临床酶学检验技术课件

第第 四四 章章临床酶学检验技术临床酶学检验技术全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术教学目标与要求教学目标与要求掌握掌握1.酶活性的国际单位定义酶活性的国际单位定义2.酶活性测定的连续监测法和定时法的概念酶活性测定的连续监测法和定时法的概念3.连续监测法的计算和方法设计连续监测法的计算和方法设计4.酶活性测定最适条件的概念和意义酶活性测定最适条件的概念和意义5.ALT、AST、ALP、GGT、LD、CK测定参考方法测定参考方法 原理和评价原理和评价2教学目标与要求掌握1.酶活性的国际单位定义2全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术教学目标与要求教学目标与要求熟悉熟悉1.酶动力学参数的含义酶动力学参数的含义2.电泳法和免疫抑制法测定同工酶的原理电泳法和免疫抑制法测定同工酶的原理3.AMY、CHE的测定原理的测定原理3教学目标与要求熟悉1.酶动力学参数的含义3全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术教学目标与要求教学目标与要求了解了解 1.酶蛋白质量测定的优点酶蛋白质量测定的优点2.定时法测定临床常用诊断酶的原理和评价定时法测定临床常用诊断酶的原理和评价3.同工酶的其他检测方法同工酶的其他检测方法4教学目标与要求了解1.酶蛋白质量测定的优点4全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶的概念：酶的概念：人卫第六版 酶（酶（enzyme）是由活细胞合成的、对其特异底物）是由活细胞合成的、对其特异底物起高效催化作用的蛋白质，是机体内催化各种代谢反起高效催化作用的蛋白质，是机体内催化各种代谢反应最主要的生物催化剂应最主要的生物催化剂(biocatalyst)。人卫第七版 生物体内的酶（生物体内的酶（enzyme）是对其特异底物起高效是对其特异底物起高效催化作用的蛋白质和核糖核酸，前者是是机体内催化催化作用的蛋白质和核糖核酸，前者是是机体内催化各种代谢反应最主要的催化剂。各种代谢反应最主要的催化剂。概述概述5酶的概念：概述5全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶促反应表示为：酶促反应表示为：底物底物：Subestrate：S 产物：产物：Product：P 酶酶 ：Enzyme：E概述概述6酶促反应表示为：概述6全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶的化学本质：酶的化学本质：绝大多数的酶是蛋白质，称绝大多数的酶是蛋白质，称这类酶为这类酶为enzyme 具有催化功能的具有催化功能的RNA被称为核酶被称为核酶(ribozyme)具有催化功能的具有催化功能的DNA被称为脱氧核酶被称为脱氧核酶(deoxyribozyme)概述概述7酶的化学本质：概述7全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶的研酶的研究历史：究历史：1926年年J.B.Sumner首次从刀豆制备出脲酶结晶，证首次从刀豆制备出脲酶结晶，证明其为蛋白质，并提出酶的本质就是蛋白质的观点明其为蛋白质，并提出酶的本质就是蛋白质的观点 1982年年T.Cech发现了第发现了第1个有催化活性的天然个有催化活性的天然RNAribozyme（核酶），以后（核酶），以后Altman和和Pace等又等又陆续发现了真正的陆续发现了真正的RNA催化剂催化剂 1995年，年，Jack W.Szostak 研究室首先报道了具有研究室首先报道了具有DNA连接酶活性的连接酶活性的DNA片段，称之为脱氧核酶片段，称之为脱氧核酶(deoxyribozyme)概述概述8酶的研究历史：概述8全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术临床酶学临床酶学 高诊断灵敏度高诊断灵敏度 高诊断特异性高诊断特异性 临床酶学检验技术临床酶学检验技术 酶活性测定酶活性测定 酶蛋白质量测定酶蛋白质量测定概述概述9临床酶学概述9全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术临床酶学的历史：临床酶学的历史：1908年年Wohlgemuth用尿淀粉酶（用尿淀粉酶（AMY）诊断急性胰腺炎）诊断急性胰腺炎1930s，LPS、ALP、ACP开始用于临床开始用于临床定时法定时法1950s，Karmen、La Due、Wroblewski等人建立了分光光等人建立了分光光度法，度法，ALT、AST、CK、LD等酶活性测定应用于肝胆等酶活性测定应用于肝胆疾病、心脏疾病的诊断疾病、心脏疾病的诊断连续监测法连续监测法1970s，同工酶和酶蛋白质量测定同工酶和酶蛋白质量测定1980s，同工酶亚型，同工酶亚型概述概述10临床酶学的历史：概述10全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术目录目录酶学基本知识酶学基本知识1血清酶变化的生理病理机制血清酶变化的生理病理机制2酶含量的表示方法酶含量的表示方法3酶催化活性浓度测定的理论基础酶催化活性浓度测定的理论基础4酶活性测定的影响因素与最适条件的确定酶活性测定的影响因素与最适条件的确定5同工酶检测技术同工酶检测技术6目前常用诊断酶的酶活性测定目前常用诊断酶的酶活性测定7小结与展望小结与展望8返回总目录返回总目录11目录酶学基本知识1血清酶变化的生理病理机制2酶含量的表示方法全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶的结构和分类酶的结构和分类一一酶的特性和应用酶的特性和应用二二酶促反应动力学酶促反应动力学三三第一节第一节 酶学基本知识酶学基本知识12酶的结构和分类一酶的特性和应用二酶促反应动力学三第一节酶全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶的结构和分类酶的结构和分类一一辅因子（一）（一）酶酶的的组组成成单纯酶单纯酶：脲酶、蛋白酶、淀粉酶、核糖核酸酶等：脲酶、蛋白酶、淀粉酶、核糖核酸酶等结合酶酶蛋白（apoenzyme）（cofacter)辅酶辅酶（coenzyme)辅辅基基(prosthetic group)全全酶酶(holoenzyme）=酶蛋白酶蛋白+辅因子辅因子全全酶酶13酶的结构和分类一辅因子（一）酶单纯酶：脲酶、蛋白酶、淀粉酶、全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶的结构和分类酶的结构和分类一一（二）（二）酶酶的的分分子子形形式式单体酶：只有单一的三级结构蛋白质构成寡聚酶：由两个以上具有三级结构的亚基聚合而成多酶复合体：由几个功能相关的酶嵌合而成的复合体(oligomeric enzyme)(multienzyme system)（monomeric enzyme)14酶的结构和分类一（二）酶单体酶：只有单一的三级结构蛋白质构成全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术乳酸脱氢酶同工酶乳酸脱氢酶同工酶115乳酸脱氢酶同工酶115全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术（三）（三）酶酶的的结结构构“非”必需基团必需基团结合基团：催化基团：活性中心：酶分子中直接和底物结合并起催化反应活性中心：酶分子中直接和底物结合并起催化反应的空间局限（部位）的空间局限（部位）酶的结构和分类酶的结构和分类一一(Binding site)(Binding site)(Catalytic site)决定酶的专一性决定酶所催化反应的性质（活性中心）16（三）“非”必需基团必需基团结合基团：催化基团：活性中心：酶全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶的结构和分类酶的结构和分类结合基团结合基团一一17酶的结构和分类结合基团一17全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶的结构和分类酶的结构和分类活性中心活性中心一一牛牛胰胰蛋蛋白白酶酶 18酶的结构和分类活性中心一牛胰蛋白酶18全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶的特性和应用酶的特性和应用二二酶的特性酶的特性（一）化学本质：除核酶、脱氧核酶以外，为蛋白质（一）化学本质：除核酶、脱氧核酶以外，为蛋白质（二）高效催化性（二）高效催化性（三）高度特异性（三）高度特异性（四）可调节性（四）可调节性（五）不稳定性（五）不稳定性19酶的特性和应用二酶的特性19全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶的特性酶的特性高效催化性高效催化性二二20酶的特性高效催化性二20全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术反应总能量改变反应总能量改变 非催化反应活化能非催化反应活化能 酶促反应酶促反应 活化能活化能 一般催化剂催一般催化剂催化反应的活化能化反应的活化能 能能量量反反 应应 过过 程程 底物底物 产物产物 酶促反应活化能的改变酶促反应活化能的改变 酶的特性酶的特性高效催化性的机理高效催化性的机理二二21反应总能量改变非催化反应活化能酶促反应一般催化剂催能全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术2222全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶的特性酶的特性高效催化性的机理高效催化性的机理二二collision：碰撞 23酶的特性高效催化性的机理二collision：碰撞全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶的特性酶的特性高效催化性的机理高效催化性的机理二二24酶的特性高效催化性的机理二24全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶的特性酶的特性高效催化性的机理高效催化性的机理二二25酶的特性高效催化性的机理二25全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术一种酶仅作用于一种或一类化合物，或一定的化学键，催化一定的化学反应并生成一定的产物。酶的这种特性称为酶的特异性或专一性。酶的特性酶的特性高度特异性高度特异性(specificity)二二26一种酶仅作用于一种或一类化合物，或一定的化学键，催化一定的化全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术绝对特异性绝对特异性(absolute specificity)：只能作用于特定结构：只能作用于特定结构的底物，进行一种专一的反应，生成一种特定结构的产的底物，进行一种专一的反应，生成一种特定结构的产物物。相对特异性相对特异性(relative specificity)：作用于一类化合物或：作用于一类化合物或一种化学键。一种化学键。立体结构特异性立体结构特异性(stereo specificity)：作用于立体异构体：作用于立体异构体中的一种。中的一种。酶的特性酶的特性高度特异性高度特异性(specificity)二二27绝对特异性(absolutespecificity)：只能全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶的特性酶的特性高度特高度特异性异性(specificity)二二mol/L28酶的特性高度特异性(specificity)二mol/全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术对酶生成与降解量的调节对酶生成与降解量的调节酶催化效率的调节酶催化效率的调节通过改变底物浓度的调节通过改变底物浓度的调节广义上讲广义上讲:多酶体系、关键酶（限速酶）多酶体系、关键酶（限速酶）酶的特性酶的特性可调节性可调节性二二29对酶生成与降解量的调节酶的特性可调节性二29全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶促反应在温和条件下进行加热、过酸、过碱、重金属都可以使酶活性降低（失活）酶的特性酶的特性不稳定性不稳定性二二30酶促反应在温和条件下进行酶的特性不稳定性二30全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术改变改变 pH 急速急速 加加热热 加入加入 变性剂变性剂 加入加入金属鳌合剂金属鳌合剂 加入加入酶抑制剂酶抑制剂 抑制抑制剂剂 大量大量稀释稀释TCABoilingSDSEDTAPMSF-化学物理化学化学化学物理酶不稳定性酶不稳定性终止酶促反应的方法终止酶促反应的方法补充补充PMSF：Phenylmethanesulfonylfluoride，苯甲基磺酰氟，用于抑制蛋白酶 31改变pHTCA化学酶不稳定性终止酶促反应的方法补充全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术 添加物添加物 作用作用一般使用一般使用浓度浓度Tween-20,Triton X-100NaN3(sodium azide)EDTAb b-MercaptoethanolDithiothreitol(DTT or DTE)BSA(bovine serum albumin)Glycerol,glucosePMSF,TPCK,TLCK,benzamidine除去除去重金属重金属 抑抑菌剂菌剂防冻剂防冻剂蛋白蛋白酶抑制剂酶抑制剂表面活性剂表面活性剂抗氧化抗氧化剂剂抗氧化抗氧化剂剂稳定剂稳定剂0.11mmol/L0.01%50%微量微量0.50.05%110mmol/L15mmol/L0.110mg/mL酶不稳定性酶不稳定性缓冲缓冲液常用的添加物液常用的添加物补充补充32添加物作用一般使用浓度Tween-20,Trit全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术添加物添加物TLCK：对甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基酮TPCK：L-苯甲磺酰苯丙氨酰氯甲酮Benzamidine苄眯-Mercaptoethanol：-巯基乙醇Dithiothreitol(DTT)：二硫苏糖醇 补充补充33添加物TLCK：对甲苯磺酰-L-赖氨酸氯甲基酮补充33全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术表4-1 酶在医学检验中的应用举例主要特性应用技术举例化学本质是蛋白质化学本质是蛋白质高效催化性、高度特异性、高效催化性、高度特异性、反应条件温和反应条件温和催化剂反应前后没有变化催化剂反应前后没有变化形成中间络合物形成中间络合物酶催化活性与酶量成正比酶催化活性与酶量成正比高效催化性高效催化性酶蛋白定量酶法测定代谢物固相酶技术抗体酶诊断酶学ELISACK-MB质量、前列腺特异抗原质量、前列腺特异抗原己糖激酶法测定血糖己糖激酶法测定血糖葡萄糖氧化酶膜电极测血糖葡萄糖氧化酶膜电极测血糖抗病毒疫苗抗病毒疫苗ALT、CKPOD、ALP 酶的特性和应用酶的特性和应用二二34表4-1酶在医学检验中的应用举例化学本质是蛋白质酶蛋白定全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术临床应用酶临床应用酶ECEC编号编号习惯用名习惯用名英语缩写英语缩写ECEC编号编号习惯用名习惯用名英语缩写英语缩写1.1.1.271.1.1.27乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶LDLD、LDHLDH2.7.3.22.7.3.2肌酸激酶肌酸激酶CKCK、CPKCPK1.1.1.371.1.1.37苹果酸脱氢酶苹果酸脱氢酶MDMD、MDHMDH3.1.1.33.1.1.3脂肪酶脂肪酶LPSLPS1.1.1.411.1.1.41异柠檬酸脱氢酶异柠檬酸脱氢酶ICDICD、ICDHICDH3.1.1.83.1.1.8胆碱酯酶胆碱酯酶CHECHE1.1.1.491.1.1.496-6-磷酸葡萄糖脱氢酶磷酸葡萄糖脱氢酶G6PDHG6PDH3.1.3.13.1.3.1碱性磷酸酶碱性磷酸酶ALPALP、AKPAKP1.4.1.31.4.1.3谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶GLDGLD、GLDHGLDH3.1.3.23.1.3.2酸性磷酸酶酸性磷酸酶ACPACP1.4.3.41.4.3.4单氨氧化酶单氨氧化酶MODMOD3.1.3.53.1.3.55-5-核苷酸酶核苷酸酶5-NT5-NT2.1.3.32.1.3.3鸟氨酸氨甲酰基转移酶鸟氨酸氨甲酰基转移酶OCTOCT3.2.1.13.2.1.1-淀粉酶淀粉酶AMYAMY、AMSAMS2.3.2.22.3.2.2-谷氨酰基转移酶谷氨酰基转移酶-GT-GT、GGTGGT3.2.1.303.2.1.30-N-N-乙酰乙酰(基基)-)-D D氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶NAGNAG2.4.1.12.4.1.1糖原磷酸化酶糖原磷酸化酶GPGP3.2.1.513.2.1.51-L-L-岩藻糖苷酶岩藻糖苷酶-FU-FU、AFUAFU2.5.1.182.5.1.18谷胱甘肽转移酶谷胱甘肽转移酶GSTGST3.4.23.13.4.23.1亮氨酸氨基肽酶亮氨酸氨基肽酶LAPLAP2.6.1.12.6.1.1门冬氨酸氨基转移酶门冬氨酸氨基转移酶ASTAST、GOTGOT4.1.2.134.1.2.13果糖二磷酸醛缩酶果糖二磷酸醛缩酶ALDALD2.6.1.22.6.1.2丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶ALTALT、GPTGPT酶的命名、分类及编号酶的命名、分类及编号补充补充35临床应用酶EC编号习惯用名英语缩写EC编号习惯用名英语缩写1全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶促反应动力学酶促反应动力学（KiKinetics of Enzyme-Catalyzed Reactionnetics of Enzyme-Catalyzed Reaction）三三（一）米氏方程（一）米氏方程（二）酶促反应进程（二）酶促反应进程（三）动力学参数（三）动力学参数（四）酶偶联反应（四）酶偶联反应36酶促反应动力学三（一）米氏方程36全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术（一）米氏方程19131913年，德国化学年，德国化学家家Michaelis和和Menten根根据中间产物据中间产物学说对酶促反映的动力学进行研究，推导出了表示整学说对酶促反映的动力学进行研究，推导出了表示整个反应中底物浓度和反应速度关系的著名公式，称为个反应中底物浓度和反应速度关系的著名公式，称为米氏方程。米氏方程。酶促反应动力学酶促反应动力学三三37（一）米氏方程酶促反应动力学三37全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术3838全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术（二）酶促反应进程（二）酶促反应进程1.1.延滞期延滞期 是指酶促反应开始至达到最大反应速度所需要是指酶促反应开始至达到最大反应速度所需要的时间的时间2.2.线性期线性期 是指酶促反应速度保持恒定的时期，不受底物是指酶促反应速度保持恒定的时期，不受底物浓度的影响浓度的影响3.3.非线性期非线性期 随着反应时间的延长，底物消耗越来越明显，随着反应时间的延长，底物消耗越来越明显，酶促反应速度明显下降，偏离线性而进入非线性期酶促反应速度明显下降，偏离线性而进入非线性期 酶促反应进程好似酶促反应进程好似100m径赛径赛酶促反应动力学酶促反应动力学三三39（二）酶促反应进程酶促反应动力学三39全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术图图4-1 4-1 酶促反应时间进程曲线酶促反应时间进程曲线酶促反应动力学酶促反应动力学三三浓浓度度(C)40图4-1酶促反应时间进程曲线酶促反应动力学三浓40全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术（三）动力学参数（三）动力学参数1.初速度初速度(initial velocity)指在反应最初阶段底物的消耗量很指在反应最初阶段底物的消耗量很小（一般在小（一般在5以内）时的反应速度，用以内）时的反应速度，用v0来表示来表示2.最大反应速度最大反应速度(maximum velocity)指当酶的结合位点与底物指当酶的结合位点与底物结合饱和时的反应速度，通常用结合饱和时的反应速度，通常用V或或Vmax来表示来表示 3.米氏常数米氏常数（Michaelis constant，Km）指酶促反应速度为）指酶促反应速度为最大反应速度一半时最大反应速度一半时的底物浓度，单位同底物浓度的底物浓度，单位同底物浓度酶促反应动力学酶促反应动力学三三41（三）动力学参数酶促反应动力学三41全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术（四）酶偶联反应（四）酶偶联反应 Ex：待测酶：待测酶 Ea：辅助酶：辅助酶 Ei：指示酶：指示酶 酶促反应动力学酶促反应动力学三三42（四）酶偶联反应酶促反应动力学三42全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶促反应动力学酶促反应动力学三三图4-2IFCC推荐法测定ALT的时间进程曲线图图4-2 IFCC推荐法测定推荐法测定ALT的时间进程曲线的时间进程曲线43酶促反应动力学三图4-2IFCC推荐法测定ALT的时间进全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶偶联反应进程酶偶联反应进程1.1.预孵育期预孵育期2.2.延滞期延滞期 3.3.线性期线性期 4.4.非线性期非线性期酶促反应动力学酶促反应动力学三三返回章目录返回章目录44酶偶联反应进程酶促反应动力学三返回章目录44全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术血清酶的来源与去路血清酶的来源与去路一一血清酶变化的生理机制血清酶变化的生理机制二二血清酶变化的病理机制血清酶变化的病理机制三三第二节第二节 血清酶变化的生理病理机制血清酶变化的生理病理机制45血清酶的来源与去路一血清酶变化的生理机制二血清酶变化的病理机全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术（一）按血清酶的来源分（一）按血清酶的来源分 1.1.血浆固有酶血浆固有酶 2.2.非血浆固有酶非血浆固有酶 外分泌酶外分泌酶 细胞酶细胞酶 注：除凝血酶和纤溶酶外，血清酶与血浆酶基本一致注：除凝血酶和纤溶酶外，血清酶与血浆酶基本一致（二）按诊断特异性分（二）按诊断特异性分非器官特异酶非器官特异酶器官特异酶器官特异酶血清酶的来源与去路血清酶的来源与去路一一46（一）按血清酶的来源分血清酶的来源与去路一46全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术（三）血清酶的去路（三）血清酶的去路 1.肾小球滤过从尿液中排出肾小球滤过从尿液中排出 2.网状内皮系统清除网状内皮系统清除 3.血管内失活血管内失活或灭活或灭活血清酶的来源与去路血清酶的来源与去路一一47（三）血清酶的去路血清酶的来源与去路一47全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术1.1.性别性别2.2.年龄年龄 3.3.饮食饮食 4.4.运动运动 5.5.妊娠妊娠 血清酶变化的生理变异血清酶变化的生理变异二二481.性别血清酶变化的生理变异二48全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术1.1.酶合成异常酶合成异常 2.2.细胞内酶的渗漏细胞内酶的渗漏 3.3.酶进入血液的方式酶进入血液的方式 4.4.其他其他血清酶变化的病理机制血清酶变化的病理机制三三返回章目录返回章目录491.酶合成异常血清酶变化的病理机制三返回章目录49全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶活性浓度表示法酶活性浓度表示法一一酶蛋白质量浓度表示法酶蛋白质量浓度表示法二二第三节第三节 酶含量的表示方法酶含量的表示方法50酶活性浓度表示法一酶蛋白质量浓度表示法二第三节酶含量的表全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术（一）（一）酶活性单位酶活性单位 1.惯用单位惯用单位 2.国际单位：国际单位：在特定条件下在特定条件下，1分钟能转化分钟能转化1微摩尔底物（微摩尔底物（mol/min）的酶量为一个）的酶量为一个“国际单位国际单位”3.Katal单位：即每秒钟转化单位：即每秒钟转化1个摩尔底物（个摩尔底物（mol/s）的）的酶量酶量酶活性浓度表示法酶活性浓度表示法一一51（一）酶活性单位 酶活性浓度表示法一51全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术（二）（二）酶活性浓度酶活性浓度 指单位体积指单位体积样品中的酶活性单位，样品中的酶活性单位，习惯用习惯用U/L来表示来表示体液体液中酶活性即酶活性浓度中酶活性即酶活性浓度（三）正常上限升高倍数（三）正常上限升高倍数（upper limits of normal,ULN)：是：是指用测得的酶活性结果指用测得的酶活性结果除以参考范围上限除以参考范围上限 酶活性浓度表示法酶活性浓度表示法一一52（二）酶活性浓度酶活性浓度表示法一52全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术以mg/或g/来表示优点：优点：灵敏度高灵敏度高特异性高特异性高可测定无活性的酶可测定无活性的酶与酶活性测定一起，计算免疫比活性，与酶活性测定一起，计算免疫比活性，可能提供新的资料和信息可能提供新的资料和信息在同工酶测定中更有价值在同工酶测定中更有价值酶蛋白质量浓度表示法酶蛋白质量浓度表示法二二返回章目录返回章目录53以mg/或g/来表示酶蛋白质量浓度表示法二全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术定时法定时法（Fixed time assay）一一连续监测法连续监测法（Continuous monitoring assay）二二第四节第四节 酶催化活性浓度测定的理论基础酶催化活性浓度测定的理论基础54定时法（Fixedtimeassay）一连续监测法（C全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术酶含量测定酶含量测定酶蛋白质量酶蛋白质量酶活性测定酶活性测定定时法定时法连续监测法连续监测法55酶含量测定酶蛋白质量酶活性测定定时法连续监测法55全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术（一）概念（一）概念 将酶与底物在特定条件（缓冲液、温度等）下孵育，经将酶与底物在特定条件（缓冲液、温度等）下孵育，经过一定时间后，用过一定时间后，用终止液终止反应终止液终止反应，通过化学或生物化学的，通过化学或生物化学的方法测出底物或方法测出底物或产物的产物的总变化量总变化量，除以时间即可计算出底物，除以时间即可计算出底物消耗速度（消耗速度（dS/min）或产物生成速度（）或产物生成速度（dP/min），将），将速度换算为速度换算为mol/min便是以国际单位表示的便是以国际单位表示的酶活性。酶活性。定时法定时法一一56（一）概念定时法一56全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术（二）计算（二）计算 定时法定时法一一57（二）计算定时法一57全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术定时法定时法无无机机P酚酚氨氨萘胺萘胺NAD(P)HH2O2酮酸酮酸淀粉淀粉ALT、AST、LDALP、ACP、5NTALP、ACPADA、脲酶、脲酶CK、GGTLD、GLD、G6PDALTAMS（三）定时法的方法设计（三）定时法的方法设计显色物显色物项目项目58定时法无机P酚氨萘胺NAD(P)HH2O2酮酸淀粉ALT、A全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术（一）概念（一）概念 将酶与底物在特将酶与底物在特定条件（缓冲液、温度等）下孵育，定条件（缓冲液、温度等）下孵育，每隔一定时间（每隔一定时间（2s 60s）连）连续测定酶促反应过程中某一底续测定酶促反应过程中某一底物或产物的特征信号的变化，从而计算出每分钟的信号物或产物的特征信号的变化，从而计算出每分钟的信号变变化速率化速率。连续监测法连续监测法二二59（一）概念连续监测法二59全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术6060全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术连续监测法连续监测法二二61连续监测法二61全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术连续监测法连续监测法二二62连续监测法二62全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术连续监测法连续监测法二二（二）计算（二）计算63连续监测法二（二）计算63全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术连续监测法连续监测法二二64连续监测法二64全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术连续监测法连续监测法色素原底物色素原底物NAD(P)H系统系统过氧化物酶系统过氧化物酶系统其他其他ALP、ALP、GGT、GPDA、AMS、AFULD、G6PD、HBDH、AD、SD、GLD、ALT、AST、CK、ADALPS、ADA、5-NTCHE、ACP（三）连续监测法的方法设计（三）连续监测法的方法设计65连续监测法色素原底物NAD(P)H系统过氧化物酶系统其他AL全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术定时法定时法定时法定时法连续监测法连续监测法连续监测法连续监测法测总变化量，平均速度测总变化量，平均速度测总变化量，平均速度测总变化量，平均速度测速率测速率测速率测速率终止酶促反应终止酶促反应终止酶促反应终止酶促反应酶促反应一直进行酶促反应一直进行酶促反应一直进行酶促反应一直进行多用化学方法检测多用化学方法检测多用化学方法检测多用化学方法检测多用酶偶联反应多用酶偶联反应多用酶偶联反应多用酶偶联反应定时法与连续监测法的区别定时法与连续监测法的区别含延滞期或非线性期含延滞期或非线性期含延滞期或非线性期含延滞期或非线性期只计算线性期速度只计算线性期速度只计算线性期速度只计算线性期速度返回章目录返回章目录66定时法连续监测法测总变化量，平均速度测速率终止酶促反应酶促反全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术方法因素的影响方法因素的影响 一一测定条件的影响与最适条件的确定测定条件的影响与最适条件的确定 二二第五节第五节 酶活性测定的影响因素与最适条件的确定酶活性测定的影响因素与最适条件的确定 其他因素对测定结果影响其他因素对测定结果影响三三67方法因素的影响一测定条件的影响与最适条件的确定二第五节全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术电位滴定法电位滴定法浊度法浊度法时间滴定法时间滴定法比色法比色法分光光度法分光光度法生物传感器生物传感器荧光荧光按监测手段按监测手段各类终点法各类终点法LPSNAD(P)HAMSCHENAD(P)HALT方法因素的影响方法因素的影响 一一68电位滴定法浊度法时间滴定法比色法分光光度法生物传感器荧光按监全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术方法因素的影响方法因素的影响 一一终点法终点法测产物测产物测底物测底物连续监测法连续监测法按监测对象按监测对象按监测速度方式按监测速度方式69方法因素的影响一终点法测产物测底物连续监测法按监测对象按监全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术方法因素的影响方法因素的影响 一一样品启动样品启动逆向逆向正向正向底物启动底物启动按反应方向按反应方向按启动类型按启动类型70方法因素的影响一样品启动逆向正向底物启动按反应方向按启动类全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术 根据产物生成量或底物消耗量根据产物生成量或底物消耗量(C)与酶活性与酶活性(v)、酶量（、酶量（E)、反应时间、反应时间(t)成正比例的关系。成正比例的关系。如淀粉酶（碘淀粉显色原理）测定又可分为：如淀粉酶（碘淀粉显色原理）测定又可分为：样品稀释法样品稀释法-改变改变E 时间滴定法时间滴定法-改变改变t 碘淀粉比色法碘淀粉比色法-改变改变v方法因素的影响方法因素的影响 一一71根据产物生成量或底物消耗量(C)与酶活性(v)、酶全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术1、产物生成类：根据产物生成量与酶活性、酶量、产物生成类：根据产物生成量与酶活性、酶量、反应时间成正比例的关系，反应时间成正比例的关系，从无到有从无到有，从少到多进，从少到多进行测定，检测敏感度高。行测定，检测敏感度高。2、底物消耗类：测定底物，、底物消耗类：测定底物，从多到少从多到少，而底物消耗，而底物消耗不明显，测定误差大，检测范围窄。如碘淀粉比色不明显，测定误差大，检测范围窄。如碘淀粉比色法。法。方法因素的影响方法因素的影响 一一721、产物生成类：根据产物生成量与酶活性、酶量、反应时间成正全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术 指反应所需的试剂先混合在一起，然后加入样品，依指反应所需的试剂先混合在一起，然后加入样品，依靠样品中的待测酶来启动酶促反应，只在延滞期去除部分靠样品中的待测酶来启动酶促反应，只在延滞期去除部分干扰物，抗干扰能力等同单一试剂剂型，干扰物，抗干扰能力等同单一试剂剂型，需要注意的是某需要注意的是某些双试剂剂型是基于试剂稳定性考虑，并没有单独将底物些双试剂剂型是基于试剂稳定性考虑，并没有单独将底物作为第二试剂，也起不到消除内源性干扰的作用。作为第二试剂，也起不到消除内源性干扰的作用。样品启动模式样品启动模式 方法因素的影响方法因素的影响 一一73指反应所需的试剂先混合在一起，然后加入样品，依靠全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术 指样品先与部分试剂（缺乏某个底物）预孵育一定时指样品先与部分试剂（缺乏某个底物）预孵育一定时间，部分消除某些内源性、外源性干扰物以及杂酶的副反间，部分消除某些内源性、外源性干扰物以及杂酶的副反应，然后加入这个底物，启动应，然后加入这个底物，启动待测酶酶促反应。需要双试待测酶酶促反应。需要双试剂剂型，剂剂型，IFCC推荐法多采用底物推荐法多采用底物启动模式。启动模式。底物启动模式底物启动模式 方法因素的影响方法因素的影响 一一74指样品先与部分试剂（缺乏某个底物）预孵育一定时间，部全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术测定条件的影响与最适条件的确定测定条件的影响与最适条件的确定二二最适条最适条件（件（optimum condition）的）的概念：概念：是指能满足酶发挥最大催化效率所需的条件。是指能满足酶发挥最大催化效率所需的条件。75测定条件的影响与最适条件的确定二最适条件（optimumc全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术1.1.合适的底物和最适底物浓度合适的底物和最适底物浓度2.2.理想的缓冲液种类和最适离子强度；反应液的最适理想的缓冲液种类和最适离子强度；反应液的最适pHpH3.3.最适反应温度最适反应温度4.4.合适的辅因子、激活剂浓度；酶偶联反应还需要确定指示合适的辅因子、激活剂浓度；酶偶联反应还需要确定指示酶和辅助酶的用量酶和辅助酶的用量5.5.合理的测定时间，延滞期应尽量短暂并有足够的线性期合理的测定时间，延滞期应尽量短暂并有足够的线性期6.6.合适的样品与反应试剂的比例；足够的检测范围合适的样品与反应试剂的比例；足够的检测范围7.7.尽量去除各种抑制剂尽量去除各种抑制剂测定条件的影响与最适条件的确定测定条件的影响与最适条件的确定二二761.合适的底物和最适底物浓度测定条件的影响与最适条件的确定二全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术底物选择的原则是：底物选择的原则是：选选择择Km最最小的底物小的底物要有足够的溶解度要有足够的溶解度酶对底物特异性高酶对底物特异性高底物稳定性好底物稳定性好较高临床价值的底物较高临床价值的底物 测定条件的影响与最适条件的确定测定条件的影响与最适条件的确定二二1.底物的确定底物的确定77底物选择的原则是：测定条件的影响与最适条件的确定二1.底物的全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术底物浓度的确定：底物浓度的确定：单底物酶促反单底物酶促反应：选择应：选择S10Km20Km，此时反，此时反应速度达到最大反应速度应速度达到最大反应速度90.9%95.2%双底物酶促反应：双底物酶促反应：A/B之间的关系是一条双曲线，之间的关系是一条双曲线，有无数组数据。采取最经济原则。有无数组数据。采取最经济原则。F（一般选（一般选90%或或95%）测定条件的影响与最适条件的确定测定条件的影响与最适条件的确定二二1.底物的确定底物的确定78底物浓度的确定：测定条件的影响与最适条件的确定二1.底物的确全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术缓冲液种类的选择原则：缓冲液种类的选择原则：尽量使用活性缓冲液尽量使用活性缓冲液 pKapKa与测定与测定pHpH比较接近，有足够的缓冲容量比较接近，有足够的缓冲容量 纯度高，不含有抑制酶活性的杂质纯度高，不含有抑制酶活性的杂质 温度依数性小温度依数性小 对酶有稳定作用对酶有稳定作用 测定条件的影响与最适条件的确定测定条件的影响与最适条件的确定二二2.缓冲液的确定缓冲液的确定79缓冲液种类的选择原则：测定条件的影响与最适条件的确定二2.缓全国高等医药院校医学检验专业规划教材全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验临床生物化学检验 （第二版）（第二版）第四章第四章 临床酶学检验技术临床酶学检验技术缓冲液离子强度的确定：缓冲液离子强度的确定：离子强度越高，电解质干扰酶和底物结合，酶活性将离子强度越高，电解质干扰酶和底物结合，酶活性将逐步下降逐步下降，能满足缓冲容量的要求即可。，能满足缓冲容量的要求即可。大多数酶活性测定的离子强度在大多数酶活性测定的离子强度在0.1mmol/L左右左右 ALP用用AMP缓冲液，离子强度达到缓冲液，离子强度达到0.9mmol/L，有，有磷酸基团接受体作用磷酸基团接受体作用GGT用高浓度的双甘肽有酰用高浓度的双甘肽有酰基接受体作用基接受体作用测定条件的影响