实验四地中海贫血与红细胞渗透脆性试验课件

实验四：地中海贫血与红细胞渗透脆性试验实验四：地中海贫血与红细胞渗透脆性试验1ThalassemiaThalassemia地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一全球有全球有3.5亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的2%）中国南方不同高发地中国南方不同高发地区人群携带率区人群携带率 3 24%2Thalassemia地中海贫血是全球最大的单基因遗传病之一地贫的发病率、地域分布及危害地贫的发病率、地域分布及危害 地地中中海海沿沿岸岸国国家家、东东南南亚亚及及中中国国南南方方多多见见；广广西西发发病病率率为为2 20 0%；重重型型地地贫贫给给家家庭庭社社会会带带来来沉沉重重的的经经济济负负担担和和难难以以估估量量的的精精神神负负担担；3地贫的发病率、地域分布及危害 地中海沿岸国家、东南亚及中国南44中国南方人群地贫基因携带率5中国南方人群地贫基因携带率5高高发发区区人人群群遗遗传传负负荷荷评评估估6高发区人群遗传负荷评估6定定义义地地中中海海贫贫血血（海海洋洋性性贫贫血血、珠珠蛋蛋白白生生成成障障碍碍性性贫贫血血）：由由于于遗遗传传性性珠珠蛋蛋白白基基因因缺缺陷陷（突突变变、缺缺失失等等）引引起起的的一一种种或或多多种种珠珠蛋蛋白白肽肽链链生生物物合合成成减减少少或或完完全全不不能能合合成成，导导致致珠珠蛋蛋白白肽肽链链间间的的正正常常平平衡衡不不能能维维持持，同同时时成成人人型型Hb（HbA：22）合合成成降降低低的的一一种种遗遗传传性性血血红红蛋蛋白白病病。7定义地中海贫血（海洋性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血）：7其其特特点点是是由由于于珠珠蛋蛋白白基基因因的的缺缺陷陷使使血血红红蛋蛋白白中中的的珠珠蛋蛋白白肽肽链链有有一一种种或或几几种种合合成成减减少少或或不不能能合合成成，导导致致血血红红蛋蛋白白的的组组成成成成分分改改变变。本本组组疾疾病病的的临临床床症症状状轻轻重重不不一一，大大多多表表现现为为慢慢性性进进行行性性溶溶血血性性贫贫血血。8其特点是由于珠蛋白基因的缺陷使血红蛋白中的珠蛋白肽链有一种或大家学习辛苦了，还是要坚持继续保持安静继续保持安静9大家学习辛苦了，还是要坚持继续保持安静9地地中中海海贫贫血血的的病病理理生生理理10地中海贫血的病理生理101111-地地中中海海贫贫血血 重型重型地贫地贫（HbBarts胎儿水肿综合征）胎儿水肿综合征）4个个基因都缺失了基因都缺失了(-/-)，在孕后期或出生后即死亡。在孕后期或出生后即死亡。12-地中海贫血 重型地贫121313141415151616重重度度-地地中中海海贫贫血血17重度-地中海贫血17重度重度-地中海贫血地中海贫血骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻梁塌陷、颧骨突起等18重度-地中海贫血骨髓腔扩大，骨质变薄，头大、眼间距增宽、鼻重重度度-地地中中海海贫贫血血19重度-地中海贫血19重重度度-地地中中海海贫贫血血20重度-地中海贫血20重重度度-地地中中海海贫贫血血21重度-地中海贫血21重重度度-地地中中海海贫贫血血22重度-地中海贫血22重重度度-地地中中海海贫贫血血23重度-地中海贫血2324242525结结 论论1.广西人群地贫基因携带率很高。一方为基一方为基因携带者，推荐配偶行基因检测因携带者，推荐配偶行基因检测。2.父母双方同类型地贫者需行遗传咨询和产父母双方同类型地贫者需行遗传咨询和产前诊断前诊断。3.产前诊断可预防重症和中间型地贫患儿出生，结合地贫筛查几乎可以阻断其出生。4.绒毛活检和羊膜腔穿刺均可行地贫产前诊绒毛活检和羊膜腔穿刺均可行地贫产前诊断断，但推荐羊膜腔穿刺推荐羊膜腔穿刺。5.无创性产前诊断无创性产前诊断是未来发展的方向。26结 论1.广西人群地贫基因携带率很高。一方为基因携带者，推羊羊膜膜腔腔穿穿刺刺术术27羊膜腔穿刺术27羊羊膜膜腔腔穿穿刺刺术术28羊膜腔穿刺术28实验室检查实验室检查29实验室检查29-靶型靶型RBC30-靶型RBC30 红细胞脆性实验红细胞脆性实验Erythrocyte fragility testErythrocyte fragility test地贫患者地贫患者正常人正常人31 红细胞脆性实验地贫患者正常人31血红蛋白电泳血红蛋白电泳Hemoglobin electrophoresisHemoglobin electrophoresis32血红蛋白电泳Hemoglobin electrophores3333 chain disappear (0-thal major)chain disappear (HbBarts hydrop fetalis)12341234 肽链分析肽链分析Peptide chain analyses 34 单管多重单管多重PCR35单管多重PCR35PCR-ASO36PCR-ASO36诊断诊断(Diagnosis)(Diagnosis)临临床床特特点点实实验验室室检检查查父父母母调调查查阳阳性性（基因分析）（基因分析）37诊断(Diagnosis)临床特点实验室检查父母调查阳地中海贫血初筛检查地中海贫血初筛检查MCV 80fl 和和/或或MCH 27pg,则则高高度度怀怀疑疑为为地地贫贫;红红细细胞胞渗渗透透脆脆性性试试验验阳阳性性(Red cell os motic fragility test,ROFT;0.60):即即可可怀怀疑疑为为地地贫贫;HbA2 3.5%,则则为为地地贫贫基基因因携携带带者者38地中海贫血初筛检查MCV 80fl 和/或MCH 地中海贫血确诊试验地中海贫血确诊试验地贫诊断基因芯片地贫诊断基因芯片(Thalachip);地贫基因诊断条膜地贫基因诊断条膜(反向点杂交反向点杂交)/一管法多重一管法多重PCRASO寡核苷酸探针点杂交寡核苷酸探针点杂交DNA测序测序39地中海贫血确诊试验地贫诊断基因芯片(Thalachip)鉴别诊断鉴别诊断(Differential(Differential diagnosis)diagnosis)缺铁性贫血缺铁性贫血遗传性球形红细胞增多症遗传性球形红细胞增多症传染性肝炎或肝硬化传染性肝炎或肝硬化40鉴别诊断(Differential diagnosis)缺实验：红细胞渗透脆性检验实验：红细胞渗透脆性检验(试剂盒一管法试剂盒一管法)41实验：红细胞渗透脆性检验41【检验原理】【检验原理】贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。贫血症者常伴有红细胞渗透脆性的改变。测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，测定红细胞在一定渗透浓度下的溶血率，可筛查是否贫血，特别是可筛查是否贫血，特别是溶血率降低引起溶血率降低引起的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）的贫血（如地贫症、严重缺铁性贫血症）42【检验原理】42【主要组成成分】【主要组成成分】组成：由SG-A母液（红细胞渗透脆性检测液）；SG-B母液（终止红细胞溶血液）母液（终止红细胞溶血液）；SG-C母液（红细胞溶血液）组成；成分：SG-A母液采用氯化钠（NaCl）、磷酸氢二钠（Na2HPO4）、磷酸二氢钠（NaH2PO4）制成；SG-B母液采用氯化钠制成；母液采用氯化钠制成；SG-C母液采用皂素（saponin）制成。43【主要组成成分】43【样品要求】【样品要求】新鲜抗凝全血新鲜抗凝全血（肝素肝素、EDTA-Na、ACD），置28保存。已发生溶血或有血凝块的标本为不合格样品。标本采集后，测试应在三日内完成。44【样品要求】44【实验操作】【实验操作】【实验操作】【实验操作】1、取试管一只，加入A A试验液试验液试验液试验液1ml1ml，放3737，预热，预热，预热，预热1-21-2分钟分钟分钟分钟。2、加入待测抗凝全血待测抗凝全血待测抗凝全血待测抗凝全血1010 l l，立刻混匀，继续放在3737保温保温保温保温5 5分分分分钟钟钟钟。3、5 5分钟后分钟后分钟后分钟后，加入B B试验液试验液试验液试验液1ml1ml。混匀，30003000转转转转/分钟，离心分钟，离心分钟，离心分钟，离心5 5分钟分钟分钟分钟。4、将上清液轻轻倒入上清液轻轻倒入上清液轻轻倒入上清液轻轻倒入1.0cm 1.0cm 1.0cm 1.0cm的比色杯中的比色杯中的比色杯中的比色杯中（切勿搅动试切勿搅动试切勿搅动试切勿搅动试管底的红细胞管底的红细胞管底的红细胞管底的红细胞），于530nm530nm波长读取光密度波长读取光密度波长读取光密度波长读取光密度D1D1（以纯化水作空白对照）。（勿倒掉比色杯中的溶液）（勿倒掉比色杯中的溶液）（勿倒掉比色杯中的溶液）（勿倒掉比色杯中的溶液）5、向试管中加入向试管中加入向试管中加入向试管中加入C C试验液试验液试验液试验液0.5ml0.5ml，混匀，待血液全部溶血待血液全部溶血待血液全部溶血待血液全部溶血（透明红色）后，将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀将比色杯中已比色的溶液倒入试管中混匀。6、将混匀后的溶液，倒入比色杯中，再于将混匀后的溶液，倒入比色杯中，再于将混匀后的溶液，倒入比色杯中，再于将混匀后的溶液，倒入比色杯中，再于530nm530nm波长比色，波长比色，波长比色，波长比色，读取光密度读取光密度读取光密度读取光密度D2D2。7、按下列公式计算出溶血率百分比。溶血溶血溶血溶血 =D1 D1 100 100 D2 X 1.25 D2 X 1.2545【实验操作】溶血 =D1