沉淀反应课件1

沉淀反应（precipitation reaction)1编辑版ppt可溶性抗原+相应抗体肉眼可见的沉淀一、定义：凝集反应凝集反应沉淀反应沉淀反应抗原性质抗原性质 颗粒性抗原/可溶性抗原致敏颗粒可溶性抗原反应时间反应时间几分钟至十几分钟数小时至数天反应产物反应产物凝集块沉淀物稀释物稀释物稀释抗体稀释抗原2编辑版pptl形成肉眼可见的大的免疫形成肉眼可见的大的免疫复合物。复合物。l沉淀线沉淀线(环环)的观察以及免的观察以及免疫比浊法中的疫比浊法中的终点法终点法就是就是测定此阶段形成的复合物测定此阶段形成的复合物第一阶段第一阶段第二阶段第二阶段二、沉淀反应分两个阶段l抗原抗体特异性结合，抗原抗体特异性结合，快速但不可见。快速但不可见。l免疫比浊法中的免疫比浊法中的速率法速率法就是利用此阶段测定免就是利用此阶段测定免疫复合物形成的速率。疫复合物形成的速率。3编辑版ppt1897年 Kraus 就发现细菌培养液（毒素）与相应抗血 清混合出现沉淀1905年 Bechhold 把抗体放在明胶中，将抗原加于其 中，发现沉淀反应可在凝胶中进行1946年 Oudin 报告了试管免疫扩散技术1965年 Mancini 提出单向免疫扩散技术，使定性免疫 试验向定量化发展1959年 Schultze建立透射比浊法1967年 Ritchie建立散射比浊法1977年 Sternberg建立速率散射比浊法 发展趋势：快速、微量、自动化。发展趋势：快速、微量、自动化。三、发展史：4编辑版ppt液体内沉淀液体内沉淀试验试验凝胶内沉淀凝胶内沉淀试验试验凝胶免疫电凝胶免疫电泳技术泳技术沉淀反应可分三类沉淀反应可分三类u免免疫疫浊浊度度测测定定u絮絮状状沉沉淀淀试试验验u单单向向扩扩散散试试验验u双双向向扩扩散散试试验验u对对流流免免疫疫电电泳泳u火火箭箭免免疫疫电电泳泳u免免疫疫固固定定电电泳泳5编辑版ppt 第一节第一节 液相内沉淀试验液相内沉淀试验一一、絮状沉淀试验、絮状沉淀试验:(flocculation test(flocculation test)二二、环状沉淀试验、环状沉淀试验:(ring(ring precipitation precipitation test)test)三三、免疫浊度试验、免疫浊度试验:(immunoturbidimetry)(immunoturbidimetry)6编辑版ppt 原理原理 一、絮状沉淀试验一、絮状沉淀试验(flocculation test)方法评价：方法评价：敏感度较低、简便、敏感度较低、简便、易受抗原抗体比例易受抗原抗体比例 影响影响最适比最适比临床意义：临床意义：测定抗原抗体反应测定抗原抗体反应 的最适比。的最适比。37抗原抗体康氏试验：梅毒抗体7编辑版ppt康氏试验康氏试验是又称非特异类脂质抗原试验康氏试验是又称非特异类脂质抗原试验,可用可用于梅毒筛查。于梅毒筛查。原理原理:使用酒精浸泡牛心粉，提取磷脂部分做使用酒精浸泡牛心粉，提取磷脂部分做为抗原，加入胆固醇以增加灵敏度，与待测为抗原，加入胆固醇以增加灵敏度，与待测血清中抗体血清中抗体(反应素反应素)，在电解质作用下，抗，在电解质作用下，抗原抗体形成可见的沉淀反应。原抗体形成可见的沉淀反应。请问目前常用的梅毒筛查有哪些方法请问目前常用的梅毒筛查有哪些方法?梅毒感染的确证实验有哪些梅毒感染的确证实验有哪些?8编辑版ppt抗抗 原原 稀稀示示 意意 图图释释1:21:41:81:16 1:32 1:64 1:128各管抗原倍比稀释各管抗原倍比稀释加入抗血清加入抗血清各管抗体量不变各管抗体量不变振摇振摇 混匀、混匀、37孵育孵育沉淀量不同沉淀量不同出现沉淀量最多的管为最适比例管。出现沉淀量最多的管为最适比例管。轻摇轻摇 絮状沉淀试验絮状沉淀试验AgAbAg9编辑版ppt抗体稀释度抗原稀释度110120140180116013201640对照15+-110+-120+-140-+-+-180-+-方阵滴定法方阵滴定法10编辑版ppt 原理原理 二、环状沉淀试验二、环状沉淀试验(ring precipitation test)方法评价：方法评价：敏感度较低、简便、敏感度较低、简便、快速、实用、只能定快速、实用、只能定性不能定量、缺乏多性不能定量、缺乏多对分辨力。对分辨力。临床意义：临床意义：鉴定血迹、鉴定血迹、诊断炭疽诊断炭疽AbAg沉淀管内径沉淀管内径1.51.52mm2mm阳性：阳性：1 15min5min出现沉淀环出现沉淀环阴性：阴性：30min30min不不出现沉淀环出现沉淀环11编辑版ppt 三、免疫浊度试验三、免疫浊度试验1.1.透射比浊法透射比浊法（transmission turbidimetry)2.2.免疫胶乳比浊法免疫胶乳比浊法(immunolatex turbidimetry)3.3.散射散射比浊法比浊法（nephelometry)速率散射比浊法速率散射比浊法(rate nephelometry)终点散射比浊法终点散射比浊法(endpoint nephelometry)12编辑版ppt海德堡进行的沉淀分析海德堡进行的沉淀分析1、在抗体浓度过、在抗体浓度过量时，随着抗原量时，随着抗原浓度不断上升免浓度不断上升免疫沉淀逐渐增多疫沉淀逐渐增多（如右图）（如右图）原理：原理：抗原抗原抗抗原原抗抗体体复复合合物物13编辑版ppt检测器检测器透射测定散射比浊2.2.抗原抗体复合物，在一定光线照射下，抗原抗体复合物，在一定光线照射下，可产生散射光及透射光，并用仪器检测这些光可产生散射光及透射光，并用仪器检测这些光的强度，可反应抗原抗体复合物的量。的强度，可反应抗原抗体复合物的量。原理：原理：14编辑版pptI0入射光 透射光I 吸光度A=lgI0/Ik1bC复合物Ag-Ab 复合物1.1.原理：原理：一）透射比浊法C复合物k2C抗原（Ab过量）吸光度A k3C抗原足够大（35-100nm），要形成一定浊度15编辑版ppt稀释待检样品和标准品 （5ul)ApoB抗血清1m(过量)（132164）孵育一定时间测定吸光度(A340nm)值A吸光度抗原浓度标准曲线2.2.技术要点（载脂蛋白技术要点（载脂蛋白B B的检测）的检测）按按log-logit转换或转换或y=ax3+bx2+cx+d方程进行曲方程进行曲线拟合，制备剂量线拟合，制备剂量-反应曲线反应曲线16编辑版ppt4.4.方法评价：方法评价：v操作简单、快速、易于自动化；v敏感度比单扩高10倍，但比散射比浊低（数量多而大的抗原抗体复合物才适用本方法）；v反应时间长(测定的是第二反应阶段)；v抗体用量较大。3.3.影响因素：影响因素：v注意抗原的稀释；v标本应避免混浊。17编辑版ppt代表性仪器：全自动系列化分析仪：olympus AU560,日立7600全自动生化分析仪。特定蛋白分析仪检测前白蛋白、载脂蛋白A、B等。18编辑版ppt1.1.原理原理入射光I0透射光I吸光度A=lgI0/Ik1bC复合物C复合物k2C抗原(抗体过量)二)免疫胶乳比浊法吸光度A k3C抗原19编辑版ppt2.2.技术要点技术要点稀释待检样品和标准品 加抗体致敏胶乳溶液 孵育一定时间测定吸光度(A340nm)值制备剂量制备剂量-反应曲线反应曲线A吸光度抗原浓度标准曲线20编辑版ppt3.3.方法评价方法评价 ：l 敏感度高（达ng/L）；l 稳定、可靠，特异性好；l 不需特殊仪器设备；l 血清中的 RF可与IgG Fc段结合，使IgG致敏胶乳颗粒出现非特异性凝集，用F(ab)2片段代替IgG既可消除此干扰。21编辑版ppt代表性仪器：普通分光光度计自动生化分析仪：olympus AU56022编辑版ppt三)散射比浊法I0入射光 散射光I（596）II042（dn/dc)2 Mc(1+cos)N24散射光强度颗粒含量 正相关颗粒大小 正相关入射光波长 负相关测量散射光的角度 正相关23编辑版ppt颗粒直径入射光波长颗粒直径入射光波长颗粒直径或入射光波长颗粒直径或入射光波长散射角度尽可能大：提高灵敏度；排除大颗粒的干扰散射角度尽可能大：提高灵敏度；排除大颗粒的干扰24编辑版ppt第一阶段第二阶段速率散射比浊终点散射比浊25编辑版pptI0入射光 IK1C复合物散射光I（596）C复合物K2C抗原（Ab浓度恒定）IK3C抗原1.原理：抗原与过量抗体反应达到平衡时，形成复合物不再增加，并在形成絮状沉淀前，测定此时的溶液浊度。抗原抗体作用30-120min内比浊，形成较小复合物（一）终点散射比浊法26编辑版ppt2.技术要点稀释待检样品和标准品 加最适工作浓度的抗体孵育测定散射光强度 I（450nm）绘标准曲线浊度抗原浓度标准曲线27编辑版ppt4secI2I2-I1抗原浓度I1阀值7.5s-120sI1I1阀值稀释标本全量标本1/10标本量28编辑版ppt定时散射比浊法测定原理示意图定时散射比浊法测定原理示意图 29编辑版ppt4.方法评价：v可自动化；v敏感度达ug/L水平，高于透射比浊法；v但反应时间较长(第二阶段)。3.抗原过量检测：v抗体过量：v阈值限：。30编辑版ppt代表性仪器：Dade Behing公司：BN-100 BN-Prospec BN-特定蛋白系统。31编辑版pptBN ProSpec全自动特定蛋白分析仪全自动特定蛋白分析仪32编辑版ppt（二）速率散射比浊法1.原理：是抗原抗体结合反应的动力学测定法；是抗原抗体结合反应的动力学测定法；速速率率是是指指抗抗原原抗抗体体反反应应在在单单位位时时间间内内形形成成免免疫复合物的量；疫复合物的量；连连续续测测定定各各时时间间复复合合物物形形成成的的速速率率与与其其产产生生的的散散射射光光信信号号联联系系在在一一起起，形形成成动动态态的的速速率率散射比浊法，每项检测仅散射比浊法，每项检测仅1 12min2min即可完成。即可完成。33编辑版ppt抗原抗体复合物形成的速率抗原抗体复合物形成的速率累计时间（累计时间（s s）形成）形成ICIC总量速率总量速率累计时间（累计时间（s s）形成）形成ICIC总量速率总量速率 5 5 8 81010 1313 5 51515 252512122020 606035352525 15015090903030 23023080803535 300300 70704040 360360 60604545 415415 55555050 450450 45455555 480480 30306060 500500 202034编辑版ppt抗原抗体反应速率的动态变化抗原抗体反应速率的动态变化35编辑版ppt36编辑版ppt2.技术要点稀释待检样品和标准品 加最适工作浓度的抗体孵育立即比浊（速率单位RU）绘标准曲线RU抗原浓度标准曲线37编辑版ppt全量标本量适量标本稀释标本ARRAY 360：自动进行1:6、1:36、1:216和1:1296等稀释度稀释，也可以根据需要临时设定稀释度。38编辑版ppt3.方法评价：v可自动化，快速；（在第一阶段检测、60s内完成测定）v敏感度高，最小检出量达g/L水平；v重复性好（CV5%)；v但抗体的质量要求高，仪器和试剂较贵。39编辑版ppt代表性仪器：美国BECKMAN公司：全自动特定蛋白分析系统ARRAY360IMMAGE全自动特定蛋白分析仪 40编辑版pptIMMAGE全自动特定蛋白分析仪全自动特定蛋白分析仪41编辑版ppt1.抗原抗体比例：抗原抗体比例：抗体过量；抗原过量监测抗体过量；抗原过量监测 2.抗体的质量：抗体的质量：特异性高、亲和力好、效价高特异性高、亲和力好、效价高 3.增浊剂的使用增浊剂的使用：（提高反应速度）：（提高反应速度）PEG6000，tween-20（一）免疫比浊分析的影响因素免疫比浊分析的影响因素 四）、免疫比浊分析的影响因素和临床应用四）、免疫比浊分析的影响因素和临床应用42编辑版ppt 4.伪浊度伪浊度:标本（高血脂、反复冻融）标本（高血脂、反复冻融）抗体：效价低、特异性差抗体：效价低、特异性差 PEG浓度过高浓度过高 器材不清洁器材不清洁 5.入射光光源和波长：入射光光源和波长：氦氖光源，氦氖光源，633nm 6.标准曲线制备与质量控制标准曲线制备与质量控制 43编辑版ppt（二）临床应用（二）临床应用免疫球蛋白免疫球蛋白IgG、IgA、IgM、链、链、链、免疫球蛋白亚链、免疫球蛋白亚类；类；补体补体C3、C4；血浆蛋白：前白蛋白血浆蛋白：前白蛋白(PAB)、白蛋白、白蛋白(ALB)、1-抗胰蛋白抗胰蛋白酶酶(1-AT)、2-微球蛋白微球蛋白(2-MG)、转铁蛋白、转铁蛋白(TRF)、铜、铜蓝蛋白蓝蛋白(CER)、结合珠蛋白、结合珠蛋白(HP)、C-反应蛋白反应蛋白(CRP)、载、载脂蛋白脂蛋白ApoAI、ApoB、脂蛋白、脂蛋白(a)、类风湿因子、类风湿因子(RF)、尿、尿微量蛋白系列和某些治疗性药物浓度等。微量蛋白系列和某些治疗性药物浓度等。44编辑版ppt原理：将可溶性抗原与相应分别放入凝胶（如琼脂、琼脂糖等）内进行扩散，形成浓度梯度，在抗原抗体浓度比例恰当的位置，形成肉眼可见的免疫沉淀线、沉淀环。第二节 凝胶内沉淀试验分类：单相琼脂扩散试验(single gel diffusion test)双相琼脂扩散试验(double gel diffusion test）凝胶免疫电泳(gel immuno-electrophoresis)45编辑版ppt抗体+琼脂一、单相琼脂扩散试验(一)原理Ag沉淀环的大小与抗原浓度呈正相关。46编辑版ppt37 24-48h(二)技术要点系列浓度标准品标本测量沉淀环直径抗体抗体+1.5%+1.5%琼脂琼脂5656度度绘制标准曲线47编辑版pptT T1 1为为161624h24h；T T2 2为为242448h48h；T T3 3为为48h48h以以上上,可见可见T T3 3为直线，为直线，T T1 1为反抛物线为反抛物线t t1 1为为161624h24h；t t2 2为为242448h48h；t t3 3为为48h48h以以上上,可见可见t t1 1为直线，为直线，t t3 3为反抛物线为反抛物线ManciniMancini曲线曲线大分子抗原大分子抗原FaheyFahey曲线曲线小分子抗原小分子抗原48编辑版pptC(mg/ml)d2(mm)Mancini曲线扩散扩散48h、大分子抗原大分子抗原d(mm)Fahey曲线扩散扩散24h、小分子抗原、小分子抗原logC绘制标准曲线：49编辑版ppt(三)影响因素1.抗原分子量抗原分子量 分子量大，扩散慢，沉淀环较小；分子量小，扩散快，沉淀环相对较大。要求待检血清和抗原标准品在血清学上具有均一性，否则可能出现结果偏高或偏低。2.抗体种类抗体种类 实验证明马抗血清为1-10IU/ml，羊为0.4-4IU/ml，兔抗血清可测抗原0.1-1IU/ml，为提高实验敏感度，应选兔抗血清兔抗血清。50编辑版ppt3.抗体稀释度抗体稀释度 抗体浓度易小，因相应沉淀环增大，不同浓度抗原间的差别较显著，方法敏感度较高。但沉淀环过大，常造成边缘糊不清，致使测量误差也增大。因此要求在沉淀环清晰的基础上加大稀释度以提高敏感度。51编辑版ppt4.扩散时间与温度扩散时间与温度 扩散时间赿长，扩散温度在4-37范围内，升高温度，反应时间缩短。注意扩散要达到终点后，其沉淀环直径才与抗原含量呈一定关系。抗原含量越高，达到一定关系所用扩散时间越长。52编辑版ppt5.每次都要做标准曲线，并必须加测质控血清；6.双环现象（重链病）；7.单克隆抗体测正常人多态性抗原，则抗体相对过量，结果降低；8.多克隆抗体测定单克隆蛋白，则抗原相对过量，结果增加。53编辑版ppt(四)方法评价l一种简便、实用的定量方法；l不需特殊仪器制备；l灵敏度稍差为1.25mg/L；l耗时长,影响因素多（操作规范时，重复性和线性尚可依赖），目前临床中少用。54编辑版ppt(一一)原理：原理：AbAg染色标本图染色标本图1.1.抗原抗体双向自由扩散抗原抗体双向自由扩散2.242.24小时出结果小时出结果3.3.呈现沉淀线或弧呈现沉淀线或弧 二、双向琼脂扩散试验二、双向琼脂扩散试验(double gel diffusion test)55编辑版ppt (二二)操作步骤操作步骤制板 1.5%琼脂、4ml每片打孔 孔径3mm，孔间距35mm加样 孵育 37、24-48h56编辑版ppt 应用(三三)双向琼脂扩散试验的应用双向琼脂扩散试验的应用抗原或抗体的有无及纯度；估算抗原及抗体的相对含量及相对分子量；分析抗原的性质；滴定抗体的效价。57编辑版ppt 4.4.抗原抗体纯度鉴定抗原抗体纯度鉴定 “1 1”为单一抗原抗体系统。为单一抗原抗体系统。“n n”为多个抗原抗体系统。为多个抗原抗体系统。*可以用混合抗原鉴定抗体纯度。可以用混合抗原鉴定抗体纯度。*可以用混合抗体鉴定抗原纯度。可以用混合抗体鉴定抗原纯度。58编辑版ppt 1.1.检测未知抗原或抗体检测未知抗原或抗体AgAbA B C D E F A:A:浓度浓度AgAg、AbAb及扩散率近似；及扩散率近似；B B：浓度：浓度AgAg、AbAb近似，扩散率近似，扩散率AgAgAb Ab；C C：浓度：浓度AgAg、AbAb近似，扩散率近似，扩散率AgAgAb Ab；D D：浓度：浓度AgAgAbAb，扩散率近似；，扩散率近似；E E：浓度：浓度AgAgAbAb，扩散率，扩散率AgAgAb Ab；F F：浓度：浓度AgAgAbAb，扩散率，扩散率AgAgAb Ab；59编辑版ppt2 2表示标准表示标准AgAg1 1表示待检表示待检AgAg待检待检AgAg与标准抗原完全吻合；与标准抗原完全吻合；待检待检AgAg中含有与标准中含有与标准AgAg相同的相同的AgAg；还有另外的；还有另外的AgAg与与AbAb相对应；相对应；待检待检AgAg有与有与AbAb相对应的相对应的AgAg，但与标准但与标准AgAg不同；不同；待检待检AgAg与标准与标准AgAg性质相同；性质相同；但含量较低；但含量较低；60编辑版ppt 1.1.周围周围6 6个孔放不同稀释度的相应个孔放不同稀释度的相应AbAb。2.2.以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为 该抗体的效价。该抗体的效价。3.3.可进行任意稀释。可进行任意稀释。61编辑版ppt三、免疫电泳技术(immunoelectrophoresis technique)电泳技术+免疫扩散技术特点：1.高特异性；2.高分辨率、快速、微量。62编辑版ppt 电泳原理电泳原理pH88.68.6 缓冲液中缓冲液中阴粒离子多阴粒离子多等电点等电点pH3pH34 4分子量较小分子量较小等电点等电点pH5pH56 6分子量较大分子量较大阴粒离子少阴粒离子少向正极电泳力小向正极电泳力小向正极电泳力大向正极电泳力大63编辑版ppt1.1.电场强度：电场强度：恒定电流恒定电流2 24mA/cm,4mA/cm,恒定电压恒定电压2 210V/cm10V/cm4.4.电渗作用：电渗作用：在电场中液体相对于固体的移动在电场中液体相对于固体的移动。2.2.溶液溶液pHpH值：值：缓冲液偏碱性，蛋白质带负电荷缓冲液偏碱性，蛋白质带负电荷3.3.离子强度：离子强度：高，泳动慢；低，泳动快，缓冲能力高，泳动慢；低，泳动快，缓冲能力0.05mol0.05molL L、pH8.6pH8.6的巴比妥的巴比妥缓冲液缓冲液64编辑版ppt 电渗作用带负电的琼脂带负电的琼脂静电感应静电感应-+-+AV0-V65编辑版ppt一）、对流免疫电泳(counter immunolelctrophresis,CIEP)(一)原理 在pH8.6的琼脂凝胶中：抗体球蛋白：带少量负电荷且分子较大，因此电泳力电渗力，泳向负极，放(+)；抗原蛋白质：带较强负电荷且分子较小，因此电泳力电渗力，泳向正极，放()；电泳一定时间后，二者相向运动，形成肉眼可见的沉淀线。66编辑版ppt 示意图示意图I=3I=34mA/cm4mA/cm、30min30min+1 1：AgAg与与AbAb对应；对应；2 2：AbAbAgAg，AgAg为为 弱阳性弱阳性3 3：AgAgAbAb，AgAg强阳性强阳性4 4：AgAgAbAb，AgAg含量较高；含量较高；-1.2%巴比妥琼脂凝胶巴比妥琼脂凝胶67编辑版ppt(三)方法评价 简便、快速；敏感度较双相琼脂扩散试验高810倍，但分辨力较其低；可测出ug/ml级的蛋白质；目前已不推荐使用。68编辑版ppt三、火箭免疫电泳（rocket immunoelectrophoresis,RIE)单向免疫扩散 +电泳技术原理AbAg峰形高低与抗原量成正比69编辑版ppt1.1.制板：制板：5656度将抗体混于凝胶中度将抗体混于凝胶中2.2.打孔：打孔：3.3.加样加样 4.4.电泳：电泳：抗原向正极泳动抗原向正极泳动5.5.观察沉淀峰观察沉淀峰6.6.绘制标准曲线绘制标准曲线+68mm5mm70编辑版ppt沉淀峰高沉淀峰高抗原浓度抗原浓度1.1.测定沉淀峰高度测定沉淀峰高度2.2.在标准曲线上查找在标准曲线上查找 相应抗原浓度相应抗原浓度标准曲线标准曲线 标准曲线71编辑版ppt2.2.琼脂应为无电渗琼脂应为无电渗或电渗很小或电渗很小1.1.电泳顶部云雾状或电泳顶部云雾状或 圆形，应继续电泳圆形，应继续电泳3.3.标本标本 多时，应将琼多时，应将琼 脂板置于电泳槽脂板置于电泳槽 上，搭桥并开启上，搭桥并开启 电源后加样，否则电源后加样，否则 形成宽底。形成宽底。4.IgG4.IgG在在pH8.6pH8.6的的 缓冲条件下净缓冲条件下净 电荷为零，因电荷为零，因 此需经甲醛此需经甲醛 化处理化处理 注意事项72编辑版ppt（四）方法评价：与双扩比较：敏感敏感 较单扩散敏感较单扩散敏感10-1610-16倍倍（达ug/ml以上）；快速快速 仅需仅需1h1h左右左右。但敏感度仍不高,方法繁琐,影响因素较多。用途用途 适用快速诊断检测。如乙型肝炎抗原的快适用快速诊断检测。如乙型肝炎抗原的快速检测。速检测。73编辑版ppt(一)原理观察沉淀弧根据沉淀弧的数量、位置和形态，可分析样品中所含抗原成分及其性质。双相免疫扩散：区带电泳：电泳抗原抗体四、免疫电泳(immunoelectrophoresis,IEP)74编辑版ppt(二)操作步骤莊榮輝(1985)博士論文.p.81+-cc染色脫色1.制板、打孔、加样2.电泳 1.5-2h(4-6Vcm)3.打槽加抗血清4.孵育 37 24h5.染色脱色观察75编辑版ppt观察结果76编辑版ppt（三）方法评价：1.为定性实验；2.扩散时间长，沉淀线的数目和分辨率受许多因素影响，结果较难分析；3.免疫电泳分辨率高，可分出人血清中2030种抗原成分，可鉴定混合抗原中各组分。77编辑版ppt四）免疫固定电泳(immunofixation electrophoresis,IFE)（一）原理：将血清蛋白在载体上电泳分离后，将抗血清直接加于其表面，或将浸有抗血清的滤纸贴于其上，抗原与对应抗体直接发生沉淀反应，形成的复合物嵌于固相支持物中。78编辑版ppt+-37 30min(二)操作步骤电转移79编辑版ppt+-+-+-+-+-+-抗IgG抗IgA抗IgM抗轻链抗轻链抗人全血清作用30min染色观察80编辑版ppt左图为左图为IgG IgG 型型,中图为中图为IgG IgG 型，右为正常型，右为正常 SPSPG G A AM M SPSPG G A AM M SPSPG GA AM M 免疫固定电泳示意图免疫固定电泳示意图81编辑版ppt（三）评价：1.分辩力强、敏感度高、快速仅需数小 时，结果易分析；2.主要用于M蛋白的鉴定与分型。82编辑版ppt1.1.什么是沉淀反应？什么是沉淀反应？2.2.沉淀反应的特点？沉淀反应的特点？3.3.免疫浊度法的原理、方法与分类？免疫浊度法的原理、方法与分类？4.4.单向扩散试验的原理和应用？单向扩散试验的原理和应用？5.5.免疫固定电泳的原理及临床应用价值？免疫固定电泳的原理及临床应用价值？6.6.何谓何谓ManciniMancini曲线？曲线？7.7.何谓何谓FaheyFahey曲线？曲线？8.8.影响免疫比浊测定的因素有哪些？影响免疫比浊测定的因素有哪些？9.9.抗原性质分析出现哪三种结果现象？结果解释？抗原性质分析出现哪三种结果现象？结果解释？10.10.自动化免疫比浊法发展趋势和应用前景？自动化免疫比浊法发展趋势和应用前景？思考题思考题83编辑版ppt沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合而出的沉淀现象下发生特异性结合而出的沉淀现象.根据沉淀反应根据沉淀反应介质和检测方法的不同，将其分为液体内沉淀试介质和检测方法的不同，将其分为液体内沉淀试验、凝胶内沉淀试验和凝胶免疫电泳试验三大基验、凝胶内沉淀试验和凝胶免疫电泳试验三大基本类型。本类型。免疫浊法度测定为液体内沉淀试验；单向扩散试免疫浊法度测定为液体内沉淀试验；单向扩散试验平板法是一种定量的凝胶内沉淀试验，免疫电验平板法是一种定量的凝胶内沉淀试验，免疫电泳技术是电泳分析与沉淀反应的结合产物，常见泳技术是电泳分析与沉淀反应的结合产物，常见的有对流免疫电泳、火箭免疫电泳、免疫电泳、的有对流免疫电泳、火箭免疫电泳、免疫电泳、免疫固定电泳等。免疫固定电泳等。小小 结结84编辑版ppt85编辑版ppt