细胞免疫荧光技术-ppt课件

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,细胞免疫荧光技术,细胞免疫荧光技术,1,实验目的,拿握免疫荧光技术的基本原理,熟悉细胞免疫樊光技术的方法,了解在免疫细胞化学技求中如何,获得好的尖验结果,实验目的,2,实验原理,原位检测,显示荧光,抗原抗体特异反应,激发光,间接法,荧光素标记,的抗抗体,抗原,Vinculin,Hela细胞,间接荧光抗体染色法示意图,实验原理,3,实验用品,试荆,材料:,固定:4%PFA,Hela细胞,細胞通透:0.2% TritonX,細胞培养皿,封闭试剂:10%正常山羊血清,一抗:小鼠娠抗 vinculin单克隆抗体,仪景,二抗: Alexa fluor55:记的山羊抗小鼠lgG类光显微镜,DAP(4,6-二滕基2-苯基吲噪),PBS洗涤级冲漩:PH74,实验用品,4,实验步骤,细胞制备和细胞圄定,将缃胞備在,将细胞墙养,加入4%PFA,24孔板中,垩所需密度,圄定10min,或保存,PBS洗涤(,PBS洗潺一,实验步骤,5,实验步骤,二,细胞免疫荧光|CC染色,Y入一我,加入二抗,如入DAPI复桑,PBS,PBS,PBS,洗涤,0.2%,TritonX,封闭,4过夜371-2小肘375,光显微镜,10min,金30min,现塞,实验步骤,6,实验结票上命,三,观察,human hela cells,实验结票上命,7,实验中应注意的问题,细胞不要铺的过密:60-70%,防止细胞污染,固定附间不要太长,一般10-30min,Trion处理附间不宜过长,膜昼白可不必处理,选择合适的封闭漩,二抗孵育后,一定要洗干净,必要附用恒温摇床摇洗,实验中应注意的问题,8,免疫细胞化学技术,免疫荧光技术,标记物,使抗体或抗原,2.免疫酶技术,抗体复合物在,各种显傲镜下,3.免疫亲和技术,可见的物质,4.胶体金技术,免疫细胞化学技术,9,免疫细胞化学技术注意事项,游,选择合适的方法,材料要留好,选择抗体,选择标记酶,封闭漩的选择,设定对照实验,免疫细胞化学技术注意事项,10,细胞免疫荧光技术-ppt课件,11,细胞免疫荧光技术-ppt课件,12,细胞免疫荧光技术-ppt课件,13,细胞免疫荧光技术-ppt课件,14,细胞免疫荧光技术-ppt课件,15,细胞免疫荧光技术-ppt课件,16,细胞免疫荧光技术-ppt课件,17,