究。主要用于,肾癌,、,黑色素瘤,和,非何杰金淋巴瘤,有效（）。细胞代表个有单核巨噬细胞，和淋巴细胞特征的异原的细胞体。这些细胞似乎对癌细胞有特异作用。此外，细胞（不象细胞）介导杀伤不受的约束。,IL-2分子量为的糖蛋白，它刺激已被特异,13,四,、生产工艺,1 工艺流程图,四、生产工艺,14,IL-2工程菌,斜面,摇瓶,发酵,制备包涵体,洗涤与裂解,凝胶过滤与复性,检定与包装,IL-2工程菌斜面摇瓶发酵制备包涵体洗涤与裂解凝胶过滤与复性,15,2,生产过程及工艺过程,(1)发酵,工程菌为大肠杆菌，温度敏感型。,种子用LB培养基；,发酵用M9CA培养基，30度10小时，后提高温度至42度，诱导3h。,2 生产过程及工艺过程,16,(2),分离纯化,包涵体制备,离心收集，菌体悬于EDTA溶液中，用超声波破碎细胞，后8000r/min离心，收集沉淀(包涵体和细胞碎片)。,(2) 分离纯化,17,包涵体洗涤及裂解：,用Tris-HCl洗涤3次，离心收集沉淀，用盐酸胍变性，离心收集上清液。,包涵体洗涤及裂解：,18,凝胶过滤及复性：,上清过Sephacryl S-200柱，醋酸液洗脱，收集洗脱峰。,干燥：,用冷冻真空干燥。,凝胶过滤及复性：,19,作业：,1 蛋白药物有哪些种类？,2 大肠杆菌与酵母宿主菌各有何特点和表达类型？,3 白细胞介素-2有何功能与用途？,4 白细胞介素生产工艺如何？,作业：,20,xiexie!,谢谢！,xiexie!谢谢！,21,xiexie!,谢谢！,xiexie!谢谢！,22,
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