郑大移植免疫课件

移植免疫及其免疫检测郑州大学检验医学系第二十六章Transplantation Immunologyn移植（transplantation）将身体的某一部分（如细胞、组织或器官），通过手术或其他途径移到同一个体或另一个体的特定部位，并使其继续存活的方法，称移植。n被移植的部分称为移植物移植物（graft，transplant），献出移植物的个体称供者供者（donor）；接受移植物的个体称受者受者（recipient）或宿主宿主（host）。n不同个体间进行组织或器官移植时，供者与受者双方相互接受兼容的程度称为组织相容性组织相容性（histocompatibility）。移植根据移植物来源不同分类其他移植类型n“多米诺”（骨牌）式移植：例如病人A需要移植肺脏而心脏健康，病人B需要移植心脏，这时出现捐献者C可以同时捐献心脏和肺脏，由于心肺联合移植成功率更高，所以可以考虑将C的心脏肺脏都移植给A，同时将A的心脏移植给B。n劈离式移植：(split liver transplantation,SLT)是基于肝脏是功能性分段器官的理论，将完整的供肝分割成2个或2个以上的解剖功能单位分别移植给不同受者，达到“一肝两受”或“一肝多受”，是拓展供肝池和缓解供肝短缺的重要方法之一。n排斥反应排斥反应（rejection）由于供受者间组织不相容，移植物与受者免疫系统相互作用引起免疫应答，导致移植物或受者组织损伤反应，反之，供受者遗传物质愈相同，即组织相容性愈高，排斥反应愈弱，长期存活率就愈高。nHVGR-host versus garaft rejection 宿主抗移植物反应nGVHR-garaft versus host rejection 移植物抗宿主反应第一节器官移植与移植免疫特点n移植物能否长期存活取决于u移植器官在移植过程中活力的保持u手术时的血管吻合和血液循环重建质量u移植排斥反应的控制一、器官和组织移植的一般规律n移植器官或组织的抗原性异物属性n排斥移植物的记忆特性n负向免疫调节的必要性：免疫抑制剂应用或免疫耐受诱导十分必要二、HLA是诱导排斥反应最强的靶抗原nI、II类分子，尤其HLA-DR位点的抗原分子，首要抗原n保守估计HLA至少存在1300个不同的单体型，相应地约有17107个基因型，这就是除同卵双生子以外几乎无HLA相同者的遗传基础，从而HLA可视作个体的“身份证”。n其次，HLA-A、B、DQ、DPnHLA-C与排斥反应无关三、受体对HLA的识别与效应机制n受体对HLA的识别：n直接识别：受体T细胞对移植物表面完整的同种异型HLA分子的识别，参与强烈的急性排斥反应；nCD4+Th细胞间接识别，在急性期、中期和晚期、慢性排斥反应中发挥作用。n受体对移植物的排斥效应：nCD4+T细胞的活化和巨噬细胞的动员，介导迟发性超敏反应，导致免疫损伤；nCD8+T细胞的直接杀伤作用；nADCC或CDC造成急性或超急性免疫损伤；n抗原/抗体复合物，激活补体损伤血管；n残留于移植物的过客细胞介导GVHR。第二节HLA配型与应用分析n供、受体之间的HLA同源性是移植物长期存活的关键。nHLA型别的判定具有多样性、复杂性HLA的配型方法n1.血清学分型法n2.细胞学分型法n3.分子生物学分型法1.血清学方法n应用已知的抗HLA特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合，借助补体的生物学作用，介导细胞裂解的细胞毒试验。可检测的抗原称SD（serologically defined antigen）抗原，包括HLA-A、B、C、DR、DQ。n该方法简单、快速、易操作；缺点是误差率较高。2.细胞学分型法n是以混合淋巴细胞培养（MLC）或称混合淋巴细胞反应（MLR）为基本技术，所测定的抗原称为LD抗原(lymphocyte defined antigen)。包括HLA-D，DPn双向MLCn单向MLC3.分子生物学分型法nRFLP与PCR-RFLP分型法：检测HLA多态性方法nPCR-SSO分型法：序列特异性寡核苷酸-聚合酶链式反应，应用广泛，能鉴定所有已知序列的HLA-DR，DQ，DP等位基因；nPCR-SSP分型法：序列特异引物引导的PCR反应，HLA-A，B，DRB1nPCR-SSCP分型法：单链构象特异性-PCRnSBT分型法：基于序列的HLA分型法HLA分型方法的应用nHLA配型nHLA交叉配型与预存抗体的检测n群体反应性抗体（panel reactive antibodies,PRA）是指群体反应性抗HLA-IgG抗体，是各种组织器官移植术前筛选致敏受者的重要指标，与移植排斥反应和存活率密切相关。如果病人在曾经的输血或者器官移植中接触过他人HLA，则会产生较强的抗性，不利于器官移植配型。PRA10%为阴性；1050%低致敏；PRA50%为高致敏，PRA越强，获得合适供体或移植成功的概率越低。第三节常见的组织或器官移植n肾移植n肝脏移植n心脏移植和心肺联合移植n角膜移植n皮肤移植n骨髓与其他来源的干细胞移植：骨髓、外周血、脐血干细胞第四节排斥反应的种类及发生机制n超排斥反应n急性排斥反应n慢性排斥反应n移植物抗宿主反应1.超急性排斥反应（hyperacute rejection）n大多发生于血管吻合后数分钟至术后24小时内。n移植物HLA或ABO血型抗原与受者血清中预存抗体结合，激活补体，导致血小板聚集，吸引中性粒细胞聚集，并使凝血系统激活，最终导致严重的局部缺血及移植物坏死。也可由微生物感染引起。n目前临床上以ABO血型鉴定、ABO血型抗体效价测定、供受者ABO交叉配合和供受者补体依赖的淋巴细胞毒交叉试验作为预测试验，要求ABO血型配合，交叉配合试验阴性，以防止超急性排斥反应的发生。2.急性排斥反应 acute rejectionn为同种移植中最常见的一种排斥反应类型。多发生于术后数天至数月内。其发病机理中主要为细胞免疫，受者致敏产生大量细胞毒性T细胞可直接杀伤靶细胞，也可通过产生的细胞因子损伤组织。n急性体液性排斥反应：内皮细胞表面HLA分子的抗体介导，导致移植物组织或器官的血管炎。n急性细胞性排斥反应：移植组织或器官实质性损伤，伴有淋巴细胞和巨噬细胞浸润。与CD4+Th1、CD8+CTL、ADCC作用相关。3.慢性排斥反应 chronic rejectionn术后数月至1年后发生的缓慢、进行性、不可逆，并最终导致移植物功能丧失的损害形式。正常组织结构的丧失和纤维化是其病理特点。n引起慢性排斥反应的因素n（1）CD4+Th1细胞、巨噬细胞介导的迟发性超敏反应n（2）B细胞产生的抗体活化补体或通过ADCC破坏血管内皮细胞n（3）急性排斥反应反复发作所致移植物退行性变n（4）非免疫相关因素：局部缺血，微生物感染等4.移植物抗宿主反应n移植物中淋巴细胞（主要是T细胞）识别宿主抗原而致敏、增殖分化，直接或间接攻击受者靶组织而发生的一种排斥反应，称为移植物抗宿主反应（graft versus host reaction，GVHR），严重时称移植物抗宿主病（graft versus host disease，GVHD）。n GVHR发生前提：供受者HLA不相容；移植物中含有足够数量的免疫细胞；受者免疫功能低下。第五节排斥反应的免疫监测n体液免疫与细胞免疫水平检测的意义n尿微量蛋白检测的临床意义n急性时相反应物质检测的临床意义一、体液免疫与细胞免疫水平检测n1.体液免疫：特异性抗体水平检测，补体水检测n2.细胞免疫：外周血T细胞及其亚群检测；NK细胞活性测定；血清细胞因子测定；粘附分子及其配体测定二、尿微量蛋白检测的临床意义n血浆蛋白：Alb，IgG，IgA，轻链，b2M，C3，a1-微球蛋白、TRF，Hb，Mbn非血浆蛋白：SIgA，Tamm-Horsfall蛋白，GBM抗体n方法：免疫比浊，ELISA，RIA、毛细管电泳三、急性时相反应物质检测nCRPnIL-1，IL-6，TNF-a第六节常用的免疫抑制药物及浓度监测n免疫抑制剂应用n对移植抗原特异性免疫耐受的诱导n免疫抑制剂体内浓度监测一、免疫抑制剂应用n化学性抑制剂n生物性抑制剂n中草药1.化学性抑制剂n环孢霉素CsAn糖皮质醇激素n硫唑嘌呤n环磷酰胺nFK-506（他克莫斯）n霉酚酸酯（MMF）2.生物性抑制剂n抗淋巴细胞球蛋白n细胞性单克隆抗体n某些融合蛋白n反义寡核苷酸3.中草药n雷公藤：雷公藤多苷（T II）n冬虫夏草：FTY720是冬虫夏草有效成分ISP-1结构改造而成。二、对移植抗原特异性免疫耐受的诱导n抗原植入，新生儿诱导n供着HLA分子，封闭同种抗原特异性T细胞TCR诱导受者特异性T细胞凋亡，产生免疫耐受nT细胞疫苗三、免疫抑制剂体内浓度监测n方法：ELISA、RIA、荧光偏振、高效液相、质谱、毛细管电泳等n药代动力学监测：谷值、峰值n方法评价：END