输血前相容性检测课件

中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。教学目的和要求教学目的和要求掌握盐水法、抗人球蛋白法、聚凝胺法的原理、掌握盐水法、抗人球蛋白法、聚凝胺法的原理、方法及意义。方法及意义。熟悉微柱凝胶法原理、方法。熟悉微柱凝胶法原理、方法。了解酶法、白蛋白介质法、了解酶法、白蛋白介质法、LissLiss法的原理和方法。法的原理和方法。熟悉熟悉ABO/RhABO/Rh血型鉴定方法及影响因素血型鉴定方法及影响因素熟悉抗体筛选原理和意义熟悉抗体筛选原理和意义熟悉交叉配血方法及意义熟悉交叉配血方法及意义了解抗体鉴定原理和意义了解抗体鉴定原理和意义中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。血型鉴定抗体筛选及鉴定交叉配血红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术应用红细胞抗原抗体检测技术应用中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。微柱凝胶免疫学技术微柱凝胶免疫学技术 聚凝胺试验聚凝胺试验酶介质凝集试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验增强技术增强技术中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验l悬浮于盐水介质中的红细胞与相应抗体分子结合，悬浮于盐水介质中的红细胞与相应抗体分子结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集。交叉联结形成肉眼可见的凝集。l主要检测主要检测IgMIgM类抗体（类抗体（ABOABO系统、抗系统、抗E E）。）。l抗抗A A抗抗B B特异性特异性IgGIgG类抗体有时可直接凝集悬浮于盐类抗体有时可直接凝集悬浮于盐水中的红细胞，与红细胞表面抗原位点数目和抗水中的红细胞，与红细胞表面抗原位点数目和抗原决定簇位置有关。原决定簇位置有关。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验l方法：玻片法方法：玻片法-便于显微镜观察结果便于显微镜观察结果 试管法试管法-适用于不同温度、便于洗涤适用于不同温度、便于洗涤l反应温度：反应温度：4 42222l临床意义：盐水凝集试验阳性，并在临床意义：盐水凝集试验阳性，并在3737也有活性的抗体也有活性的抗体有意义，这些抗体通常能用其他方法证明。室温有活性，有意义，这些抗体通常能用其他方法证明。室温有活性，3737无活性者临床意义不大。无活性者临床意义不大。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。试验记录试验记录4+4+（+）：一个大凝集块，背景透明，无游离）：一个大凝集块，背景透明，无游离细胞细胞3+3+（+）：数个大凝集块，背景透明，无游离）：数个大凝集块，背景透明，无游离细胞细胞2+2+（+）：许多小凝集块，背景稍混浊，有游离）：许多小凝集块，背景稍混浊，有游离细胞细胞1+1+（+）：细小的凝集块，背景浑浊）：细小的凝集块，背景浑浊W+W+（）：极细小凝集块，要用显微镜观察结果）：极细小凝集块，要用显微镜观察结果0 0（-）：无凝集，无溶血，细胞呈游离散在状态）：无凝集，无溶血，细胞呈游离散在状态PHPH：部分溶血：部分溶血H H：完全溶血：完全溶血中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。Weak reactions often difficult to interpret.Can also be downgraded due to shaking the completed test.Conventional Testing.中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验结果分析：阳性结果分析：阳性-凝集或溶血凝集或溶血 阴性阴性-无凝集或溶血无凝集或溶血先观察有无溶血、再观察有无凝集先观察有无溶血、再观察有无凝集注意事项：细胞浓度注意事项：细胞浓度2 25%5%（严格按说明（严格按说明书操作）、血清与细胞比例、反应温书操作）、血清与细胞比例、反应温度、弱度、弱凝集分析凝集分析优点：优点：简便、快捷、直观。简便、快捷、直观。简便、快捷、直观。简便、快捷、直观。缺点：不能发现不完全抗体。缺点：不能发现不完全抗体。缺点：不能发现不完全抗体。缺点：不能发现不完全抗体。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。微柱凝胶免疫学技术微柱凝胶免疫学技术 聚凝胺试验聚凝胺试验酶介质凝集试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验增强技术增强技术中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验抗球蛋白试验是抗球蛋白试验是19451945年由年由CoombsCoombs等人等人建立的，又称建立的，又称CoombsCoombs试验。抗球蛋白试验。抗球蛋白试验的建立在血型血清学上有着非常试验的建立在血型血清学上有着非常重要的意义。重要的意义。分为直接抗球蛋白试验（分为直接抗球蛋白试验（DATDAT）和间接）和间接抗球蛋白试验（抗球蛋白试验（IATIAT）。）。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗人球蛋白试验原理抗人球蛋白试验原理IgGIgG类血型抗体（主要是免疫抗体，如类血型抗体（主要是免疫抗体，如RhRh血血型抗体）分子量小，与红细胞相应抗原结型抗体）分子量小，与红细胞相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，称之为不完全抗体，但在加入抗集反应，称之为不完全抗体，但在加入抗-IgGIgG后，以其搭桥作用则可出现凝集反应。后，以其搭桥作用则可出现凝集反应。补体成分在体内被红细胞抗原抗体复合物补体成分在体内被红细胞抗原抗体复合物激活以后，结合在红细胞表面。在体外含激活以后，结合在红细胞表面。在体外含补体的多克隆抗体，或抗补体的多克隆抗体，或抗C3bC3b、抗、抗C3dC3d等单等单特异性抗体与补体致敏的红细胞反应，使特异性抗体与补体致敏的红细胞反应，使之凝集也称为抗球蛋白试验。之凝集也称为抗球蛋白试验。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗人球蛋白试剂抗人球蛋白试剂多特异性抗球蛋白试剂：应含有抗多特异性抗球蛋白试剂：应含有抗IgGIgG和抗和抗-C3d-C3d。单特异性抗球蛋白试剂：抗单特异性抗球蛋白试剂：抗IgGIgG、抗、抗IgMIgM、抗、抗IgAIgA、抗、抗C3C3、C4C4的片段。的片段。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。直接抗人球蛋白试验直接抗人球蛋白试验DATDAT是用来检测体内红细胞致敏情况，是用来检测体内红细胞致敏情况，尤其是尤其是IgGIgG和和C3dC3d包被的红细胞。包被的红细胞。用于：用于：HDNHDN和自身免疫溶血性贫血的诊断和自身免疫溶血性贫血的诊断红细胞被药物抗体致敏的检查红细胞被药物抗体致敏的检查急性和迟发性溶血性输血反应的检查急性和迟发性溶血性输血反应的检查中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。间接抗人球蛋白试验间接抗人球蛋白试验用于测定在体外能引起红细胞致敏的用于测定在体外能引起红细胞致敏的抗体。抗体。用不完全抗体测定红细胞血型，如用不完全抗体测定红细胞血型，如RhRh血型。血型。交叉配血。交叉配血。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。结果分析结果分析-假阳性假阳性用免疫兔或羊制备的抗人球蛋白含有种间抗用免疫兔或羊制备的抗人球蛋白含有种间抗体。体。红细胞在用盐水洗涤时已有凝集。红细胞在用盐水洗涤时已有凝集。IAT IAT试验中所用红细胞本身试验中所用红细胞本身DATDAT阳性。阳性。不抗凝标本在冷环境里经过一段时间的保存不抗凝标本在冷环境里经过一段时间的保存后，自身冷抗体发生作用，激活补体，补后，自身冷抗体发生作用，激活补体，补体成分结合在红细胞上，用多特异性抗球体成分结合在红细胞上，用多特异性抗球蛋白试剂会发生假阳性。蛋白试剂会发生假阳性。离心过度，红细胞压积过紧，不易充分摇散离心过度，红细胞压积过紧，不易充分摇散中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。结果分析结果分析-假阴性假阴性致敏后的红细胞洗涤不充分致敏后的红细胞洗涤不充分,残留的球蛋白中和了残留的球蛋白中和了试剂中的抗球蛋白，造成假阴性。试剂中的抗球蛋白，造成假阴性。操作过程不连续，时间过长，结合在红细胞上的抗操作过程不连续，时间过长，结合在红细胞上的抗体解离。体解离。红细胞、血清和抗人球蛋白试剂保存不当都可能发红细胞、血清和抗人球蛋白试剂保存不当都可能发生活性减弱或丧失。生活性减弱或丧失。红细胞过多，反应减弱；红细胞过少，看结果不准红细胞过多，反应减弱；红细胞过少，看结果不准确，都影响结果。确，都影响结果。试剂中抗人球蛋白浓度过大，有前带现象。试剂中抗人球蛋白浓度过大，有前带现象。孵育时间和温度不当，会使反应结果减弱或变为假孵育时间和温度不当，会使反应结果减弱或变为假阴性。观察结果时过度摇动试管，摇散细小凝块。阴性。观察结果时过度摇动试管，摇散细小凝块。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。注意事项注意事项每次试验要设有阴性和阳性对照。每次试验要设有阴性和阳性对照。阴性结果要加入一滴阴性结果要加入一滴IgGIgG致敏红细胞致敏红细胞实验器材清洁。实验器材清洁。注意抗原抗体比例、孵育时间、温度等条注意抗原抗体比例、孵育时间、温度等条件。件。严格按照实验方法操作。严格按照实验方法操作。排除自身抗体干扰。排除自身抗体干扰。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。微柱凝胶免疫学技术微柱凝胶免疫学技术 聚凝胺试验聚凝胺试验酶介质凝集试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验增强技术增强技术抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。微柱凝胶试验微柱凝胶试验 原理：微柱凝胶技术是用特定的化学原理：微柱凝胶技术是用特定的化学物质做成微型凝胶柱，柱的上端有一个加样物质做成微型凝胶柱，柱的上端有一个加样反应室。抗原抗体反应后离心，凝胶柱起过反应室。抗原抗体反应后离心，凝胶柱起过筛作用，红细胞凝集块不能通过凝胶的间隙筛作用，红细胞凝集块不能通过凝胶的间隙而留在凝胶的上部，未凝集的红细胞通过凝而留在凝胶的上部，未凝集的红细胞通过凝胶的间隙，沉积到底部。胶的间隙，沉积到底部。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。微柱凝胶反应本质：凝集反应微柱凝胶反应本质：凝集反应红细胞抗原与相应抗体反应出现凝集。根红细胞抗原与相应抗体反应出现凝集。根据红细胞在胶质介质中的位置肉眼判断。据红细胞在胶质介质中的位置肉眼判断。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。结果判断标准 结果判定标准结果判定标准中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。微柱凝胶试验注意事项微柱凝胶试验注意事项 严格按照试剂说明书操作。严格按照试剂说明书操作。献血者献血者DATDAT阳性，干扰结果判读。阳性，干扰结果判读。患者自身抗体干扰。患者自身抗体干扰。注意加样顺序。注意加样顺序。配制配制细胞浓度准确细胞浓度准确。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。微柱凝胶免疫学技术微柱凝胶免疫学技术 聚凝胺试验聚凝胺试验酶介质凝集试验酶介质凝集试验抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验增强技术增强技术抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。聚凝胺试验聚凝胺试验原理：聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中原理：聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有多个阳离子基团，能中和红细胞表面的负电荷，有多个阳离子基团，能中和红细胞表面的负电荷，并籍助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异性凝并籍助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异性凝集。集。当红细胞与血清在低离子介质中孵育后，当红细胞与血清在低离子介质中孵育后，IgGIgG抗体与红细胞上相应的抗原结合，在聚凝胺的作用抗体与红细胞上相应的抗原结合，在聚凝胺的作用下发生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能区分，再加下发生凝聚。凝集和凝聚在表面上不能区分，再加入枸橼酸钠重悬液，枸橼酸根的负电荷与聚凝胺上入枸橼酸钠重悬液，枸橼酸根的负电荷与聚凝胺上的正电荷中和，非特异性凝集现象消失，而真正的的正电荷中和，非特异性凝集现象消失，而真正的凝集不会消失。凝集不会消失。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。+聚凝胺+无凝集+有凝集反应-枸橼酸纳-中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。聚凝胺试验聚凝胺试验优点：简便快捷，可用于某些不完全抗体优点：简便快捷，可用于某些不完全抗体检测。检测。缺点：对无唾液酸的红细胞无作用，缺点：对无唾液酸的红细胞无作用，例如多凝集红细胞。例如多凝集红细胞。可增强自身抗体或冷凝集素干扰。可增强自身抗体或冷凝集素干扰。注意事项：抗原抗体比例适当注意事项：抗原抗体比例适当 聚凝胺（聚凝胺（1 1液）去除干净。液）去除干净。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。微柱凝胶免疫学技术微柱凝胶免疫学技术 聚凝胺试验聚凝胺试验酶介质凝集试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验增强技术增强技术抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。酶介质凝集试验酶介质凝集试验 原理：原理：红细胞表面有丰富的唾液酸，带有红细胞表面有丰富的唾液酸，带有负电荷，使红细胞相互排斥。蛋白水解酶能负电荷，使红细胞相互排斥。蛋白水解酶能消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负消化破坏这种唾液酸，减少红细胞表面的负电荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细电荷以及红细胞之间的排斥力，缩短了红细胞之间的距离，使胞之间的距离，使IgGIgG分子能与有相应抗原分子能与有相应抗原的红细胞产生凝集。的红细胞产生凝集。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。酶介质凝集试验酶介质凝集试验 常用的酶：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、无花常用的酶：菠萝酶、木瓜酶、胰酶、无花果酶。果酶。方法：方法：期法期法-酶液直接加入血清和细胞酶液直接加入血清和细胞的混合物中。的混合物中。期法期法-用酶处理细胞再与血清用酶处理细胞再与血清 进进行反应。行反应。两种方法比较：两种方法比较：期法期法 操作方便操作方便 期法期法 敏感敏感中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。酶介质凝集试验酶介质凝集试验 优点：优点：可以增强一些抗原抗体系统的反应活性可以增强一些抗原抗体系统的反应活性 Rh Rh和和KiddKidd系统最明显系统最明显缺点：缺点：会破坏一些抗原的结构会破坏一些抗原的结构(M(M、N N、FyFya a、FyFyb b)酶液批次不同，都需标化最适孵育时间。酶液批次不同，都需标化最适孵育时间。操作繁复，少数人对酶液过敏。操作繁复，少数人对酶液过敏。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。微柱凝胶免疫学技术微柱凝胶免疫学技术 聚凝胺试验聚凝胺试验酶介质凝集试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验增强技术增强技术抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。增强技术增强技术白蛋白增强凝集法白蛋白增强凝集法原理原理：白蛋白能提高红细胞悬浮液中的介：白蛋白能提高红细胞悬浮液中的介电常数，从而降低电常数，从而降低zetezete电位，缩小了细胞电位，缩小了细胞间距离，增加细胞与细胞的接触面。间距离，增加细胞与细胞的接触面。应用应用：血型鉴定和交叉配血：血型鉴定和交叉配血结果判定结果判定：出现凝集和溶血现象为阳性结：出现凝集和溶血现象为阳性结果。果。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。增强技术增强技术低离子强度盐溶液（低离子强度盐溶液（LissLiss）法）法 原理原理：在凝集反应第一阶段，若降低介质：在凝集反应第一阶段，若降低介质的离子强度，就会减少红细胞周围的阳离的离子强度，就会减少红细胞周围的阳离子云，促进带正电荷的子云，促进带正电荷的IgGIgG与带负电荷的红与带负电荷的红细胞发生反应。细胞发生反应。注意事项注意事项：不能增加额外血清量：不能增加额外血清量延延长孵育时间会使某些抗原长孵育时间会使某些抗原变质，如变质，如FyFya a。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗体筛选及鉴定交叉配血红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术应用红细胞抗原抗体检测技术应用红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术血型鉴定血型鉴定中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。ABO血型鉴定 方法：方法：方法：方法：常用室温盐水技术检测红细胞上常用室温盐水技术检测红细胞上常用室温盐水技术检测红细胞上常用室温盐水技术检测红细胞上 的血的血的血的血型抗原，以及血清中存在的血型型抗原，以及血清中存在的血型型抗原，以及血清中存在的血型型抗原，以及血清中存在的血型抗体。结果抗体。结果抗体。结果抗体。结果判定参见凝集试验。判定参见凝集试验。判定参见凝集试验。判定参见凝集试验。ABOABOABOABO血型鉴定的常规试验：血型鉴定的常规试验：血型鉴定的常规试验：血型鉴定的常规试验：1 1 1 1、正定型正定型正定型正定型：用已知抗体的标准血清检查红：用已知抗体的标准血清检查红：用已知抗体的标准血清检查红：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。常规用抗细胞上未知的抗原。常规用抗细胞上未知的抗原。常规用抗细胞上未知的抗原。常规用抗A A A A抗抗抗抗B B B B 2 2 2 2、反定型反定型反定型反定型：用已知血型的标准红细胞检查：用已知血型的标准红细胞检查：用已知血型的标准红细胞检查：用已知血型的标准红细胞检查血清中未知的抗体。血清中未知的抗体。血清中未知的抗体。血清中未知的抗体。常规用常规用常规用常规用A A A A、B B B B和和和和O O O O三种三种三种三种红细胞。红细胞。红细胞。红细胞。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。正反定型的意义正反定型的意义 准确的血型判定利于指导临床用血准确的血型判定利于指导临床用血发现亚型发现亚型抗原强度的改变与疾病相关抗原强度的改变与疾病相关新抗原出现与疾病相关新抗原出现与疾病相关排除假阴性或假阳性结果干扰排除假阴性或假阳性结果干扰中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。ABO血型反应格局血型反应格局 血型血型 正定型正定型 反定型反定型 抗抗A 抗抗B Ac Bc Oc A +-+-B -+-O -+-AB +-中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。Cells v SerumSerum v Cells中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。ABOABO亚型鉴定亚型鉴定 亚型通常表现为凝集反应强度弱，或正、反定亚型通常表现为凝集反应强度弱，或正、反定型不符型不符 增加试剂：抗增加试剂：抗A1-A1-区分区分A1A1和和A2A2 抗抗H-H-有较强的有较强的H H抗原性抗原性 抗抗A,B-A,B-与与AxAx的反应强度增强的反应强度增强 增加方法：吸收放散试验增加方法：吸收放散试验 唾液中血型物质鉴定唾液中血型物质鉴定 PCRPCR方法方法中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。Rh血型鉴定血型鉴定 红细胞红细胞RhRh表型可用表型可用特殊的具有抗特殊的具有抗D D、C C、c c、E E、和、和e e抗血清检抗血清检测来鉴定。但常规只测来鉴定。但常规只用抗用抗D D血清检查有无血清检查有无D D抗原抗原 DD抗原阳性者为抗原阳性者为RhRh阳阳性，否则为阴性性，否则为阴性 中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。Rh Rh血型鉴定方法血型鉴定方法 RhRh抗体属抗体属IgGIgG类，一般不能在盐水介质类，一般不能在盐水介质中与红细胞发生凝集，因此须采用以下中与红细胞发生凝集，因此须采用以下鉴定方法（其中一种）：鉴定方法（其中一种）：1 1、酶介质法、酶介质法2 2、抗人球蛋白法、抗人球蛋白法+增强试验增强试验 （Liss/Liss/白蛋白技术）白蛋白技术）RhDRhD检测常用盐水法。检测常用盐水法。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。血型鉴定交叉配血红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术应用红细胞抗原抗体检测技术应用红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术抗体筛选及鉴定中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗体筛选和鉴定抗体筛选和鉴定 有临床意义的抗体：有临床意义的抗体：能引起新生儿溶血病、引发溶血性输血反能引起新生儿溶血病、引发溶血性输血反 应，或者使输入的红细胞存活期减少，在应，或者使输入的红细胞存活期减少，在 37 37有反应的同种抗体。有反应的同种抗体。意外抗体：意外抗体：抗抗A A，抗，抗B B以外的抗体。以外的抗体。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。目的和原则目的和原则 目的：目的：对受血者的血清或血浆，应常规作抗对受血者的血清或血浆，应常规作抗体筛选实验，以发体筛选实验，以发现有临床意义的意外现有临床意义的意外抗体。抗体。原则：原则：让受检血清或血浆与特殊的试剂红让受检血清或血浆与特殊的试剂红细胞（筛选细胞）起反应，以发现细胞（筛选细胞）起反应，以发现3737有反有反应活性的抗体。应活性的抗体。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。对血清中抗体检测的要求对血清中抗体检测的要求 1.1.选择足够敏感、高特异性的技术检测出受选择足够敏感、高特异性的技术检测出受检者血清中低水平的有临床意义的抗体。检者血清中低水平的有临床意义的抗体。2.2.要高度注意，即使受血者血清中的抗体对要高度注意，即使受血者血清中的抗体对输入的不相容红细胞抗原呈弱反应，也能输入的不相容红细胞抗原呈弱反应，也能够发生快速回忆反应，抗体迅速产生，破够发生快速回忆反应，抗体迅速产生，破坏红细胞。坏红细胞。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。对试剂红细胞的要求对试剂红细胞的要求 不能将多人份红细胞混合，一定要用不能将多人份红细胞混合，一定要用2-32-3人份的试剂人份的试剂红细胞，以避免红细胞混合后，对弱抗原红细胞的稀红细胞，以避免红细胞混合后，对弱抗原红细胞的稀释。释。美国美国FDAFDA对注册和批准作为商品供应的用作不规则对注册和批准作为商品供应的用作不规则抗体筛检的试剂红细胞的要求为必须表达：抗体筛检的试剂红细胞的要求为必须表达：D D、C C、E E、c c、e e、M M、N N、S S、s s，PlPl、LeaLea、LebLeb、K K、k k、FyFya a、FyFyb b，JKJKa a、JKJKb b。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。临床重要的人血清红细胞抗体临床重要的人血清红细胞抗体 抗体抗体自然发生自然发生 免疫免疫盐水盐水 Coombs/LISSHDNHTR相容表型相容表型抗-Ayesyes mostmost yesyesB、O抗-Byesyes mostmost yesyesA、O抗-AByesyes mostmost yesyesO抗-Hyesyes mostmost yesyesOh中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗体抗体自然发生自然发生 免疫免疫盐水盐水 Coombs/LISSHDNHTR相容表相容表型型抗抗Dyes罕见罕见mostyesyesD阴性阴性血血抗抗Cyes罕见罕见mostyesyesC阴性阴性血血抗抗EyessomemostyesyesC阴性阴性血血抗抗cyes罕见罕见mostyesyesc阴性阴性血血抗抗eyes罕见罕见mostyesyese阴性阴性血血中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗体筛选方法抗体筛选方法 盐水凝集法盐水凝集法抗人球蛋白法抗人球蛋白法聚凝胺法聚凝胺法微柱凝胶法微柱凝胶法LISS抗球蛋白法抗球蛋白法中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。DCEce患者患者1患者患者21R1R1+00+-2R2R2+0+0+3rr000+-中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。结果的判读和解释结果的判读和解释 溶血和血液凝集意义相同，都是抗原抗体反溶血和血液凝集意义相同，都是抗原抗体反应阳性结果。先观察有无溶血，后观察有无应阳性结果。先观察有无溶血，后观察有无凝集。凝集。记录结果，并与以前结果对照。记录结果，并与以前结果对照。抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意义的抗体。一些低频抗原的抗体或有剂量效义的抗体。一些低频抗原的抗体或有剂量效应的抗体，可能被漏检。应的抗体，可能被漏检。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗体鉴定抗体鉴定 通过筛选，抗体一经检出，应进一步通过筛选，抗体一经检出，应进一步作作抗体鉴定试验，以确定其特异性。抗体鉴定试验，以确定其特异性。1.1.自身细胞检查自身细胞检查-排除非特异性排除非特异性2.2.谱红细胞检查谱红细胞检查中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。谱红细胞：谱红细胞：一般是由一般是由8-168-16人份的已知血型表现型人份的已知血型表现型O O型红细胞组型红细胞组成，具有各种不同的抗原成分，根据谱红细胞的成，具有各种不同的抗原成分，根据谱红细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。反应格局一般可以鉴定常见的抗体。方法：方法：在盐水法基础上、灵活应用白蛋白介质法、酶技在盐水法基础上、灵活应用白蛋白介质法、酶技术及抗人球蛋白实验。术及抗人球蛋白实验。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。血型鉴定血型鉴定抗体筛选及鉴定抗体筛选及鉴定交叉配血交叉配血红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术应用红细胞抗原抗体检测技术应用红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。交叉配血交叉配血 主侧：主侧：受血者血清受血者血清+供者红细胞供者红细胞检测对供者红细胞起反应的抗体检测对供者红细胞起反应的抗体次侧：次侧：受血者红细胞受血者红细胞+供者血清供者血清检测对受者红细胞起反应的抗体检测对受者红细胞起反应的抗体自身对照：自身对照：受血者红细胞受血者红细胞+受血者血清受血者血清排除自身抗体、直接抗球蛋白试验阳性及红细排除自身抗体、直接抗球蛋白试验阳性及红细 胞缗钱状凝集干扰胞缗钱状凝集干扰中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。接收申请单和血标本接收申请单和血标本 核对无误核对无误（如有错误与医生（如有错误与医生/护士联系）护士联系）进行交叉配血进行交叉配血 相合相合结果输入微机结果输入微机不相合不相合打印发血单打印发血单血液中心血液中心交叉配血工作流程交叉配血工作流程中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。注意事项注意事项 用于交叉配血的标本应该是新获得的用于交叉配血的标本应该是新获得的（3 3天之内）；供者血标本应刚从血袋天之内）；供者血标本应刚从血袋上剪下。上剪下。不能用玻片法作交叉配血。不能用玻片法作交叉配血。必要时用生理盐水洗涤细胞。必要时用生理盐水洗涤细胞。红细胞浓度一般是红细胞浓度一般是2-5%2-5%。严格按照试剂说明书操作。严格按照试剂说明书操作。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗筛和配血结果分析抗筛和配血结果分析红细胞方面问题处理红细胞方面问题处理血清方面问题处理血清方面问题处理常见问题处理常见问题处理红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗体筛选和交叉配血结果分析抗体筛选和交叉配血结果分析 抗体筛选阴性，交叉配血相合抗体筛选阴性，交叉配血相合见于临床上绝大多数标本。见于临床上绝大多数标本。抗体筛选阴性，血清中仍有可能含有临床抗体筛选阴性，血清中仍有可能含有临床有意义的抗体（方法或筛选细胞）有意义的抗体（方法或筛选细胞）盐水介质试验作配血可能漏检有意义的盐水介质试验作配血可能漏检有意义的IgGIgG类抗体。类抗体。只有用非盐水介质交叉配血，才能保证待只有用非盐水介质交叉配血，才能保证待输的血和受者相合。输的血和受者相合。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗体筛选和交叉配血结果分析抗体筛选和交叉配血结果分析 抗体筛选阴性，盐水直接离心交叉抗体筛选阴性，盐水直接离心交叉配血不合配血不合ABOABO血型错误。血型错误。抗抗A A1 1存在于存在于A A2 2或或A A2 2B B，在直接盐水交叉，在直接盐水交叉配血实验中，抗配血实验中，抗A A1 1能引起大部分能引起大部分A A型红细型红细胞不相合。胞不相合。存在室温反应的同种抗体，如抗存在室温反应的同种抗体，如抗M M。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗体筛选和交叉配血结果分析抗体筛选和交叉配血结果分析 抗体筛选阴性，抗人球蛋白交叉配抗体筛选阴性，抗人球蛋白交叉配血不合血不合献血者红细胞献血者红细胞DATDAT阳性（约阳性（约1/100001/10000）患者抗体弱，献血者红细胞抗原性很患者抗体弱，献血者红细胞抗原性很强，表现为抗人球蛋白试验阳性。强，表现为抗人球蛋白试验阳性。针对低频抗原的抗体，如针对低频抗原的抗体，如DiegoDiego系统抗系统抗-Wr-Wra a。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。抗体筛选和交叉配血结果分析抗体筛选和交叉配血结果分析 抗体筛选阳性，交叉配血不合抗体筛选阳性，交叉配血不合同种抗体、自身抗体、试剂问题、缗同种抗体、自身抗体、试剂问题、缗钱状凝集，应在输血前查明原因。钱状凝集，应在输血前查明原因。必须进行包括抗人球蛋白试验在内的必须进行包括抗人球蛋白试验在内的交叉配血。交叉配血。紧急情况下无法找到血清学配合的血紧急情况下无法找到血清学配合的血液时，输血科人员应告之主管医生此液时，输血科人员应告之主管医生此种情况下输血存在的可能危险。种情况下输血存在的可能危险。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。同种抗体的处理对策同种抗体的处理对策 交叉配合相合与否取决于涉及抗原的频率。交叉配合相合与否取决于涉及抗原的频率。鉴定抗体的特异性后，先用抗血清筛选相鉴定抗体的特异性后，先用抗血清筛选相应抗原阴性者，再与受者血清作交叉配血。应抗原阴性者，再与受者血清作交叉配血。用受血者血清还是试剂抗血清筛选血液，用受血者血清还是试剂抗血清筛选血液，应根据病人的血清反应强度，能得到的受应根据病人的血清反应强度，能得到的受者血清量以及抗血清的来源和费用等决定。者血清量以及抗血清的来源和费用等决定。医院库存血中难以找到配合血时，求助血医院库存血中难以找到配合血时，求助血液中心。液中心。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。自身抗体自身抗体 冷自身抗体干扰血型鉴定、抗体筛选和鉴定冷自身抗体干扰血型鉴定、抗体筛选和鉴定以及交叉配血试验，结果判读困难。最常以及交叉配血试验，结果判读困难。最常见的特异性是抗见的特异性是抗-I-I。温反应自身抗体很少引起温反应自身抗体很少引起ABOABO定型困难，但定型困难，但可引起可引起RhRh定型困难。定型困难。注意：确认有无同种抗体；血型定型的准注意：确认有无同种抗体；血型定型的准确性。确性。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。常见问题处理常见问题处理红细胞方面问题处理红细胞方面问题处理血清方面问题处理血清方面问题处理红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术抗筛和配血结果分析抗筛和配血结果分析红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。常见问题处理方法常见问题处理方法 了解患者一般情况。了解患者一般情况。在做进一步试验之前，在做进一步试验之前，先进行重复试验。用试管法。先进行重复试验。用试管法。初步检查：再取一份患者新鲜标本；初步检查：再取一份患者新鲜标本；红细胞洗涤后配成红细胞洗涤后配成2 25%5%浓度；浓度；重复进行各项试验；重复进行各项试验；直接抗人球蛋白试验；直接抗人球蛋白试验；用用ABOABO及自身细胞检测血清，怀疑抗及自身细胞检测血清，怀疑抗I I，用脐血细胞检查。用脐血细胞检查。判定结果之前，实验管至少在室温和判定结果之前，实验管至少在室温和44放置放置3030分钟，阴性者用显微镜观察结果。分钟，阴性者用显微镜观察结果。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。红细胞方面异常的处理方法红细胞方面异常的处理方法 缺乏抗原或弱抗原：在常见问题处理缺乏抗原或弱抗原：在常见问题处理方法基础上，进行吸收放散试验、检方法基础上，进行吸收放散试验、检查唾液血型物质、查唾液血型物质、PCRPCR方法等。方法等。获得性获得性B B抗原：核对患者诊断；抗原：核对患者诊断；自身细胞自身血清自身细胞自身血清 无凝集；无凝集；酸化抗血清（抗酸化抗血清（抗B B）凝集消失；凝集消失；检查唾液有检查唾液有A A物质物质 无无B B物质。物质。包被抗体红细胞：包被抗体红细胞：IgGIgG致敏红细胞致敏红细胞-热热洗脱法；醚洗脱法。洗脱法；醚洗脱法。IgMIgM致敏红细胞致敏红细胞-硫醇处理。硫醇处理。中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。红细胞方面异常的处理方法红细胞方面异常的处理方法 多凝集红细胞：多凝集红细胞：TnTn受体；被细菌酶激受体；被细菌酶激活活T T或或TkTk受体；遗传产生受体；遗传产生CadCad抗原活性抗原活性对策：用木瓜酶处理细胞破坏对策：用木瓜酶处理细胞破坏TnTn受受体；用体；用T T激活的红细胞吸收抗激活的红细胞吸收抗A A抗抗B B后检后检查；用查；用A/BA/B细胞吸收抗细胞吸收抗A/BA/B，用放散液，用放散液检测检测CadCad阳性细胞。阳性细胞。混合凝集外观：凝集或溶血方式混合凝集外观：凝集或溶血方式中华人民共和国卫生部医政司主办中华人民共和国卫生部医政司主办资料仅供参考,不当之处，请联系改正。血清方面异常的处理方法血清方面异常的处理方法 缗钱状凝集：盐水替代缗钱状凝集：盐水替代法。法。抗抗A A1 1：用标准抗：用标准抗A A1 1血清与该细胞反应无血清与该细胞反应无凝集；只与凝集；只与A A1 1细胞凝集，与细胞凝集，与A A2 2和和O O细胞细胞均无凝集。均无凝集。不规则抗体：抗体筛选；抗体鉴定不规则抗体：抗体筛选；抗体鉴定血清中缺乏抗血清中缺乏抗A/BA/B：核对患者一般情况；：核对患者一般情况；试管法；加大血清量；延长反应时间。试管法；加大血清量；延长反应时间。